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1、答辩记录1.DREB 转录因子是怎样被发现的？答：1994 年，科学家 Yamaguchi 等在分析转基因拟南芥的 rd29A 启动子时，发现了DRE 顺式作用元件并且检测到了与 DRE 顺式作用元件相结合的蛋白因子DREB 转录因子。1997 年研究者 Stokinger 从拟南芥中利用酵母单杂交首次分离出了能够与DRE 顺式作用元件相结合的 DREB 转录因子并将其命名为 CBF1。2.简述在 DREB 转录因子的转基因工程方面，木本植物杨树的研究。答：陈金焕等利用 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵法)提取胡杨的总 RNA,用反转录 PCR进行扩增，通过对 PCR 产物进行序列分析，同源性分
2、析和功能分析确定了 PeDREB2是属于 A-2 亚组的 DREB 转录因子，并通过实验证明转 PeDREB2 烟草植株的耐盐性提高且不引起生长迟缓，从而说明胡杨中的 PeDREB2 基因能够提高植物对高盐胁迫的耐性。3.指出 DREB 转录因子及其下游基因的调控元件。答：通过对拟南芥的启动子进行分析，研究者们发现除了 DRE 顺式作用元件外，ICE1,HOS1，HOS2，LOS4 和 MYB15 都能调控 DREB 及其下游的基因。ICE 上游转录因子在受到低温的激活后，可以诱导 DREB 基因。目前，除了拟南芥中能分离出 ICE1 基因外，小麦，甜杨等植物中也可分离出 ICE1 基因，此外
3、，在大豆，棉花，马铃薯等植物中发现了 ICE1 的同源序列。HOS1 蛋白含有一段类似于锌指结构域的 E3 泛素连接酶，在常温的情况下，HOS1 存在在细胞质当中，受泛素，ICE1 和低温的调节在细胞核内的水平会被升高。在温度降低的情况下 HOS1 将泛素转移到 ICE1 蛋白中，使得 ICE1 被降解，即 HOS1是寒冷响应基因的负调控因子。MYB15 通过与 DREB1 转录因子的启动子区域结合从而对 DREB1 转录因子进行负调控.并且 ICE1 对 MYB15 进行负调控，ICE1 与 MYB15 相互作用会减弱表达。HOS2 蛋白即 FIERYI 蛋白，它具有肌醇多磷酸盐磷酸酶的活性，可以降解第二信使 1,4,5-三磷酸肌醇(IP 3)。因此推测 HOS2 蛋白通过水解 IP3来调控内质网上的 IP3配体从而影响细胞内 Ca2+浓度，进而对 DREB1 基因的表达进行调控。LOS4 蛋白是 RNA 解旋酶蛋白家族的成员，研究者们推测它能通过调控 DREB1的转录或通过调控 DREB1 的表达激活子或抑制子的转录从而间接地影响 DREB1 基因的转录。
