定性测定的性能验证--李金明

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1、定性测定的性能评价及定性测定的性能评价及 室内质控室内质控李金明卫生部临床检验中心重庆 2010.4.23临床检验定性测定临床检验定性测定免疫测定：感染性疾病抗原、抗体核酸和基因检测微生物检验细胞学检验寄生虫检验临床定性检验的报告方式临床定性检验的报告方式有反应、无反应、阳性、阴性检出、未检出是、不是（或有、没有）什么时候进行性能验证什么时候进行性能验证使用新的检测试剂或系统时更换检测试剂或系统时临床实验室为什么更新检测试剂或临床实验室为什么更新检测试剂或 系统系统新的试剂或系统更易于操作更高的检测性能更经济更能满足实验室测定要求性能验证前的准备性能验证前的准备应熟悉待验证的试剂或系统进行必要

2、的培训，包括样本的处理和储存、试 剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合 理的解释以及系统的质量控制等。制定质量保证计划确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）确定比较的方法CLSIEP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline定定 义义筛查试验筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群 （或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血 清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳

3、性结果的检出。因此通常筛查试验比 诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查 试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。 尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但 是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性 结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传 播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。定定 义义诊断试验诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 因临床上对治疗的及时的要求，诊断试验应具 有很好的敏感性和特异性。如果诊

4、断试验后还 进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可 以稍微降低。定定 义义确认试验确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗 体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就 是一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。定定 义义重复性重复性：同一被测对象在多次处于不同情况下的 检测中结果的一致性；注：a)不同的情况包括： 检测的原理或方法、结果观察者、测试仪器、地 点、仪器使用状态和时间；b）重现性也用来描述 定量

5、实验中结果的离散特征。测定下限测定下限（Detectability）：是指超过零剂量精密度的 最低抗原浓度，可通过 t 分布（一边拖尾，因为此时 曲线只有上升趋势）计算在测定下限时的吸光度值的 均值差。分析敏感性分析敏感性（Sensitivity): 是指一实验的测定反应对待 测物质浓度变化的改变，即dR/dC。定 义临床敏感性临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中， 其检测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现阳性结果和确定患者患病）；注：该 临床疾病必须由不依赖于被评价试验的标准确 定。临床特异性临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中， 其检测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。定

6、义阳性测定能力指数（阳性测定能力指数（DI（）：（）：可定义为一 实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力 （通常称为敏感性）； DI（）=真阳性 /（真阳性+假阴性）100% 阴性测定能力指数（阴性测定能力指数（DI（）：（）：则为对阴性 样本测定给出阴性结果的能力（通常称为特 异性）； DI（）= 真阴性/（真阴性+假 阳性）100% 定 义阳性结果的可靠性（预示值）：阳性结果的可靠性（预示值）：即测定为 阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =真阳性/（真阳性+假阳性）100%阴性结果的可靠性阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的 样本实际上为阴性的可靠性。 = 真阴性/（真阴性+假阴性）1

7、00%预示值对临床检验结果影响预示值对临床检验结果影响预示值对一个有预示值对一个有95%敏感性和敏感性和95%特异性的特异性的 试剂检测结果的影响（试剂检测结果的影响（100,000人）人）结结 果果10%感染率感染率1%感染率感染率检出 (+)未检出 ()检出 (+)未检出()+9,500500950504,50085,5004,95094,050敏感性 (TP/TP+FN)95%95%特异性 (TN/TN+FP)95%95%阳性预示值 TP/TP+FP9500/9500+4500=67.9%950/950+4950=16%阳性预示值 TN/TN+FN85500/85500+500=99.4

8、%94050/94050+50=99.9%样本的准备样本的准备质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。重复性评价重复性评价质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批 次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重 复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每 一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计 也提供20次重复结果。 如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第 二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实 验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不 应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所 在实验室应中止检测工作并咨询试剂

9、制造商以确 定原因并采取纠正措施。重复性评价重复性评价分析物浓度分析物浓度：接近临界值临界值。不宜用阴性或强阳 性样本。定性实验中临界点临界点比较恰当的定义为：同样一 份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获 得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。如何获得试剂或系统的临界点如何获得试剂或系统的临界点检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的 临界浓度。如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一 系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能 够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度。 这一稀释度的分析物浓度正在临界点。分析物浓度接近临界分析物浓度接近临界点点时时的的重复性实验重复性实验目的：是为正在

10、评价的检测试剂或系统建立分 析物的临界浓度，并且确保临界浓度20%的 范围处于95%区间内。操作步骤：（1）制备足够20次重复检测的同 一份样品，分别为处于临界浓度、高于临界浓 度20%和低于临界浓度20%的样品。(2)重复检 测样品20次，确定每一份样品结果为阳性和阴 性的百分比。(3)评价临界浓度是否准确？评 价+20至-20%的浓度范围是否包含于、位于或 者超出这种方法的95%区间？Cutoff5%5%Upper 95% IntervalLower 95% IntervalGrayzone结论结论临界浓度如果准确，样品重复检测应获得50%的阳性和50%的阴性结 果。如果+20%的样本获得

11、阳性结果的次数95%，并且-20%的样本获得 阴性结果的次数95%，那么这个范围位于或超出这种方法的95%区 间。因而，距离临界浓度20%的样本可用此种方法获得一致的结果。（测定下限）如果+20%的样本获得阳性结果的次数95%，并且/或-20%的样本获 得阴性结果的次数95%，那么这个范围在这种方法的95%区间内。 因而，距离临界浓度20%的样本用此种方法不会获得一致的结果，并 且此种方法的95%区间距离临界浓度20%。在一种方法的95%区间距离临界浓度20%的情况下，需要做另一个 或一系列实验以确定真正的95%区间。方法比较方法比较比较用的方法：另一种定性方法（如使用者目 前正在使用的方法）

12、、金标准方法、某种 定量方法或临床诊断。评价用样本的要求：量要足够大；稳定；两种 方法同时进行检测。样本数量：取决于评价者的目的。作为最低要 求，检测要持续到至少用比较方法获得50个阳 性样品。并且至少用比较方法获得50例阴性样 品以确定此种检测方法的特异性。方法比较方法比较持续时间：1020天。不一致结果的处理：如果比较方法不是100% 准确，可以用金标准参考方法来检测 在检测和比较方法间产生差异的样本。参考血清盘：曾经被检测过的、或者被成熟方 法检测的，或临床诊断中有意义的临床样品对 于评价定性方法来说很有价值。阳性样本浓度 高低不等。阴性样本可含有干扰物质。方法学比较方法学比较比较用方法

13、结果比较用方法结果阳性阴性总数待评价方法结果阳性ABA + B阴性CDC + D总数A + CB + DA+B+C+D敏感性=A/（A+C）100% 特异性=D/（D+B）100% 符合率=（A+D）/（A+B+C+D） 100% 性能验证的其他方面性能验证的其他方面批内和批间变异（ELISA批内CV 10%，批间15%或20%）与临床的对话。这也是一个新新的试剂或方法或系统替代旧旧的试剂或方法或系统成功应用于临床的前提。室内质控的问题室内质控的问题？概念不清不知道具体怎么做不会写室内质控的SOP不知道如何选择室内质控物不会分析室内质控的结果不愿意多思考，完成工作任务即可定性测定的室内质控方法

14、定性测定的室内质控方法非统计学方法统计学方法非统计学方法非统计学方法在检测临床标本的同时，检测一定数量（与临 床样本的数量相适应）的已知阳性（或存在靶 微生物或靶细胞）和阴性的质控样本检测有效的质控判断方法：阳性检测为阳性， 阴性检测为阴性。统计质控方法质控物浓度的选择每次（批）测定质控物的数量及放置质控规则Levey-Jennings质控图方法即刻法质控方法假阳性的统计质控方法批（批（RUN）的概念的概念在相同的条件下（地点、仪器、试剂、人员、 时间）所进行的一组测定。定性免疫测定质控物浓度的选择可选择S/CO值减去精密度测定中得到的三倍 批间CV（通常的ELISA测定批间变异（CV%） 在

15、15%左右）与该S/CO值的乘积（意即三倍 SD）仍大于1的质控血清作监测重复性的室内 质控用 计算公式：计算公式：S/CO（1-3CV%）=S/CO-3SD S/CO比值可在1.54之间。同时选择S/CO处于1.01.5左右的质控血清以 判断每次测定时试剂盒测定下限的有效性。每块板质控物的数量及位置每块板质控物的数量及位置23份弱阳性质控23份阴性质控随机放置于血液标 本中间常用质控规则的符号及定义符符 号号定定义义12S一个质控测定值超出2s控制限。13S一个质控测定值超出3s控制限。22S两个连续的质控测定值同时超出+2s或2s控制限。R4S同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间

16、的 差值超出4s控制限。41S四个连续的质控测定值同时超出+1s或1s控制限。7T七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势 变 化。10X十个连续的质控测定值同时处于均值（）的同一侧。Levey-Jennings质控图方法也称Shewhart质控图，是由美国的 Shewhart于1924年首先提出，并用于工 业产品的质量控制。二十世纪五十年代初，Levey-Jennings 将其引入临床检验的质量控制 。经 Henry和Segalove的改良，即为目前常 用的Levey-Jennings质控图。质控图Levey-Jennings质控图质控图 基本的统计学含义基本的统计学含义稳定条件下，在20个IQC结