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1、检测乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的临床检测乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的临床意义意义?380-中华实验和临床病毒学杂志 2007 年 l2 月第 2l 卷第 4 期ChineseJExpClinViral,December2007,V0I21.N0.4.病毒病诊断与治疗.检测乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白的临床意义龚玉华,胡云,张利莉,苏琴,刁仁联,缪家文【摘要】目的检测乙肝患者血清中乙肝两对半(HBVM),乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBVLP)以及 HBVDNA,比较在不同乙肝两对半模式的患者中 HBV.LP与 HBVDNA 的检出率,探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBVLP)用于乙肝患者临床诊
2、断的意义.方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测 HBV.LP 和乙肝两对半,采用荧光定量 PCR 方法对患者 HBVDNA 进行检测.结果(1)相同乙肝模式患者血清中 HBV.LP 与 HBVDNA 检出率差异无统计学意义;(2)143 例小三阳乙肝患者血清中 HBV.LP 与 HBVDNA 阳性率差异无统计学意义,二者的检出一致率为 82.52%(65+53)/143;(3)HBVLP 吸光度(A 值)与 HBVDNA 呈正相关关系(r=0.983).结论乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白与 HBVDNA 有良好的正相关关系,在 HBeAg 阴性的乙肝患者中乙肝病毒表面抗原大蛋白(HBVLP)
3、与 HBVDNA 有较高检出一致率,HBVLP 用于临床反映乙肝病毒复制水平,特别是 HBeAg阴性乙肝患者体内病毒复制情况有重要的意义.【主题词】肝炎表面抗原,乙型;肝炎病毒,乙型;DNAToexploretheclinicalsignificanceofHBVlargeproteinindiagnosingviralreplicationGONGYu-hua.HUyun,zHANGLh,sUQin.DlA0Ren-lian.MfA0Jia.welt.DepartmentofClical,Laboratory.theThirdPeoplesHospitatofZhenjang,Zhenjia
4、ng212008,ChinaCorrespondingauthor:GDGYu-hua,E-mail:【Abstract】ObjectiveToexploretheclinicalsignificanceofHBVlargeprotein(HBV-LP)indiagnosingvimlreplication,wedetectedtheHBV.LP,HBVDNAandthehepatitisBviralmaFkers(HBVM)intheserumofthepatientsinfectedwithHBV.MethodsHBV.LPandHBVMwereanalyzedbyusingELISA.H
5、BV.DNAwasquantitativelydetectedusingreal-timefluorescentpolymerasechainreaction.Results(1)NosignificantdifferencebetweenthedetectablerateofHBVDNAandHBVLPwasfoundinthesameHBVM(P0.05).(2)NosignificantdifferencebetweenthepositiverateofHBVDNAandHBVLPwasfoundHBeAgnagetivepatients.(3)ThecontentsofserumHBV
6、.LPwaspositivelycorrelatedwiththenumberofHBVDNAcopies.ConclusionTherewasaclosecorrelationbetweenthepositiverateofHBVLPandHBVDNA.andHBVLPiSareliahleserelocalmarkerthatcanreflectthereplicationofHBV.【Keywords】HepatitisBsurfaceantigens;HepatitisBvirus;DNA乙型肝炎是影响人类健康的主要传染病之一,其感染率高,而且易于慢性化,引起肝硬化和原发性肝癌.我国属
7、高地方性流行地区,一般人群中HBsAg 流行率为 9.09%,其中慢性乙型肝炎感染者约占全世界的 1/3;流行现状是 HBeAg 阴性活动期慢性乙肝患者增多,HBV 变异株增加,HBV 的突变率较高.目前我国约 1/3 的活动期慢性乙肝患者中乙肝 e 抗原(HBeAg)为阴性,而患者体内乙肝病毒仍然复制活跃,有研究者对 HBeAg 阴性的慢性乙肝患者进行平均为期 9(118.4)年的随访,发作者单位:212008 江苏省,镇江市第三人民医院检验科(龚玉华,张利莉,苏琴,刁仁联,缪家文);镇江市出入境检验检疫局(胡云)通讯作者:龚玉华,Email:gyh5511163.corn现其进展为肝硬化和
8、肝癌(HCC)的发生率分别为23%和 4.4%.对一些不能进行 HBVDNA 检测的医疗机构,对活动期慢性乙肝患者体内乙肝病毒的复制情况难以判断,本研究探讨了乙肝患者血清中乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV.LP)与 HBVDNA 的关系,探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV.LP)用于临床反映乙肝病毒复制水平,特别是用于 HBeAg 阴性慢性乙肝患者诊断的临床意义.1 对象与方法1.1 对象随机选取本院 2007 年 3 月至 2007 年 6月门诊及住院患者血清 251 份,其中男性 160 例,女中华实验和 l 临床病毒学杂志 2007 年 l2 月第 2l 卷第 4 期Chinese
9、JExpClinVirol,December2007,V0121,No.4性 9l 例,年龄 l877 岁,平均年龄 40.3 岁,标本一20冻存备用.1.2 方法乙肝两对半(HBVM)指标采用酶联免疫法检测,试剂盒购自北京万泰生物科技有限公司;乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV.LP)采用酶联免疫法检测,试剂盒购自北京热景生物技术有限公司;HBVDNA 采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)定量检测,试剂盒购自上海复星克隆生物高技术有限公司,所有试剂盒均在有效期内,试验操作严格按照说明书进行.1.3 统计学方法采用 SPSS13.0 软件进行统计学分析.各种检测指标阳性率的比较均采用检验2 结果
10、2.1 不同乙肝两对半模式(HBVM)乙肝患者中HBV.LP 与 HBVDNA 检出情况相同乙肝两对半模式组中 HBV.LP 的阳性率与 HBVDNA 的阳性率经过卡方验证其差异无统计学意义(P0.05);在所有 251 例样本中 HBVDNA 的阳性检出率为57.77%(145/251),HBV.LP 的阳性检出率为 63.35%(159/251).结果见表 l.表 1 不同乙肝两对半模式患者乙肝大蛋白与 HBVDNA 比较Tab.1ThecomparisonofHBV-LPandHBVDNAinpatientswithdifierentHBVM:1=HBsAg;2=HBsAb:3=HBeA
11、g;4=HBeAb;5=HBcAb2.2143 例 HBeAg 阴性的小三阳乙肝患者中 HBV.LP 和 HBVDNA 检出情况在小三阳乙肝患者中HBVDNA 和 HBV.LP 的检出一致率为 82.52%(65+53)/143;HBVDNA 的检出为 51.05%(73/143);HBVLP 的检出为 57.34%(82/143),二者差异无统计学意义(=0.78,P0.05).结果见表 2.2.3I-IBV.LP 拷贝数与 HBV.LP 吸光度(A 值)的相关关系 145 例 HBVDNA 阳性的乙肝患者血清中 HBV.LP 吸光度(A 值)与 HBVDNA 拷贝数对数值之间有良好的相关性
12、,相关系数 r=0.983,方差分析显示不同 HBVDNA 拷贝数组别之间,HBV.LP含量差异有统计学意义.表 2 小三阳患者中乙肝大蛋白和 HBVDNA 的比较Tab.2ThecorrelationofHBVDNAcopiesandHBVLPAinHBVDNApostivepatients3 讨论目前临床上 HBVDNA 和 HBeAg 是临床判定乙肝病毒复制程度的重要指标,但是限于试验条件,很多基层医疗机构无法开展 PCR 检测 HBVDNA,在传统认为乙肝两对半中 HBeAg 阳性表明 HBV 病毒复制活跃,传染性较强,但诸多研究表明在 HBeAg 阴性的慢性乙肝患者中,由于乙肝病毒基
13、因前 C 区或是 cP 区的变异,导致患者体内 HBeAg 合成障碍,因此临床 HBeAg 检测呈阴性,但是 HBVDNA 检测仍为阳性,乙肝病毒复制并未受到影响,说明 HBeAg阴性并不能作为乙肝病毒复制终止或是减弱的判断依据,因此寻找新的判定乙肝病毒复制水平的适宜于临床广泛使用的血清学指标已成为目前的研究热点之一.乙肝病毒为嗜肝 DNA 病毒,含有 3200 个核苷酸,含有 4 个开放读码框架,编码 6 种蛋白,其中 S基因编码 3 种外膜蛋白,包括主蛋白(即 HBsAg),中蛋白(即 HBsAg 和 Pre.s2 蛋白)和大蛋白(HBVLP,即 HBsAg,Ire.S1 蛋白和 Pre.
14、S2 蛋白).大蛋白(HBVLP)是 HBVDane 颗粒和亚病毒颗粒(管状颗粒)的主要包膜成分,与乙肝病毒的复制程度密切相关,在感染早期,它与细胞受体结合介导病毒的细胞内摄人;感染晚期,是病毒组装和分泌的关键.因此检测 HBV.LP 的存在对于临床上判定体内 HBV复制和治疗预后具有一定的意义.本研究结果显示,在相同乙肝两对半模式的乙肝患者中 HBVDNA 的检出和 HBV.LP 的检出没有中华实验和 l 临床病毒学杂志 2007 年 l2 月第 21 卷第 4 期ChineseJExpClinViml,December2007,Vol21,N0.4显着差异;HBV.LP 吸光度(A 值)与
15、 HBVDNA 拷贝数对数呈正相关关系(r=0.983);在 HBeAg 阴性的小三阳乙肝患者中 HBVDNA 和 HBV.LP 的检出一致率为 82.52%(65+53)/143,二者的阳性检出率也没有显着差异,研究结果表明 HBV.LP 和 HBVDNA 反映了乙肝患者体内乙肝病毒的复制水平,是判断乙肝病毒复制的较好的血清学指标,尤其是在HBeAg 阴性的慢性乙型肝炎患者中具有更重要的临床应用价值.综上所述,临床检测 HBeAg 阴性慢性乙肝患者血清 HBV.LP,有助于判定乙肝患者体内病毒的复制水平,是判断 HBV 复制新的血清学指标.另外,ELISA 检测方法具有经济,直接和简便的特点
16、,因此有利于在我国尚不具备 HBVDNA 定量检测条件的基层医院推广应用.4 参考文献1 梁晓峰,陈园生,王晓军,等.中国 3 岁以上人群乙型肝炎血清流行病学研究.中华流行病学杂志,2005,26:655.658.2庄辉.我国乙型肝炎病毒感染与挑战.中华传染病杂志,2005,23(增刊):2.5.3贾继东.乙型肝炎 e 抗原阴性慢性乙型肝炎的治疗中华肝脏病杂志,2005,13:539.14jLiawYF,TaiDI,ChuCW,eta1.ThedevelopmentofcirrhosisinpatientswithchronictypeBhepatitis:aprospectivestudy.Hepatology,1988,8:493-496.15jHamasakiK,NakataK,NagayamaY,eta1.ChangesintheprevalenceofHBeAg-negativemutanthepatitisBvirusduringthecourseofchronichepatit
