神经系统染色技术

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1、神经病理学是组织病理学的一个重要组成部分，神经病理学技术是一门较特殊的病理技术。神经组织的结构和功能较为复杂的特殊，用常规方法处理，常得不到想要的东西，因此，要想获取想要的东西，必须靠特殊的处理方法，才能将其充分地显示出来。神经系统方面可显示的物质较多，如尼氏小体、髓鞘、变性髓鞘、神经纤维和神经胶质细胞等等。这些都要靠特殊的银浸染技术，才能显示出来。下面将介绍几种显示上述物质的方法。应用： 神经系统染色应用于神经系统方面的各种疾病，如创伤、中毒、感染等引起神经系统方面的疾病， 应作正常髓鞘和变性髓鞘的染色，以观察髓鞘的变化及脱失情况，如脱髓鞘假瘤与弥漫的纤维星型细胞瘤镜下有非典型性核分裂象和弥

2、漫浸润的单核细胞，充分发育的巨噬细胞缺少细胞将会误诊为胶质瘤，应作胶质细胞和神经纤维染色。一、苏木素VG 法染中枢神经1、切片脱蜡至70% 酒精2、Weigert氏铁苏木素染10 分钟3、自来水稍洗4、如有必要，用1% 盐酸酒精分化5、流水洗10-15分钟6、VG 液染 30 分钟7、蒸馏水快洗8、95% 酒精分化9、脱水、透明、封固结果：细胞：灰黑色，髓鞘：灰白色，胶原：红色，肌纤维：黄* 色，神经细胞细胞浆：黄* 色/ 琥珀色，胶质纤维：琥珀色二、神经细胞尼氏体染色正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形， 有的为椭圆形。 这些物质能被大部

3、分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet） 亚甲蓝 （methylene blue） 甲苯胺蓝（toluidine blue） 硫董 （thionin）等钭其染为蓝色。 但是，当神经细胞受伤后， 胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。焦油坚牢紫显示尼氏体染液配制：焦油坚牢紫1g 蒸馏水100ml 操作方法：1、切片脱蜡至水2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟3、水洗4、用 95% 酒精分化5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶结果：神经细胞单位：紫-蓝色细胞核：紫 - 蓝色尼氏体：紫 - 深蓝色注意： 1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将

4、切片上的颜色全部脱掉。三、改良的Marsland, Glees 方法染神经纤维（I ）试剂的配制：取无水乙醇10ml ，加入 20% 的硝酸银水溶液，搅拌均匀后逐滴加入浓氨水，先是形成沉淀，后再逐滴加入氨水，让早期形成的沉淀彻底溶解，然后再加入另外2-3 滴氨水，即可使用。平时保存于4冰箱中。（II ）操作方法1、切片捞于硅化载玻片上，于60 烘烤 2 小时后备用。2、切片脱蜡至水。3、0.5% 高猛酸钾处理切片5 分钟。4、水洗。5、2% 草酸处理切片2 分钟。6、自来水洗，蒸馏水洗。7、20% 硝酸银于37 中作用60 分钟。8、 直接入 10% 福尔马林溶液中处理，直至切片颜色转为黄*

5、色到棕色为止， 约 10-20秒。9、直接入上述氨银液处理30 秒。10 、直接入10% 福尔马林处理1-2分钟。11 、自来水洗。12 、5% 硫代硫酸钠固定切片5 分钟。13 、脱水、透明、封固。结果：神经纤维：深棕色至黑色，背景淡棕色。注意事项：1、整个过程，应仔细操作，防止污染造成背景染色。2、切片在9 步骤后于镜下检查，如果浸染程度不够，颜色较浅，可以重复8、9 步。四、改良的Palmgren 氏法染神经纤维（I ）试剂的配制：a、酸性福尔马林40% 甲醛25ml 蒸馏水75ml 1% 硝酸0.2ml b、银溶液销酸银15g 硝酸钾（ Potassium nitrate） 10g 蒸

6、馏水10ml 5% 醋酸氨（ amino acetic acid） 1ml c、还原液焦 酚（ Pyrogallol） 10g 蒸馏水450ml 无水乙醇550ml 1% 硝酸2ml 用前须静置24 小时d、调色液氯化金1g 蒸馏水200ml 无水乙醇550ml 1% 硝酸2ml e、加强剂50% 乙醇100ml 苯胺油（ anilineoil） 2 滴f、固定液5% 硫代硫酸钠（II ）操作步骤1、应用硅化载片裱片，于60 烘烤切2 小时。2、切片脱蜡至水。3、0.5%-1%高猛酸钾水溶液处理切片5 分钟。4、自来水洗。5、2% 草酸水溶液处理切片2 分钟。6、自来水洗。7、用酸性福尔马林5

7、-10处理分钟。8、蒸馏水洗换3 次，每次2 分钟。9、用银液处理10 分钟（于37 ）10 、用预热至45 的还原液，摔去还原液，加入新的还原液，如此反复数次，至镜下结果满意为止。11 、50% 乙醇苯胺油轻洗10 秒钟。12 、蒸馏水洗3 次。13 、用氯水金调色。14 、自来水洗。15 、5% 硫代硫酸钠处理切片5 分钟。16 、脱水、透明、封固。结果：神经纤维棕色至黑色。五、改良的Eagers 法染变性轴索（I ）试剂的配制a、氨银液1.5% 硝酸银40ml 95% 24ml 浓氨水4ml 2.5% 氢氧化钠3.6ml b、还原液无水乙醇9ml 蒸馏水81ml 1% 柠檬酸2.7ml

8、10% 福尔马林2.7ml （II ）操作方法1、组织用福尔马林盐固定2、自来水洗，浸入蒸馏水中。3、恒冷切片附贴于硅化的载玻片上或切片收集于水杯内。4、切片或用玻璃钩将切片移入2.5% 硝酸双氧铀（uranyl nitrate）处理 5 分钟。5、蒸馏水轻洗后置入氨银液中，直到切片变棕黄* 色为止，约10-15分钟。6、直接进入还原液至颜色没有其它变化为止。约2-5分钟。7、蒸馏水洗。8、5% 硫代硫酸钠处理切片5 分钟。9、水洗，将切片裱于载片上。10 、脱水、透明、封固。结果：变性神经纤维，棕色到黑色。正常的神经纤维，灰黄* 色。六、改良的Loyez 氏法染神经髓鞘（I ）试剂的配制a、

9、碳酸锂苏木素液碳酸锂（ Lithium carbonate） 1ml 饱和水溶液10% 成熟苏木素无水乙醇液5ml 蒸馏水44ml b、铬酸氧化液重铬酸钾10g 浓浓酸10ml 蒸馏水90ml c、Loyez氏分化液四硼酸钠1g 铁氰化钾1.25g 蒸馏水100ml （II ）操作方法1、切片脱蜡至水2、入以 b 液为原液酸成10% 的氧化液氧化切片24 小时。3、水洗。4、入 4% 的铁明矾水溶液中媒染24 小时。5、蒸馏水洗。6、入碳酸锂苏木素染液中浸染12-24小时。7、自来水洗。8、4% 铁明矾水溶液分化，至髓鞘显示清晰为止。9、自来水洗。10 、Loyez氏分化液分化切片约2 分钟。11 、水洗。12 、常规脱水、透明并封固。结果：髓鞘及红细胞显示深蓝色，轴索呈淡白色至淡黄* 色，其它组织也呈现淡黄* 色或灰黄* 色。（III ）注意事项1、 在常规活检中， 组织固定都是以福尔马林为主，没有特殊的固定液，如果作为科研标本，则可预先准备好特殊固定液固定组织，这样效果会更好。2、原法采用Laanna氏铬化液即重铬酸钾9.5g ，氯化锌4.5g ，蒸馏水100ml，未氧化切片，改良法采用5% 铬酸氧化液氧化切片，氧化力更强，效果更好。载片须用硅化载片，否则切片容易脱落。