花青素提取工艺试验

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1、花青素提取工艺试验花青素提取工艺试验实验仪器材料：实验仪器材料：仪器：打浆机、干燥箱、粉碎机、超声波震荡器、培养箱、低仪器：打浆机、干燥箱、粉碎机、超声波震荡器、培养箱、低温超速离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、水浴锅、温超速离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、水浴锅、pHpH 试纸试纸试剂：试剂：80%80%乙醇、乙醇、山芋粉、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、山芋粉、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、滤纸、石油醚、滤纸、石油醚、0.1%0.1%稀盐酸稀盐酸材料：枸杞、黑曲霉材料：枸杞、黑曲霉1.11.1 称取枸杞加入去称取枸杞加入去 PH=2PH=2 离子水中（按比例为离子水中（按比例为 1 1

2、：120g/L120g/L） ，在，在6060水浴中浸泡水浴中浸泡 4h4h，分离样液和样品，分离样液和样品， （重复（重复 2 2 次）次） ，样液待用，样液待用1.2【1.2【脱脂处理脱脂处理】将将 1.11.1 中的样品和样液与石油醚（中的样品和样液与石油醚（30-6030-60）按按 1:10g/L1:10g/L 混合，浸泡混合，浸泡 1h1h 后，于旋转蒸发仪中后，于旋转蒸发仪中 5050加热回流加热回流2h2h，所得样品溶液，放在打浆机打碎，所得样品溶液，放在打浆机打碎1.31.3 加入微生物培养液中加入微生物培养液中【固液固液 1:5】(1:5】(培养液配比培养液配比: : 山芋

3、粉山芋粉 3.3. 7 7 5%5%、蔗糖、蔗糖 1 1 5%5% 、硝酸铵、硝酸铵 0.0. 2%2%、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾 0.0. 1%1%和硫酸镁和硫酸镁0.0. 025%025% ) ) , , 120120 条件下灭菌条件下灭菌 20min,20min,在超净工作台内接种。在超净工作台内接种。黑曲霉与培养液比例为黑曲霉与培养液比例为 1111 000000。接种后放入培养箱中培养。接种后放入培养箱中培养。温度温度 3030，pH4.5pH4.5，培养时间，培养时间 72h72h1.41.4 培养后，在培养液中加入培养后，在培养液中加入 4040 倍倍 pH3.0pH3.0 的的

4、80%80%乙醇，在超声乙醇，在超声波水浴中波水浴中 5050提取提取 3h3h（过滤后重复（过滤后重复 1-21-2 次）次）1.51.5 粗过滤后，低温离心粗过滤后，低温离心 4040，4000r/min4000r/min，10min10min，去沉淀，去沉淀，取离心液取离心液1.61.6 5050旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩 0.076Mpa0.076Mpa1.71.7 放入真空干燥箱干燥，得粗品放入真空干燥箱干燥，得粗品1.81.8 上述浓缩液再次离心，加入上述浓缩液再次离心，加入 0.1mol/LHcl0.1mol/LHcl 溶液调溶液调 pH=4-pH=

5、4-4.54.5，离心分离，再次浓缩烘干，离心分离，再次浓缩烘干精提精提 1 12.12.1 上述粗品，加入温水中溶解上述粗品，加入温水中溶解2.22.2 常温下，在微滤机下常温下，在微滤机下 0.12MPa0.12MPa，进行微滤收集液体，进行微滤收集液体2.32.3 所得滤液再次放入超滤机中过滤，所得滤液再次放入超滤机中过滤，0.1MPa0.1MPa，膜流速，膜流速 1500L/h1500L/h2.42.4 取取 0.5g0.5g 活化湿活化湿 AB-AB- 8 8 树脂和树脂和 20ml20ml 液体常温吸附液体常温吸附 24h24h，离，离心心2.52.5 滤液加入滤液加入 60%60

6、%乙醇洗脱，乙醇洗脱，1-3h1-3h 左右，后左右，后 6060，减压真空，减压真空88kpa88kpa 下蒸馏回收乙醇下蒸馏回收乙醇2.62.6 所得液体加入一定量石油醚精致萃取，所得液体加入一定量石油醚精致萃取，3535减压浓缩回收，减压浓缩回收，2.72.7 真空干燥称重真空干燥称重方案二方案二1.11.1 称取称取样品和样液与石油醚（样品和样液与石油醚（30-6030-60）按）按 1:10ml1:10ml 混合，浸混合，浸泡泡 1h1h 后，于旋转蒸发仪中后，于旋转蒸发仪中 5050加热回流加热回流 2h2h，所得样品溶液，所得样品溶液，干燥滤渣用于色素提取干燥滤渣用于色素提取1.

7、21.2 以料液比为以料液比为 1 1：4040 的的 PH=3PH=3 的的 80%80%乙醇在乙醇在 5050下浸泡下浸泡 3 3 后，后，在超声波为在超声波为 40kHZ40kHZ 下，下，100W,20min100W,20min，过滤去沉淀，重复，过滤去沉淀，重复 1-21-2 次次1.31.3 粗过滤后，低温离心粗过滤后，低温离心 4040，4000r/min4000r/min，10min10min，去沉淀，去沉淀，取离心液取离心液1.41.4 5050旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩 0.076Mpa0.076Mpa1.51.5 放入真空干燥箱干燥，得粗品放

8、入真空干燥箱干燥，得粗品1.61.6 上述浓缩液再次离心，加入上述浓缩液再次离心，加入 0.1mol/LHcl0.1mol/LHcl 溶液调溶液调 pH=4-pH=4-4.54.5，离心分离，再次浓缩烘干，离心分离，再次浓缩烘干精品提取精品提取1 1、称取粗品称取粗品 50g50g 左右加入左右加入 170ml170ml 的的 pH3.5-4.0pH3.5-4.0 的浓盐酸化的的浓盐酸化的95%95%乙醇，在乙醇，在 40-5040-50中搅拌提取中搅拌提取 4h4h，抽滤，抽滤2 2、滤渣用滤渣用 100ml100ml 酸性乙醇在同样条件下进行第二次提取酸性乙醇在同样条件下进行第二次提取 3

9、h3h，抽滤（也可进行重复多次）抽滤（也可进行重复多次）3 3、合并滤液，边搅拌边加入浓氨水，并调溶液合并滤液，边搅拌边加入浓氨水，并调溶液 phph 为为 7.2-7.2-7.57.5，室温静置，室温静置 0.5h0.5h，使之完全沉淀，抽滤，在沉淀未干燥前，使之完全沉淀，抽滤，在沉淀未干燥前，用适量冰醋酸使之分解成稀糊状，可微微加热，静置用适量冰醋酸使之分解成稀糊状，可微微加热，静置 1h1h，抽滤，抽滤理化因素：理化因素：A A：最大波长的确定：最大波长的确定：取处理过的枸杞粉末溶于乙醇中浸泡一段时间后利用紫外分光取处理过的枸杞粉末溶于乙醇中浸泡一段时间后利用紫外分光光度计进行光谱扫描，

10、测定最大吸收波长。光度计进行光谱扫描，测定最大吸收波长。B B：提取溶剂的确定：提取溶剂的确定：称取称取 1g1g 枸杞粉末分别放入盛有蒸馏水、无水乙醇、枸杞粉末分别放入盛有蒸馏水、无水乙醇、80%80%乙醇、乙醇、80%80%酸性乙醇酸性乙醇 pH=3pH=3、石油醚、乙醚、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙、石油醚、乙醚、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯的锥形瓶中各酯的锥形瓶中各 20ml20ml，5050浸泡浸泡 3h3h 后，过滤，定容后，过滤，定容 50ml50ml，取，取1ml1ml 提取液用相应溶剂稀释至提取液用相应溶剂稀释至 5 5 倍，在最大波长下测定吸收波倍，在最大波长下测定吸收波长长C C：

11、提取溶剂体积分数的确定：提取溶剂体积分数的确定：取取 1g1g 枸杞粉末，放入分别盛有枸杞粉末，放入分别盛有 50ml50ml 体积分数分别为体积分数分别为30%30%、40%40%、50%50%、60%60%、70%70%、80%80%、90%90%的酸性乙醇溶液的锥形瓶的酸性乙醇溶液的锥形瓶中，中，5050浸泡浸泡 3h3h 后，过滤，定容至后，过滤，定容至 50ml50ml，取取，取取 1ml1ml 提取液用提取液用相应溶剂稀释至相应溶剂稀释至 5 5 倍，在最大波长下测定吸收波长倍，在最大波长下测定吸收波长D D：提取温度的选择：提取温度的选择：取取 1g1g 枸杞粉末，放入盛有枸杞粉

12、末，放入盛有 50mlpH=350mlpH=3 的的 80%80%酸性乙醇溶液法锥酸性乙醇溶液法锥形瓶中，分别至于形瓶中，分别至于 3030、4040、5050、6060、7070、8080、9090 水浴中浸提水浴中浸提2h2h，过滤定容至，过滤定容至 50ml50ml，取，取 1ml1ml 提取液用相应溶剂稀释至提取液用相应溶剂稀释至 5 5 倍，倍，在最大波长下测定吸收波长在最大波长下测定吸收波长E E：提取时间的选择：提取时间的选择：取取 1g1g 枸杞粉末，放入盛有枸杞粉末，放入盛有 50mlpH=350mlpH=3 的的 80%80%酸性乙醇溶液法锥酸性乙醇溶液法锥形瓶中，形瓶中，

13、5050条件下浸提条件下浸提 3h3h，过滤定容至，过滤定容至 50ml50ml，取取，取取 1ml1ml 提取提取液用相应溶剂稀释至液用相应溶剂稀释至 5 5 倍，在最大波长下测定吸收波长倍，在最大波长下测定吸收波长F F：料液比的选择：料液比的选择取取 1g1g 枸杞粉末，分别加入枸杞粉末，分别加入2020、3030、4040、5050、6060、7070、80mlpH=380mlpH=3 的的 80%80%酸性乙醇溶液中混酸性乙醇溶液中混合，合，5050条件下浸提条件下浸提 3h3h，过滤定容至，过滤定容至 100ml100ml，取取，取取 1ml1ml 提取液提取液用相应溶剂稀释至用相

14、应溶剂稀释至 5 5 倍，在最大波长下测定吸收波长倍，在最大波长下测定吸收波长G G 辐射功率的选择：辐射功率的选择：取取 1g1g 枸杞粉末，按料液比为枸杞粉末，按料液比为 1 1：5050 与与 PH=3PH=3 的的 80%80%酸性乙醇中酸性乙醇中混合，在混合，在 5050下，超声波频率为下，超声波频率为 50kHZ,50kHZ,设置功率为设置功率为30w30w、40w40w、50w50w、60w60w、70w70w、80w80w、90w90w、100w100w，浸提，浸提 3h3h，过滤，过滤定容至定容至 100ml100ml，取取，取取 1ml1ml 提取液用相应溶剂稀释至提取液用

15、相应溶剂稀释至 5 5 倍，在最倍，在最大波长下测定吸收波长大波长下测定吸收波长H:pHH:pH 值的选择值的选择称取称取 1g1g 枸杞粉末，加入枸杞粉末，加入 50ml50ml 的的 80%80%乙醇溶液中，分别将提取乙醇溶液中，分别将提取液的液的 PHPH 值调为值调为 2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、7 7、8 8，在，在 5050条件下浸提条件下浸提3h3h，过滤，定容。取取，过滤，定容。取取 1ml1ml 提取液用相应提取液用相应 PHPH 值溶剂稀释至值溶剂稀释至 5 5 倍，倍，在最大波长下测定吸收波长在最大波长下测定吸收波长I I：提取条件的正交实验：提取条件的正交实

16、验取上述各个单因素和在一起进行水平设计，重复三次，取平均取上述各个单因素和在一起进行水平设计，重复三次，取平均值，选出最佳条件值，选出最佳条件J J 提取次数对色素浓度的影响提取次数对色素浓度的影响取取 1010 g g 枸杞粉枸杞粉 3 3 份，加入份，加入 100mLpH=3,80%100mLpH=3,80%酸性乙醇溶液，于酸性乙醇溶液，于5050分别回流提取分别回流提取 1,1, 2,2, 3 3 次，每次次，每次 60mino60mino 过滤，合并每组提过滤，合并每组提取液并定容至一定体积，测定吸光度值取液并定容至一定体积，测定吸光度值粗品或精品提出后粗品或精品提出后. .色素用蒸馏水溶解适量色素，以紫外可见分光光度计在色素用蒸馏水溶解适量色素，以紫外可见分光光度计在200nvr800nm200nvr800nm 范