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1、1、生物技术：又称生物工程。人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理。采用先进的工程技术手段，按照预先设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或打到某种目的。2、食品生物技术：通过生物手段，用生物程序生产细胞或其代谢物质来制造食品改进传统生产过程，提高人类生活质量的科学技术。3、食品生物技术的应用：1.利用基因工程、细胞工程技术对食品资料改造与改食2.利用发酵技术，酶工程技术将农副产品原料加工成商品。3.利用生物技术进行产品的二次开发，新成新产品。4、利用酶工艺、发酵技术、生物反应器等对传统食品加工工艺进行改造降低能耗，提高产率，改善食品品质。4、基因：遗传因子，携带遗传
2、信息的 DNA 序列，其产物为各种 RNA 或蛋白质，是控制性状的基本遗传物质。5、基因工程：将一种供体生物体的目的基因与事宜的载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种受体生物体内，使之按照人们意思稳定遗传并表达出新的基因产物或产生新的遗传性状的 DNA 体外操作程序。6、基因工程实施要有四个必要的条件：工具酶、供体基因、载体、受体细胞7、限制性核酸内切酶：是识别 DNA 的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类内切酶 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。8、DNA 聚合酶：在引物和模板的存在下，脱氧核糖核酸连续地加到
3、双链 DNA分子引物链的 3-oh 末端，催化核苷酸的聚合作用，合成方向对于被合成链而言是5到 3，并且合成产物与模板互补。9、基因工程载体：基因中携带外源基因进入受体细胞的运载工具。本质是 DNA必要条件：能在宿主细胞内进行独立和稳定自我复制。具有合适限制性核酸内切酶位点。具有合适选择标记基因10、质粒载体:以细菌质粒的各种元件为基础组建而成，包括三个共同组成部分（复制必须区、选择标记基因和限制性核酸内切酶的酶切位点）11、质粒生物学特性：独立于细菌染色体外的双链闭合环状 DNA 分子。质粒复制和拷贝数：严紧型与松弛型。质粒转移性：质粒从一个细胞转移到另一个细胞中的特殊性。质粒的不亲和性：两
4、种不同质粒不能再同一宿主细胞中稳定共存。12、质粒载体的必备条件：具有较小分子质量和较高拷贝数。具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。具有两种以上选择标记基因。具有复制起始点天然质粒：没有经过以基因克隆为目标的体外修饰改造13、目的基因的获取方法：（对已知序列基因获取）化学合成法、从基因文库中钓取目的基因、应用 mRNA逆转录合成 cDNA、PCR 扩增法等。（对未知序列基因的分离）染色体步移法、杂交捕捉和示范法、限制性标记cDNA 扫描、序列分析法14、基因文库：又称 DNA 文库。指细菌中增值来自某一生物的染色体 DNA 或cDNA 片段的全部 DNA 片段克隆的集合体。15、基因文库构
5、建的基本步骤：细胞染色体大分子 DNA 的提取和大片段 DNA 制备载体 DNA 制备载体与外源大片段 DNA 的连接体外包装及基因组 DNA 文库扩增重组 DNA 筛选和鉴定16、cDNA 文库： 某种生物基因组转录的全部 mRNA 经反转录产生的各种 cDNA片段分别与克隆载体重组，贮存在一种受体菌克隆子群体之中。cDNA 文库构建的基本步骤：mRNA 的提取和分离。 第一链 cDNA 合成。第二链 cDNA 合成（自身引导法、引导合成法、置换合成法） 。双链 cDNA克隆进质粒或噬菌体并导入宿主细胞中繁殖。17、重组 DNA：将目的基因用 DNA 分子连接酶在体外连接到适当载体上，即DN
6、A 分子的体外重组。18、受体细胞：能摄取外源 DNA 并使其稳定维持的细胞。必备条件（特性）：1、便于重组 DNA 分子的导入和筛选克隆子 2、重组DNA 分子在受体细胞被能稳定维持 3、适于外源基因高效表达 4、遗传性稳定5、易于扩大培养或发酵生长 6、安全性高19、目的基因导入受体细胞的方法：转化、转染、感染20、土壤根癌农杆菌：一种革兰氏阴性细菌，能侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物。Ti 质粒：毒性区、T-DNA 区、结合转移区、复制起始区21、Ti 质粒的作用和改造：优点：T-DNA 能自发整合到植物染色体 DNA 上，诱导植物形成肿瘤， opine 合成酶基因具有一个强启动子，
7、能启动外源基因高效表达。缺点：分子质量过大，限制酶位点多；含有许多编码基因；没有复制起始点和筛选标记基因；存在一些对于 T-DNA 转移不起任何作用的基因。改造原则：保留 T-DNA 的转移功能；取消 T-DNA 致癌性；通过简并手段可使外源 DNA 插入 T-DNA，并随着 T-DNA 并随着 T-DNA 整合到植物染色体上。目前运用最广、最有效的植物基因工程载体是 pGV385022、DNA 重组子的筛选与鉴定：（看不清。随后补上）23、探针：带有特殊标记的核酸片段，能够与待测的核酸片段互补结合，可用于检测核酸样品中存在的特定基因。24、菌落印迹原位杂交的步骤：1.将被筛选的菌落转移到硝酸
8、纤维素滤膜上，同时保藏原来的菌落平板作为参照；2.菌落的裂解及 DNA 结合于硝酸纤维素滤膜3.膜上的 DNA 烤干固定后加入探针，同滤膜上的菌落所释放的变性 DNA 杂交；4.用放射自显影技术进行检测5.含有与探针互补序列的菌落 DNA，就会在 x 光胶片上出现曝光点。25、Southern 印迹杂交的步骤1.提取重组体总 DNA2.利用限制性酶切后进行琼脂糖凝胶电泳3.在碱性溶液中使 DNA 变性4.经毛细管虹吸作用被原位转移到硝酸纤维性膜或尼龙膜上5.将膜上的 DNA 烤干固定后加入杂交液和标记探针进行杂交，洗去多余探针6.在 X 光片上反射自显影Nouthern 印迹杂交的步骤1.提取
9、重组体总 RNA 或 mRNA2.在强变性剂存在情况下进行琼脂糖凝胶电泳3.将电泳分离的 RNA 原位吸印到经化学处理过的纸或硝酸纤维素膜上4.用同位素标记的探针进行杂交5.在 X 光片上放射自显影Western 印迹杂交的步骤1.提取重组体蛋白，2.用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，3.将蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上原位转移到硝酸纤维素膜上重组子大小的鉴定（质粒 DNA 的快速提取鉴定）重组子酶切图谱鉴定（限制性核酸内切酶切片段大小鉴定）DNA 序列分析DNA鉴定同源性分析鉴定（原位杂交）质粒载体的噬菌体包装容器的直接筛选载体筛选翻译产物转录方法重组子的筛选间接筛选其他方法4.进行抗体与
10、抗原结合反应26、反义 RNA：有义 DNA 链转录而成，与特异的靶 RNA 互补结合并能抑制靶RNA 表达的一段序列反义基因：转录产生反义 RNA 的基因反义 RNA 技术：把一段 DNA 序列以反义方向插入到合适启动子和终止子之间，然后把此基因构建体转化到受体细胞中，通过选择培养获得转化生物体的技术。27、反义基因的表达载体构建方法：1.分离得到 mRNA，并以其为模板合成反义 DNA2.以此反义链为模板合成有义 DNA 链3.以细菌质粒为载体，用限制性酶切靠近启动子，产生切口4.将有义 DNA 插入表达载体的切口中，若插入的表达载体酶切后以相反方向插入载体 DNA 环中，即表达载体转录形
11、成反义 RNA28、电泳：带电的颗粒或生物分子在外加电场作用下，向带相反电荷的电极做定向移动的现象。泳动度：带电颗粒在单位电场强度下泳的速度29、聚合酶链式反应技术：（掌握）PCR定义：又称基因扩增技术。在 DNA 聚合酶催化下，以 DNA 为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制 DNA 的过程PCR 技术原理：原理类似 DNA 天然复制过程。一种在模板 DNA 引物和四种脱氧核糖核苷酸存在的条件下利用 DNA 聚合酶的酶促反应通过三个温度依赖性步骤完成的反复循环反应。PCR 步骤： 高温变性、低温退火、适温延伸PCR 操作程序：反应体系、反应参数、起始模板五大要素
12、：引物、DNA 聚合酶、四种 dNTP、Mg 2+、模板反应条件：变性的时间和温度、引物的退火、延伸时间和温度，平台效应30、细胞工程：应用生命工程理论，借助基因工程的远离与技术，有目的的利用或改造生物遗传特性，以获得特定细胞、组织产品或新型物种的一门综合性科学技术细胞全能性：在适宜条件下，细胞具有潜在的发育成完整植株或个体的能力32、微生物细胞培养方法：（照片 1229）固体培养、液体培养（连续培养、中间补料培养、同步培养、混合培养）按成分不同：天然培养基（牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基）合成培养基（高氏 I 号培养基、查氏培养基）按物理状态：固体、半固体、液体按用途：基础培养基、加富培养
13、基、鉴别培养基、选择培养基33、植物细胞的培养：34、植物次生代谢产物： 植物中一大类并非植物生长发育锁必须的小分子有机化合物，其生产和分布通常有种属、器官组织和生长发育的特异性35、植物细胞悬浮培养方法 :分批培养、半连续培养、连续培养36、成功的悬浮细胞培养体系必须满足的条件： 悬浮培养物分散性良好、细胞团较小；大小均一良好，细胞形状和细胞团大小大致相同；生长迅速。37、建立良好的悬浮培养细胞系的关键技术：（注意事项）1.选择合适的外植体2.诱导疏松易碎的愈伤组织3.选择合适的培养基4.培养液的灭菌5.悬浮培养6.悬浮培养细胞的继代与选择38、植物细胞固定化培养： 是指把细胞固定在一种惰性
14、基质上面或里面，细胞不能运动而营养液可以在细胞间流动，供应其培养的洗白培养技术（包埋式固定化培养系统、附着式固定化培养系统）39、细胞融合：又称细胞杂交。在外力作用下，使两种或两种以上易源细胞或原生质体相互接触，不经过有性过程而发生的膜融合，胞质融合和核融合并形成一个杂核细胞的现象方法：生物学方法（以病毒为诱导融合剂，如仙台病毒）化学融合剂法、电融合法（采用高频电脉冲）融合方法的选择：诱导动物细胞融合：仙台病毒；植物细胞融合：PEG、电融合法；微生物细胞融合：PEG 法40、酶：一类由活细胞产生的，对某特异底物具有高效催化目的的蛋白质。41、酶工程：又称酶技术，是指利用酶的催化作用进行物质转化
15、，将酶学基本理论与化工技术相结合而形成的新技术42、食品酶的来源从自然界中获得：国际生化协会已确认了 2100 种以上的酶。推测有 2500 种自然酶存在。大部分食品用酶都是从微生物中提取。酶的定向改造：通过酶的定向改造可以获得新酶或功能改善的酶。微生物的诱变育种：诱变方法进行菌种的改良或转移再生，提高产酶效价，提高发酵单位。固定化酶：酶经过固定化后可以长时间，多次利用，提高了酶的使用效率。43、发展微生物作为酶生产的原因（优点）：1、微生物生长繁殖快，生活周期短，产量高，单位干重产物的酶比活高。2、微生物培养方法简单，所用的原料大多数为农副产品，来源丰富，价格低廉，机械化程度高，经济效益高。
16、3、微生物菌株种类繁多，酶的品种齐全。4、微生物有较强的适应性和应变能力。44、优良的产酶菌种应具备的条件：1、不能是致病菌。2、不易退化，不易感染噬菌体。3、产酶量高，而且最好产生胞外酶。4、能利用廉价的原料，发酵周期短，容易培养。45、发酵方法：固体发酵、液体发酵。固体发酵主要用于真菌的酶生产；液体深层发酵应控制温度、通气、搅拌和PH 条件。46、酶的分离纯化方法：1、根据酶分子大小和形状分离：离心分离、凝胶过滤、透析、超滤。2、根据酶分子的电荷性质分离：离子交换层析、层析聚焦、电泳、等点聚焦电泳。3、根据酶分子专一性结合分离：亲和层析、染料配体亲和层析、共价层析。4、根据分配系数的分离：双水相萃取分离。47、固定化酶与自由酶的概念固定化酶：通过物理或化学手段，讲酶固载在某种基体上。自由酶：酶直接加入至溶液中，酶自身的空间结构不发生改变，保持自己的生物特性。48、固定化酶的特点：优点：1、易于将酶与底物及产物分离，产物相对容易提纯。2、酶能够重复利用，使用效率提高成本低。
