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1、1临床生物化学和生物化学检验实验操作技能项目与考核标准一、刻度吸量管的使用技能1.选择：使用前先根据需要选择适当的吸量管，刻度吸量管的总容量最好等于或稍大于最大取液量。临用前要看清总容量和刻度。2.执管：用拇指和中指（辅以无名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。刻度数字要朝向自己。3.取液：另一只手捏压橡皮球，将吸量管插入液体内（不得悬空，以免液体吸入球内） ，用橡皮球将液体吸至最高刻度上端 12cm 处，然后迅速用食指按紧吸量管上口，以免液体从吸量管下口流出。4.调准刻度：将吸量管提出液面，吸粘性较大的液体时，先用滤纸擦干管尖外壁；然后用食指控制液体使之缓慢下降，当至所需刻度
2、时，立即按紧吸量管上口（此时液体凹面、视线和刻度应在同一水平面上） 。5.放液：放松食指，让液体自然流入容器内，放液时，管尖最好接触容器内壁，但不要插入容器内原有的液体中，以免污染吸量管和试剂。6.洗涤：吸取血液、血清等粘稠液体及尿液标本的吸量管，使用后要及时用自来水冲洗干净；吸一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，实验完毕后再冲洗。冲洗干净后，晾干，再浸泡于铬酸洗液中，数小时后取出，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗，晾干备用。二、溶液的混匀技术混匀的方式大致有以下几种，可随使用的器皿和液体容量而选用。1. 旋转混匀法 用手持容器，使溶液作离心旋转，适用于未盛满液体的试管或小口器皿，如锥形瓶。旋转试管
3、时最好用手腕旋转。2. 指弹混匀法 左手持试管上端，用右手指轻轻弹动试管下部，使管内溶液作旋涡运动。3. 倒转混匀法 适用于有塞量筒和容量瓶、试管内容物的混匀。一般试管内容物的混匀可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒转混匀。4. 吸管混匀法 用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分混匀。5. 玻棒搅动法 适用于烧杯内容物的混匀，如固体试剂的溶解和混匀。6. 甩动混匀法 右手持试管上部，轻轻甩动振摇，即可混匀。27. 电磁搅拌混匀法 在电磁搅拌机上放置烧杯，在烧杯内放入封闭于玻璃或塑料管中的小铁棒，利用磁力使小铁棒旋转以达到混匀杯中液体的目的，适用于酸碱自动滴定，pH 梯度滴定等。8. 振荡器混
4、匀法 利用振荡器使容器中的内容物振荡，达到混匀的目的。9. 注意：(1) 混匀时须防止容器内液体溅出或被污染。(2) 严禁用手指直接堵塞试管口或锥形瓶口振摇。三、离心机的使用方法使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能；检查套管与离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮） ，检查套管底部应无碎玻璃片或漏缝。检查合格后，将一对离心管（待分离管与非分离空白管）放入一对套管中，然后连套管一起分置粗天平两侧，用滴管向非分离空白管一侧加水，直至天平两侧彼此相等为止。将各对平衡的套管连同内容物放置于离心机内，两个等重的离心管必须放于对称位置。放妥后，接通电源开关，逐步扭动转
5、速旋钮，缓慢增加离心机转速，直到所需的转速。达规定时间后，将转速旋钮逐步调回零，待离心机停稳后，取出离心管。四、721 型分光光度计 使用方法如下： 1. 接通电源（指示灯亮） ，预热 1520 分钟。2. 灵敏度选择钮放在“1”档（如调不到“OD=0” 时选用较高的档次） 。3. 转动波长选择钮，选用所需的波长。4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“0 电位器”使电表指针对准 T=0 处。5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100 电位器” ，调准电表指针使之指向 OD=0（T=100）处。6. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录
6、。测读过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整 OD=0。7. 比色完毕后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。3五、恒温水浴箱的使用1、 加水到适当高度。2、 接通电源，打开开关。3、 调节温度，使之恒温。4、 如长时间不用，应关上开关拔掉电源。六、氨基酸的薄层层析技术操作步骤：（一）薄板的制备1称取硅胶 G 0.5g 放入研钵中，加 1.5ml0.2%羧甲基纤维素钠，研磨成均匀的稀糊状。2将上述糊状物倾倒在 410cm 的玻璃片（图 11）上，使之均匀地布满于玻片，将玻片轻轻地晃动，使硅胶 G 均匀分布，表面平坦，光滑，无水层及气泡，然后水平放置在空
7、气中使其自然干燥。3. 薄板上硅胶干后，放入 105的恒温干燥箱内活化，半小时后取出，晾凉备用。 （二）点样1在距离薄板一端约 2cm 处用细线向下压硅胶，压成一条点样线。2用直径约 1mm 的玻璃毛细管分别吸取甘氨酸、精氨酸、酪氨酸及混合氨基酸溶液，在点样线上点样，每隔 0.8cm 处点一种样品（约 5ul） ，点样直径约 23mm。待点样处干后，再将样品在原点样处重复点一次。（三）展层1硅胶板的点样端向下，倾斜地放入层析缸内，使其与缸底平面呈约 30。 角。2用长颈漏斗加入展开剂使展开剂离点样处 12cm 处为止。3盖上层析缸盖进行层析。4当展开剂前沿到达玻璃板全长的 3/4 处停止层析，
8、取出玻片，记下展开剂前沿位置，将硅胶板置干燥箱烘干。（四）显色1用 0.5%茚三酮丙酮溶液均匀地喷洒于硅胶板上。2将玻板置 105干燥箱内烘干，约 2 分钟左右即可显出粉红色斑点。（五）测量41分别测量甘氨酸、精氨酸、酪氨酸的 Rf值，作为标准。2再测出混合液中分离出的各种氨基酸的 Rf值与标准值对照，以确定为何种氨基酸。（六）结果计算计算 Rf值：Rf值 = =七、血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳操作步骤1准备与点样： 取 8cm2cm 醋酸纤维素薄膜,将其浸泡在 pH8.6 缓冲溶液中，待薄膜完全浸透后，取出轻轻夹于滤纸中, 吸去多余的液体。然后用点样器蘸新鲜血清，在无光泽面距一端约 2cm
9、处点样。待血清全部渗入膜内,移开点样器。2电泳：取已点样的薄膜，点样面向下两端紧贴在四层滤纸桥上，注意点样端放阴极。盖好电泳槽盖，平衡 10 分钟，打开电源开关，调节电压至 110130V， 电流0.40.6mA/cm， 通电 4560 分钟。3染色与漂洗：电泳结束后，关闭电源。将薄膜从电泳槽中取出,浸入氨基黑 10B 染色液中 510 分钟。待充分染色后，取出薄膜，浸入漂洗液中漂洗 34 遍, 直至背景无色为止。用滤纸吸干薄膜。4定量：取试管 6 支，编号，将电泳薄膜按蛋白质区带剪开，分别置于试管中，另于薄膜的空白部分剪一平均大小的薄膜条放入空白管中。各管中加入 0.4mol/L NaOH
10、5ml，反复振摇，使其颜色充分洗脱。用 721 分光光度计进行比色，波长 650nm，以空白管调零，读取各管的吸光度。 各种蛋白质占总蛋白百分含量的计算：吸光度总和(T)=OD A+OD1+OD2+OD+OD清蛋白(A)% = OD A /T1001-球蛋白% = OD 1/T1002-球蛋白% = OD 2/T100-球蛋白% = OD /T100-球蛋白% = OD /T1005结果识别与计算 样品至色斑中心的距离（cm）样品至溶剂前沿的距离（cm）氨基酸移动的距离（cm）溶剂移动的距离（ ）点样线 2 1 清蛋白 +5临床生物化学实验操作技能项目与考核标准一、刻度吸量管的使用技能1.选择
11、：使用前先根据需要选择适当的吸量管，刻度吸量管的总容量最好等于或稍大于最大取液量。临用前要看清总容量和刻度。2.执管：用拇指和中指（辅以无名指） ，拿住吸量管上部，用食指堵住管上口和控制液流。刻度数字要朝向自己。3.取液：另一只手捏压橡皮球，将吸量管插入液体内（不得悬空，以免液体吸入球内） ，用橡皮球将液体吸至最高刻度上端 12cm 处，然后迅速用食指按紧吸量管上口，以免液体从吸量管下口流出。4.调准刻度：将吸量管提出液面，吸粘性较大的液体时，先用滤纸擦干管尖外壁；然后用食指控制液体使之缓慢下降，当至所需刻度时，立即按紧吸量管上口（此时液体凹面、视线和刻度应在同一水平面上） 。5.放液：放松食
12、指，让液体自然流入容器内，放液时，管尖最好接触容器内壁，但不要插入容器内原有的液体中，以免污染吸量管和试剂。6.洗涤：吸取血液、血清等粘稠液体及尿液标本的吸量管，使用后要及时用自来水冲洗干净；吸一般试剂的吸量管可不必马上冲洗，实验完毕后再冲洗。冲洗干净后，晾干，再浸泡于铬酸洗液中，数小时后取出，再用流水冲净，最后用蒸馏水冲洗，晾干备用。二、溶液的混匀技术混匀的方式大致有以下几种，可随使用的器皿和液体容量而选用。1. 旋转混匀法 用手持容器，使溶液作离心旋转，适用于未盛满液体的试管或小口器皿，如锥形瓶。旋转试管时最好用手腕旋转。2. 指弹混匀法 左手持试管上端，用右手指轻轻弹动试管下部，使管内溶
13、液作旋涡运动。3. 倒转混匀法 适用于有塞量筒和容量瓶、试管内容物的混匀。一般试管内容物的混匀可用聚乙烯等薄膜封口，再用手按住管口倒转混匀。4. 吸管混匀法 用吸量管将溶液反复吸放数次，使溶液充分混匀。5. 玻棒搅动法 适用于烧杯内容物的混匀，如固体试剂的溶解和混匀。6. 甩动混匀法 右手持试管上部，轻轻甩动振摇，即可混匀。7. 电磁搅拌混匀法 在电磁搅拌机上放置烧杯，在烧杯内放入封闭于玻璃或塑料管中的小6铁棒，利用磁力使小铁棒旋转以达到混匀杯中液体的目的，适用于酸碱自动滴定，pH 梯度滴定等。8. 振荡器混匀法 利用振荡器使容器中的内容物振荡，达到混匀的目的。9. 注意：(1) 混匀时须防止
14、容器内液体溅出或被污染。(2) 严禁用手指直接堵塞试管口或锥形瓶口振摇。三、离心机的使用方法使用离心机前，应检查离心机转动状态是否平稳，以确定离心机的性能；检查套管与离心管大小是否相配，套管是否铺好软垫（用棉药或橡皮） ，检查套管底部应无碎玻璃片或漏缝。检查合格后，将一对离心管（待分离管与非分离空白管）放入一对套管中，然后连套管一起分置粗天平两侧，用滴管向非分离空白管一侧加水，直至天平两侧彼此相等为止。将各对平衡的套管连同内容物放置于离心机内，两个等重的离心管必须放于对称位置。放妥后，接通电源开关，逐步扭动转速旋钮，缓慢增加离心机转速，直到所需的转速。达规定时间后，将转速旋钮逐步调回零，待离心
15、机停稳后，取出离心管。四、721 型分光光度计 使用方法如下： 1. 接通电源（指示灯亮） ，预热 1520 分钟。2. 灵敏度选择钮放在“1”档（如调不到“OD=0” 时选用较高的档次） 。3. 转动波长选择钮，选用所需的波长。4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“0 电位器”使电表指针对准 T=0 处。5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100 电位器” ，调准电表指针使之指向 OD=0（T=100）处。6. 拉动比色杯座的拉杆，使测定杯进入光路，迅速从电表上读出光密度值，并记录。测读过程中，随机拉回拉杆到原位，使空白杯进入光路，随时调整 OD=0。7. 比色完毕
16、后，关上电源开关，取出比色杯，将比色杯暗箱盖好，清洗比色杯并晾干。7五、722 型分光光度计使用方法如下： 1. 接通电源（指示灯亮） ，预热 1520 分钟。2. 灵敏度选择钮放在“1”档（如调不到“OD=0” 时选用较高的档次） 。3. 转动波长选择钮，选用所需的波长；调节“TAC 旋钮”至“T”刻度。4. 揭开比色杯暗箱盖，转动“0 电位器”使显示器显示为“0” 。5. 将比色杯放入比色杯架，使空白管对向光路，盖好比色杯暗箱盖。转动“100 电位器” ，使显示器显示为“100” 。6. 调节“TAC 旋钮”至“A”刻度，观察显示器显示是否为“0” ；若不为“0” ，调节“Abs0旋钮”使显示器显示为“0” 。7. 拉动比色杯座的拉杆，使测
