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1、1益脑胶囊对大鼠脑缺血再灌注后脑组织细胞间黏附分子表达的影摘要 目的：观察益脑胶囊对大鼠脑缺血再灌注后脑组织中细胞间黏附分子-1（ICAM- ）表达及其影响。方法：用 45 只Wistar 大鼠，随机分为假手术组、模型组、益脑胶囊组，利用线栓法制作大脑中动脉缺血-再灌注模型。使用神经功能评分 NSS 标准进行评分；免疫组化染色观察再灌注后不同时间点细胞间黏附分子ICAM-1 的表达。比较不同实验组相同灌注时间点 ICAM-1 表达的变化及神经功能改变。结果：局灶性脑缺血再灌注后，相同时间点模型组的神经功能评分和 ICAM-1 表达均较假手术组升高，治疗组均低于模型组。结论：益脑胶囊通过降低 I
2、CAM-1 在缺血区的表达，抑制炎症反应，达到健脑益智之功效。 关键词 益脑胶囊；缺血 -再灌注；细胞间黏附分子-1 缺血性脑血管病给患者带来严重的损伤，其中炎症级联反应是造成损伤机制中重要的一方面，因此减轻炎症反应对脑保护作用尤其重要。现已明确，炎症级联反应中细胞间黏附分子起着主要作用。因此如果某种药物可以通过影响细胞间黏附分子的表达而减轻炎症反应，则对缺血性脑血管病有重要的意义。近几年中药制剂越来越受到人们的重视，并已广泛应用于临床，取得了较好的效果。益脑胶囊为纯中药制剂，有健脑益智，益气健脾，滋肾养肝，通窍2醒脑之功，但其对缺血性脑损伤的保护作用及是否对脑缺血再灌注后炎症反应起抑制作用尚
3、未有报道。本研究采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，通过神经功能评分及免疫组化染色，来观察益脑胶囊是否通过抑制炎症反应来发挥神经保护作用论文代写。 1 资料与方法 1.1 药品与试剂 细胞间黏附分子-1（ICAM-1）免疫组化试剂盒购自北京博奥森生物技术有限公司；益脑胶囊（福州闽海药业） 。 1.2 方法 1.2.1 动物 Wistar 大鼠 45 只，体重 180220 g，由潍坊医学院动物中心提供，随机分组。 1.2.2 分组及处理 动物随机分为 3 组：假手术组、模型组、益脑胶囊治疗组。药物组按照脑缺血再灌注 2、12、24 h 分为 3 个亚组。灌胃给药，每天 1 次，连续 2 周，模型组
4、给予等量 0.9%NaCl 溶液，余相同。 1.2.3 模型制作 1.2.3.1 假手术组：颈部正中切口暴露右侧颈总动脉缝合皮肤。1.2.3.2 模型组：模型制作参照改良的 Longa-Zea 氏线栓法1，大鼠用 10水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉，麻醉大鼠仰卧固定于手术木板上，颈部正中切口，从两侧颌下腺之间剪开浅3筋膜，显露右侧胸锁乳突肌。钝性分离胸锁乳突肌与胸骨舌骨肌间的肌间隙，暴露颈总动脉（CCA） 。分离颈总动脉（CCA） 、颈内动脉（ICA） 、颈外动脉（ECA ） ，在 ECA 近心端穿手术线，结扎 CCA近心端及 ECA 近心端，并用无创动脉夹夹住 ICA 近心
5、端，在 CCA靠近动脉分叉处穿一手术线打一松结，以防插鱼线时切口处渗血，在 CCA 距动脉分叉处 0.5 mm 处剪一小口，经此小口插入备好的栓线，经 ICA （松开此处动脉夹）入颅至大脑前动脉（ACA）以阻断MCA 的血流（向内上方的角度插入，以防进入翼鄂动脉）2。尼龙丝平均插入深度为 1922 cm3，结扎 ICA 以固定尼龙丝和防止出血，缝合皮肤。栓塞 2 h 后麻醉拔出栓线实现再灌注，分别于再灌注后 2、12、24 h 处死动物。大鼠苏醒后出现手术同侧Horner 征和对侧肢体活动障碍为模型成功。1.2.4 观察指标 1.2.4.1 神经功能评分（NSS ）：每组大鼠分别于再灌注后2、
6、12 、24 h 进行神经功能评分，最高 18 分，最低 0 分。 1.2.4.2 免疫组化测定 ICAM-1 表达：到预定时间，大鼠用0.9%NaCl 溶液和多聚甲醛进行心脏灌流固定，断头取脑。经尾壳核水平行冠状切片（脑片厚度约 15 mm，共 A、B、C、D、E 5 个脑片） ，固定、脱水、包埋成蜡块，连续切片，连取 5 张作免疫组化染色，按照试剂盒说明书用 SP 法进行 ICAM-1 免疫组化染色，阳性细胞为胞浆棕黄色颗粒。阴性对照以 PBS 代替一抗，其余步骤同上。每张切片在 1040 倍显微镜下随机选取缺血区内的 4 个视野，进行 ICAM-1 阳性细胞的计数。 41.3 统计学分析
7、 数据采用 xs 表示，应用 SPSS 16.0 软件进行统计学分析。组间差异采用单因素方差分析，以 =0.05 作为显著性检验标准。 2 结果 2.1 神经功能评分 假手术组手术后无神经功能缺损体征出现，神经功能缺损评分为 0 分。模型组与治疗组均有不同程度的神经功能缺损，治疗组神经功能有所改善（P0.05） ，且再灌注 24 h 改善最明显（P0.01） 。数据见表 1。 2.2 ICAM-1 的表达 在假手术组 ICAM-1 呈少量低表达，缺血灶大脑皮质内有明显表达（图 1） 。模型组较假手术组表达均增高（P0.01） ，且呈逐渐增高的趋势（图 2、 3、4） 。治疗组相同时间点表达均低
8、于模型组，且再灌注 12、24 h 降低更明显（图 5、6 、7） 。数据见表 2。 同一时间点与假手术组比较，*P0.01；与模型组比较，P0.05，P0.01 3 讨论 近年来黏附分子在脑缺血再灌注损伤中作用的研究已成为研究的热点之一。在正常情况下，血管内皮细胞上仅有少量 ICAM-1表达，脑缺血时，在 TNF-、IL-1 和 INF 等共同作用下，ICAM-1在血管内皮细胞的表达明显上调，介导中性粒细胞黏附，在脑缺血再灌注损失中起重要作用4。黏附分子在脑缺血后的作用已在实验5性持久性或短暂性局灶脑缺血动物模型中得到证实。在 20 世纪 90年代，有许多关于动物脑缺血或再灌注后在缺血区域黏
9、附分子表达升高的报道，比如 ICAM-1 等5。抗黏附分子实验研究证实，针对ICAM-1、P-选择素等的单克隆抗体可以减轻脑或脊髓的缺血损害，有神经保护作用，并且对神经的保护作用在短暂缺血然后进行再灌注后较明显，而在永久缺血模型中不明显6。本研究结果显示，脑缺血再灌注 2 h 后 ICAM-1 的表达开始升高，并于 24 h 达到峰值。应用益脑胶囊后能明显下调 ICAM-1 的表达，且能够改善神经功能，提示益脑胶囊可能通过降低 ICAM-1 的表达抑制炎症反应，发挥脑保护作用。 益脑胶囊为纯中药制剂，主要由鹿茸、人参、党参、灵芝、茯苓、龟甲胶、麦冬、五味子、石菖蒲、龙骨、远志等组成，有健脑益智
10、，益气健脾，滋肾养肝，通窍醒脑之功。其中鹿茸已经被动物试验证明可抑制各种急慢性炎症，保护细胞质膜的完整性及改善线粒体、内质网等细胞器的损伤7。更有研究表明鹿茸多肽具有促进神经再生、加快神经轴突生长速度，有助于功能恢复的作用8。党参水提物通过提高机体免疫功能，清除衰老机体产生过多的自由基，抗脂质过氧化而起到延缓衰老的作用9。人参中含有的主要有效成分人参皂苷同时具有保护脑细胞免受缺血再灌注损伤及抗缺氧等作用10 。近几年来实验已经证明益脑胶囊具有抗衰老、改善学习记忆等功效11 。本实验结果显示益脑胶囊可抑制脑缺血再灌注后 ICAM-1 的表达，进而抑制炎症反应，减轻缺血再灌注后损伤，6这可能是益脑
11、胶囊的脑保护作用机制之一。参考文献 1Zea-Longa E, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats J.Stroke,1989,20(1):84-91. 2王诺,马风杰 ,张磊,等.线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的改进与体会J.潍坊医学院学报,2010,32(1):27-28. 3吴远华,朱广旗 ,胡蓉,等.线栓法大鼠脑缺血再灌注模型改良与评价J.中国实用神经疾病杂志 ,2010,13(18):6. 4路文革,白宏英
12、,王建平.垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子表达的影响J.中国实用神经疾病杂志,2007,10(2):54-55. 5Jander S, Kraemer M, Schroeter M, et al. Lymphocytic infiltration and expression of intercellular adhesion molecule-1 in photochemically induced ischemia of the rat cortexJ. J Cereb Blood Flow Metab, 1995,15(1):42-51. 6Zhang RL, C
13、hopp M, Li Y, et al. Anti-ICAM-1 antibody reduces ischemic cell damage after transient middle cerebral artery occlusion in the ratJ.Neurology,1994,44(9):1747-1751. 7夏彦玲,李和平 ,李婷婷,等.鹿茸对小鼠酒精急性肝损伤保护7作用的显微及超微结构分析J.东北林业大学学报,2010,38(7):115. 8佟鑫,刘玉侠 ,吴荻,等.鹿茸多肽组分药理作用的研究J.中国医药技术经济与管理,2009,3(4):60-62. 9王岚,张帆, 王艳,等.甘肃党参水提物对 D-半乳糖所致衰老小鼠脑组织 SOD、MDA 影响的实验研究J.中国中医药科技,2010,17(2):148-149. 10丁伯平,杨解人, 陈国祥,等.益脑胶囊的药效学研究J.中成药,2000,22(4):282-284. 11丁伯平,王国平, 徐朝阳,等.益脑胶囊对小鼠免疫功能的影响和抗氧化作用的研究J.安徽医科大学学报,2000,35(1):35-36.
