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1、*制 药 有 限 公 司文件名称培养基适用性检查标准操作规程文件编号：SOP-QC-000-03 起 草 人：起草日期：部门：审 核 人：审核日期：页 码1/6 审 核 人：审核日期：版 本 号03 批 准 人：批准日期：生效日期颁发部门质量部分发部门质量部、质量保证室、质量控制室1目的建立培养基适用性检查的标准操作规程，保证微生物限度检查结果的准确性和可靠性。2范围适用于微生物限度检查中成品培养基、脱水培养基或按处方配制的培养基。3 职责质量部组织制订，微生物限度检查操作人员负责实施。4 内容4.1 依据： 中国药典 2015 年版四部。4.2 概述：4.2.1培养基质量是影响微生物限度检查
2、结果的重要环节。计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。4.2.2培养基适应性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价判断检验用培养基是否符合检验要求。4.2.3微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。4.2.4微生物限度检查用培养基质量控制的一般原则4.2.4.1 不同处方培养基的替代使用不能通过培养基适应性试验简单确定。4.2.4.2 如果没有特殊规定
3、，培养基配制采用蒸馏水或纯化水均可，但应采取一定措施加以检测控制；如蒸馏水应测PH 值是否为 57；采用离子交换法制备的纯化水，电阻值应不小于2等。4.2.4.3 尽量现用现配。培养基灭菌后在能取出的前提下，尽快取出，切忌在高压锅内过夜存留；固体培养基灭菌或熔化后，融化状态放置不得超过8h；固体培养基熔化再使用应不超过一次； 一般预制培养基可置洁净环境225保存，但不应超过 21 天。4.2.4.4 干粉培养基变质、过期均不应再用；预制培养基储存过程中发现浑浊、变色、长菌、严重脱水等变化均不应再用。4.3 计数培养基的适应性检查4.3.1 菌种培养基大肠埃希菌CMCC（B）44 102 金黄色
4、葡萄球菌CMCC（B）26 003 枯草芽孢杆菌CMCC（B）63 501 白色念珠菌CMCC（F）98 001 黑曲霉CMCC（F）98 003 4.3.2 培养基（1）需氧菌总数计数用培养基胰酪大豆胨琼脂被检培养基胰酪大豆胨琼脂对照培养基或胰酪大豆胨液体被检培养基胰酪大豆胨液体对照培养基（2）霉菌和酵母菌计数用沙氏葡萄糖琼脂被检培养基沙氏葡萄糖琼脂对照培养基* 制 药 有 限 公 司文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程文件编号：SOP-QC-000-03版本号：03页码：2/64.3.3 菌液制备（1）接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪
5、大豆胨液体培养基中，于3035培养 1824 小时后，将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌的新鲜培养物，用 PH7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。（2）接种白色念珠菌、黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，于 2025培养 57 天（或直到获得丰富的孢子）后，将白色念珠菌、黑曲霉的新鲜培养物用PH7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。4.3.4 培养基适用性检查（1）分别接种不大于100cfu 的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液至胰酪大豆胨液体被检培养基中
6、，或分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2 管或 2 个平皿，混匀，凝固，置3035培养时间不超过 3 天。（2）分别接种不大于100cfu 的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂被检培养基和沙氏葡萄糖琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，胰酪大豆胨琼脂被检培养基置3035培养时间不超过3 天。沙氏葡萄糖琼脂被检培养基置 2025培养时间不超过 5 天。（3）同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。4.3.5 结果判定若被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.52 范围内，且菌落形态大小与对照培养
7、基上的菌落一致，判该固体培养基的适用性检查符合规定。若被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌生长良好，判该液体培养基的适用性检查符合规定。4.4 控制菌检查用培养基适用性检查4.4.1 菌种*制 药 有 限 公 司文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程文件编号：SOP-QC-000-03版本号：03页码：3/6大肠埃希菌CMCC（B）44 102 金黄色葡萄球菌CMCC（B）26 003 铜绿假单胞菌CMCC（B）10104 乙型副伤寒沙门菌CMCC(B) 50094 4.4.2培养基肠道菌增菌液体样品培养基肠道菌增菌液体对照培养基紫红胆盐葡萄糖琼脂样品培养基紫红胆盐葡萄糖琼脂对照培养基
8、麦康凯液体样品培养基麦康凯液体对照培养基麦康凯琼脂样品培养基麦康凯琼脂对照培养基RV 沙门菌增菌液体样品培养基RV 沙门菌增菌液体对照培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂样品培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂对照培养基三糖铁琼脂样品培养基三糖铁琼脂对照培养基溴化十六烷基三甲胺琼脂样品培养基溴化十六烷基三甲胺琼脂对照培养基甘露醇氯化钠琼脂样品培养基甘露醇氯化钠琼脂对照培养基4.4.3菌液制备将大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，3035培养 1824小时，将上述培养物，用 PH7.0 无菌氯化钠 -蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶
9、液制成适宜浓度的菌悬液。4.4.4培养基适用性检查4.4.4.1液体培养基促生长能力检查：分别接种不大于100cfu 的试验菌（表 1）于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。4.4.4.2固体培养基促生长能力检查： 用涂布法分别接种不大于100cfu 的试验菌（表 1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，被检培养基和对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。* 制 药 有 限 公 司文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程文件编号
10、：SOP-QC-000-03版本号：03页码：4/64.4.4.3培养基抑制能力检查： 接种不少于 100cfu 的试验菌于被检培养基中， 在相应控制菌检查规定的培养温度及最长培养时间下培养，试验菌应不得生长。4.4.4.培养基指示特性检查 ：用涂布法分别接种不大于100cfu 的试验菌（表 1）于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养基温度及最短培养基时间下培养。被检培养基上试验菌的菌落形态特征、菌落颜色及指示剂反应情况应与对照培养基一致。表 1 控制菌检查用培养基的促生长、抑制和指示能力检查* 制 药 有 限 公 司文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程文件编号：SOP
11、-QC-000-03版本号：03页码：5/6控制菌检查培养基特性试验菌株耐胆盐革兰氏阴性菌肠道菌增菌液体培养基紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长能力 +指示能力大肠埃希菌、铜绿金黄色葡萄球菌大肠埃希菌、铜绿大肠埃希菌麦康凯液体培养基麦康凯琼脂培养基促生长能力抑制能力促生长能力 +指示能力大肠埃希菌金黄色葡萄球菌大肠埃希菌沙门菌RV 沙门菌增菌液体培养基木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基三糖铁琼脂样品培养基促生长能力抑制能力促生长能力 +指示能力指示能力乙型副伤寒沙门菌金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌溴化十六烷基三甲胺琼脂培养基促生长能力抑制能力铜绿假单胞菌大
12、肠埃希菌金黄色葡萄球菌甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力 +指示能力抑制能力金黄色葡萄球菌大肠埃希菌4.4.5结果判定液体培养基促生长能力检查时，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好表明此培养基促生长能力符合要求。固体培养基促生长能力检查时，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致表明被检培养基促生长能力符合要求。培养基抑制能力检查时，相应试验菌应不得检出。培养基指示特性检查时，被检培养基中试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等与对照培养基一致表明此培养基的指示能力符合要求。5 相关文件 无6 变更历史版本号变更原因及内容描述执行日期00 制定第一版文件200
13、7 年 09 月 15 日01 版本修订2012 年 01 月 02 日02 版本修订2014 年 02 月 17 日03 2010年版 GMP 执行2015 年 01 月 01 日7 附录附件 1 细菌检查用培养基适用性检查记录附件 2 霉菌及酵母菌检查用培养基适用性检查记录附件 3 控制菌检查用培养基适用性检查记录* 制 药 有 限 公 司文件名称： 培养基适用性检查标准操作规程文件编号：SOP-QC-000-3版本号：03页码：6/6计数菌检查用培养基适用性检查记录文件编号： SOP-QC-000-03 记录编号：一、1、需氧菌总数计数培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基样品培养基：批号：有效期
14、：生产厂家：对照培养基：批号：制造单位：2、霉菌和酵母菌总数计数培养基：沙氏葡萄糖琼脂被检培养基样品培养基：批号：有效期：生产厂家：对照培养基：批号：制造单位：二、菌种：菌种名称代码代数大肠埃希菌CMCC(B)44 102 金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26 003 枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63 501 白色念珠菌CMCC（F）98 001 黑曲霉CMCC（F）98 003 三、培养基适用性检查（1）分别接种不大于100cfu 的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液至胰酪大豆胨液体被检培养基中，或分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2 管或 2
15、 个平皿，混匀，凝固，置3035培养时间不超过 3 天。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。菌种类型样品培养基（ Y）对照培养基（D）Y/D（%）培养基 Y 与 D 上的菌落形态对比皿 1 皿 2 平均皿 1 皿 2 平均大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌（2）分别接种不大于100cfu 的白色念珠菌、黑曲霉的菌液至胰酪大豆胨琼脂被检培养基和沙氏葡萄糖琼脂被检培养基，每株试验菌平行制备2 个平皿，混匀，凝固，胰酪大豆胨琼脂被检培养基置3035培养时间不超过3 天。沙氏葡萄糖琼脂被检培养基置 2025培养时间不超过5 天。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。菌种
16、类型菌种类型样品培养基（ Y）对照培养基（ D）Y/D（%）培养基 Y 与 D 上的菌落形态对比皿 1 皿 2 平均皿 1 皿 2 平均白色念珠菌需氧菌总数计数黑曲霉白色念珠菌霉菌和酵母菌总数计数黑曲霉四、检验标准：若被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.52 范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，判该固体培养基的适用性检查符合规定。若被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌生长良好，判该液体培养基的适用性检查符合规定。五、结果判定：检验人：日期：复核人：日期：控制菌检查培养基适用性检查记录文件编号： SOP-QC-000-03 记录编号：一、培养基：配制日期：年月日实验日期：年月日1.样品培养基：批号：有效期：生产厂家：2. 对照培养基：批号：制造单位：二、菌种：菌种名称代码代数菌液的制备大肠埃希菌CMCC(B)44 102 各菌种的新鲜培养物 1ml，用 9ml PH7.0 无 菌氯化钠 -蛋白胨缓冲 液或 0.9%无菌
