鞘内移植人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株对大鼠

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1、1鞘内移植人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株对大鼠鞘内移植人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株对大鼠慢性神经痛的镇痛作用慢性神经痛的镇痛作用华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室 武汉 430030安珂 杨辉 王鹏 田玉科背景和目的背景和目的 慢性疼痛和晚期癌痛的治疗研究一直是生命科学的重要课题之一，传统的药物止痛有着诸多不可避免的缺陷。上世纪后期兴起的转基因细胞移植镇痛是疼痛治疗邻域中的新亮点，被认为是一种接近于生理的、有效的镇痛方法，脑啡肽是一种内源性的阿片肽，广泛分布于外周和中枢神经系统，是中枢神经系统重要的镇痛介质。而移植脑啡肽基因修饰的永生化星形胶质细胞

2、能否起到镇痛的作用目前未见报道。本研究拟通过鞘内移植人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株，观察并探讨对慢性神经痛大鼠痛觉异常行为的影响及其机制。方法方法 选择 40 只成年雄性 SD 大鼠（150-200 克） ，随机分为四组：空白组（Naive 组） 、保留性神经损伤组（SNI 组） 、保留性神经损伤+移植永生化星形胶质细胞株组（SNI+IAST 组）和保留性神经损伤+移植人前脑啡肽原基因修饰的永生化星形胶质细胞株组（SNI+IAST/hPPE 组） ；按照 Woolf 的方法建立右侧保留性神经损伤模型（spared nerve injury，SNI） ；SNI 后 1 周于大鼠脊

3、髓 L4-6水平鞘内置管并植入同 5溴-2-脱氧尿苷（BrdU）预培养的永生化大鼠星形胶质细胞株或人前脑啡肽原基因修饰的永生化大鼠星形胶质细胞株（约 105106个细胞） ；分别于 SNI 前、SNI 后 1 周和细胞植入后的 6 周内每周采用 Von Frey 丝法测定各组大鼠左右两侧对机械刺激的 50缩爪阈值（PWT）的差值；2细胞移植后第 3 周将 SNI+IAST/hPPE 组大鼠分为两组，即纳洛酮组和生理盐水组，观察腹腔注射纳洛酮对移植 IAST/hPPE 细胞镇痛效应的影响；细胞植入后第 6 周取各组大鼠 L4-6脊髓组织，运用免疫组织化学法和放射免疫法分别检测亮氨酸脑啡肽（L-E

4、K）在 L4-6脊髓背角组织的表达，免疫细胞化学法检测移植细胞 BrdU 的表达，借此判断细胞存活的情况。结果结果 SNI 后 1 周大鼠右足即出现痛觉异常现象，与 Naive 组相比，其余三组的左右侧 50%PWT 的差值明显增大（P0.05） ；Nave组脊髓 L-EK 表达的平均光密度值（0.35310.1130）明显低于其余三组（P0.05） ，而 SNI+IAST/hPPE 组（1.33530.2925）明显高于其他三组（P0.05） ，但高于 Nave 组（14.34390.9815 pg/mg，P0.01） ；腹腔注射纳洛酮可拮抗鞘内移植 IAST/hPPE 细胞株的镇痛效应；SNI+IAST 组和 SNI+IAST/hPPE 组脊髓背角软脑膜表面移植细胞的 BrdU免疫染色阳性，表明移植后 6 周细胞仍然存活。结论结论 鞘内移植 IAST/hPPE 细胞可以抑制慢性神经痛大鼠的痛觉异常行为，该效应与移植细胞持续分泌的脑啡肽作用于阿片受体有关。