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1、产品名称：叶绿素在线监测仪产品名称：叶绿素在线监测仪型号：型号：TETHYS400量程：量程：0-400ug/L检验项目：检验项目：（1）重复性）重复性（2）准确度）准确度（3）直线性）直线性（4）最低检出限）最低检出限标准样品：标准样品：叶绿素 a 标准样品，蓝绿藻标准样品（推荐使用荧光藻蓝蛋白标准提取样品） ；零点校正液：零点校正液：测试叶绿素 a 时推荐使用 50%乙醇溶液作为零点校正液（也可使用重蒸馏水） ，测试蓝绿藻时使用重蒸馏水作为零点校正液。量程校正液：量程校正液：使用 80%F.S 标准溶液。试验条件：试验条件：环境温度：在（535）之间，试验期间的温度变化在5以内。相对湿度：
2、相对湿度在 85%下。大气压：在（95106）kPa 压力下，其变化幅度在 5%以内。电源电压：（22022）VAC。电源频率：（500.5）Hz。现场测试时，确保无外界强光直射仪器。一、仪器现场调试方案：一、仪器现场调试方案：1、实验准备、实验准备实验器具：1L 棕色容量瓶，量筒，漏斗，1L 试剂瓶，天平，洗瓶、药匙试剂：叶绿素 a 标准样品、荧光藻蓝蛋白标准样品溶剂：95%乙醇溶液、去离子水（或者重蒸馏水） ，5%硫酸溶液50%乙醇溶液准备： 在 1L 试剂瓶中加入 95%乙醇溶液 500ml，在加入500ml 去离子水，稀释至刻度、摇匀。2、标准样品的准备、标准样品的准备叶绿素 a 标准
3、试剂推荐使用由“和光纯业株式会社”出品的，标准试剂在运输过程中做好低温贮藏和避光措施。蓝绿藻采用的是激发波长为 590nm，发射波长为 650nm 左右的单一波长的荧光分光光度计的原理。由于现行国家对水中蓝绿藻的测量没有任何标准，所以截止到本公司制定此企业标准为止，暂无用于测量水中蓝绿藻的标准物质。通过本公司实验测试后，使用藻蓝蛋白的荧光特性符合试验要求。藻蓝蛋白（C-PC）晶体是从螺旋藻中分离纯化的，为具强烈荧光的蓝色冻干粉末能发出强烈的荧光，具有很好的吸光性能和很高的量子产率，在可见光谱区有很宽的激发及发射范围。藻蓝蛋白晶体在 4可稳定保存一年。不能冷冻。根据郎伯-比尔定律：C = K *
4、 F式中： C 荧光物质浓度；K 物质荧光系数；F 荧光强度。K 一般为常数，可见，荧光强度和荧光物质浓度呈正比，所以仪器测定的蓝绿藻浓度及与荧光强度成正比，因此校正仪器本身实际是校正仪器测定荧光物质荧光强度的过程。3、标准溶液的配置、标准溶液的配置3.1 叶绿素叶绿素 a 标准溶液的配置标准溶液的配置将冰冻存放的 10mg 叶绿素 A 标准物晶体用无水乙醇溶解并定量移至500mL 棕色容量瓶中，用 95%的乙醇溶液稀释刻度、捣匀。存放于-20的冰箱中。此储备液叶绿素 a 的浓度为 20mg/L。 （叶绿素 a 由“和光纯业株式会社”出品） 。调试液的配制：（在对叶绿素 a 溶液进行稀释配置时
5、乙醇溶液可根据实际情况适当增高）空白溶液（用于仪表调零）50乙醇溶液或者用二次蒸馏水；80ug/L 的叶绿素 a 溶液：取上述浓度为 20mg/L 的溶液 4.0mL，于1000mL 棕色容量瓶中，用 50乙醇溶液稀至刻度、摇匀。200ug/L 的叶绿素 a 溶液：取上述浓度为 20mg/L 的溶液 10.0mL，于1000mL 棕色容量瓶中，用 50乙醇稀释至刻度、摇匀。320ug/L 的叶绿素 a 溶液：取上述浓度为 20mg/L 的溶液 16.0mL 于1000mL 棕色容量瓶中，用 50乙醇稀释至刻度、摇匀。400ug/L 的叶绿素 a 溶液：取上述浓度为 20mg/L 的溶液 20.
6、0mL 于1000mL 棕色容量瓶中，用 50乙醇稀释至刻度、摇匀。50ug/L 的叶绿素 a 溶液：取上述浓度为 20mg/L 的溶液 0.25mL 于1000mL 棕色容量瓶中，用 50乙醇稀释至刻度、摇匀。在深色的容量瓶中贮存高浓度的标准溶液。溶液应避光、低温、密封保存。稀释的标准溶液应现用现配。浓溶液储存在-20的密闭环境下有效期时间为半年。3.2 蓝绿藻标准溶液的配置蓝绿藻标准溶液的配置将干燥存放的 50mg 荧光藻蓝蛋白标准物晶体用蒸馏水溶解并定量移至1000mL 棕色容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此时储备液的浓度为50mg/L。 （荧光藻蓝蛋白由“美国 sigma aldr
7、ich 公司”出品）调试液的配制：空白溶液（用于仪表调零）：蒸馏水5mg/L 的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为 50mg/L 的溶液 100mL 于1000mL 棕色试剂瓶中，加 900mL 蒸馏水稀释至刻度、摇匀。 10mg/L 的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为 50mg/L 的溶液 200mL 于1000mL 棕色试剂瓶中，加 800mL 蒸馏水稀释至刻度、摇匀。15mg/L 的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为 50mg/L 的溶液 300mL 于1000mL 棕色试剂瓶中，加 700mL 蒸馏水稀释至刻度、摇匀。20mg/L 的藻蓝蛋白溶液：取上述浓度为 50mg/L 的溶液 400mL 于1000m
8、L 棕色试剂瓶中，加 600mL 蒸馏水稀释至刻度、摇匀。荧光藻蓝蛋白储备液和调试液应现用现配，配制在 1000mL 棕色试剂瓶中。4、仪器调试、仪器调试仪器出厂前已经过性能测试并合格，现场本公司售后调试工程师可按照以下方法进行仪器的二次调校： 4.1 叶绿素叶绿素 a 测量通道的调校测量通道的调校1）首先通入 5%的稀硫酸清洗仪器流通池，仪器清洗完毕后（如果清洗不干净可换用 10%的稀硫酸溶液） ，通入二次蒸馏水对仪器进行调零。2）调零稳定后，可以通入浓度为 320ug/L 叶绿素 a 标准样品溶液，进行手动测量，计算其测量值是否在仪器性能指标范围内，如果在范围内则无需在对仪器进行线性调校。
9、3）对仪器进行多点调校。依次通入浓度为 80ug/L、200 ug/L、320 ug/L、400ug/L 的叶绿素 a 标准样品溶液进行手动测量，在仪器线性调校界面输入每种浓度的测量平均值，及完成仪器的线性调校（可以根据现场要求增加不同的浓度点） 。4）仪器线性调校完毕后，通入不同浓度的标准溶液，进行线性验证。4.2 蓝绿藻测量通道的调校蓝绿藻测量通道的调校1）首先通入 5%的稀硫酸清洗仪器流通池，仪器清洗完毕后（如果清洗不干净可换用 10%的稀硫酸溶液） ，通入二次蒸馏水对仪器进行调零。2）调零稳定后，可以通入浓度为 15mg/L 藻蓝蛋白标准样品溶液，进行手动测量，计算其测量值是否在仪器性
10、能指标范围内，如果在范围内则无需在对仪器进行线性调校。3）对仪器进行多点调校。依次通入浓度为 5mg/L、10 mg/L、15mg/L、20mg/L 的藻蓝蛋白标准样品溶液进行手动测量，在仪器线性调校界面输入每种浓度的测量平均值，及完成仪器的线性调校（可以根据现场要求增加不同的浓度点） 。4）仪器线性调校完毕后，通入不同浓度的标准溶液，进行线性验证。当两个测量通道都验证合格并测量稳定后，即可对仪器进行性能测试试验。二、仪器性能测试二、仪器性能测试1、叶绿素、叶绿素 a 测量性能测试测量性能测试考虑到叶绿素 a 溶液的不稳定性，推荐在仪器现场调试正常完毕后，立即用标准溶液对仪器进行性能试验。11
11、 准确度（示值误差）单参数零点和量程校正后，分别用满量程 80ug/L、320ug/L 浓度工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量的浓度平均值。求出每次平均值与对应标准液的浓度之差相对于标准溶液的百分率。12 直线性依次测量下面表 1 中的各质量浓度叶绿素 a 标准溶液。表 1 叶绿素 a 标准溶液标准溶液编号1234标准溶液质量浓度（ug/L）80200320400分别对表 1 中 4 种质量浓度工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量值的平均值。用最小二乘法对 4 种标准溶液的质量浓度和测量平均值进行处理，得到线性相关系数 ，即为测量线性的检定结果。13
12、重复性:：测定零点校正液 6 次，将各次显示值的平均值作为零值。在相同的条件下，测定量程校正液 6 次，将各次测定值扣除零值后计算相对标准偏差。标准偏差 sc：1)( Sc21 nccini式中：ic为第 i 次显示值（i=1、2、3 6） ，n=6；再求出其相对标准偏差 RSD（%）：%100RSD(%)cSc1.4 最低检出限选取质量浓度为 50ug/L 叶绿素 a 标准溶液。对空白溶液与标准溶液进行连续交替 11 次测量。如果在测量中，有 1 次数据确认是由外界干扰或操作引起的粗大误差，应将该次数据剔除。由下式计算每次测量的荧光强度：Ci = Ci1 Ci0 (2)式中：Ci1 标准溶液
13、的测试值；Ci0 空白溶液的测试值。测量值的平均值为：（3） niiCnC11式中：n 测量次数。检出极限指二倍于标准偏差读数的物质浓度。用符号 DL 来表示；（4）)/(2LugsCcDL式中： 11 次测量的平均值；Cc 标准溶液的质量浓度；s 单次测量的标准偏差。2 2、蓝绿藻测量性能测试、蓝绿藻测量性能测试21 准确度（示值误差）单参数零点和量程校正后，分别用满量程 5mg/L、15ug/L 浓度藻蓝蛋白工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量的浓度平均值。求出每次平均值与对应标准液的浓度之差相对于标准溶液的百分率。22 直线性依次测量下面表 1 中的各质量浓度藻蓝蛋白
14、标准溶液。表 2 藻蓝蛋白标准溶液标准溶液编号1234标准溶液质量浓度（mg/L）5101520分别对表 2 中 4 种质量浓度工作标准溶液与空白溶液进行连续交替三次测量，计算每次测量平均值。用最小二乘法对 4 种标准溶液的质量浓度和测量平均值进行处理，得到线行相关系数 ，即为测量线性的检定结果。23 重复性:：测定零点校正液 6 次，将各次显示值的平均值作为零值。在相同的条件下，测定 15mg/L 的藻蓝蛋白标准样品溶液 6 次，将各次测定值扣除零值后计算相对标准偏差。标准偏差 sc：1)( Sc21 nccini式中：ic为第 i 次显示值（i=1、2、3 6） ，n=6；再求出其相对标准
15、偏差 RSD（%）：%100RSD(%)cSc三、现场对比实验：三、现场对比实验：由于叶绿素受外界环境因素影响大，所以在做现场水样对比试验时，务必按照下列方案实施。对比实验条件：对比实验条件：环境温度：在（535）之间，试验期间的温度变化在2以内。最好选择在一个固定时间段进行对比实验。电源电压：（22022）VAC；电源频率：（500.5）Hz。 （电气环境稳定）现场测试时，确保无外界强光直射仪器，对比实验时，确保在一个相对比较现场测试时，确保无外界强光直射仪器，对比实验时，确保在一个相对比较稳定的天气情况下进行。稳定的天气情况下进行。对比实验方案：对比实验方案：多取一些现场水，取出一部分作为现场水样，剩余水作为储备样品，并做好储备样品的遮光、恒温措施；将水样在国家标准实验室进行化验（用棕色瓶盛装水样，且水样在运输过程中做好恒温措施） ，检验出水样中叶绿素 A 的实际浓度值（作为标准值） 。将剩下的部分水分别稀释 1 倍、2 倍、3 倍等。首先用此已知浓度的现场水样校准仪器。校准完仪器后，连续测量现场储备样品 6 次，计算出六次测量的平均值，求出该平均值对应标准值之差相对于标准值的百分率，此为实际水样比对试验相对误差。C = %100SS CCC式中：C实际水样比对试验相对误差；测量平均值； C现场水样实际值。SC
