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1、临检（二）知识点整理第一节 细胞病理学基本检验技术1、标本采集方法：直接采集法自然分泌液采集法灌洗法摩擦法细针穿刺抽吸法2、涂片制备方法：推片法吸管推片法涂抹法压拉涂片法喷射法印片法微孔滤膜过滤法3、标本固定（1）目的：固定：保持细胞的自然形态，以防细胞的自溶及细菌导致的腐败保持细胞内的化学物质（2）常用固定液：Carnoy 固定液：处理明显血性的标本，特点是渗透性强，固定效果好乙醇乙醚固定液95%乙醇固定液（3）方法：带湿固定（wet fixation）：涂片后标本尚未干燥即行固定的方法称为带湿固定。将标本涂片迅速浸入固定液中，在固定过程中细胞不与空气接触，使细胞质脱水、蛋白质凝固。此固定法
2、适用于巴氏染色或 HE 染色，该法固定后染色的细胞结构清晰，染色鲜艳。干燥固定：此固定方法适用于瑞姬染色。湿固定法细胞变小，干燥固定细胞变大。4、标本浓缩技术：离心法细胞离心法滤膜过滤法细胞块法液基细胞学技术5、染色方法：（1）巴氏染色法：鳞状上皮过度角化细胞胞质呈橘黄色；角化细胞显粉红色；而角化前细胞显浅绿色或浅蓝色，适用于上皮细胞染色或观察阴道涂片中激素水平对上皮细胞的影响。（2）苏木精伊红（hemotoxylin eosin,HE）染色法：适用于痰液涂片、穿刺细胞标本。胞核呈紫蓝色，胞质淡玫瑰红色，红细胞呈淡朱红色。（3）瑞特吉姆萨染色法（wrightgiemsa atain ） ；本方
3、法多用于血液，骨髓细胞学检查。六、细胞病理学诊断1、 （多选）涂片通常由各种复杂细胞成分组成，因病变组织或采样部位不同，涂片上可同时见到正常和异常细胞。通常，涂片上正常同类同层细胞形态是均一的，细胞核反映的是细胞增殖状态和能力，细胞质反映的是细胞起源、功能状态和分化程度。细胞活性增加可以是生理性的，如激素调节引起的细胞增生（子宫内膜的周期性增生、生长激素促使骨骼的生长） ，也可以是损伤性的，如修复（repair）和再生（ regeneration） ，或肿瘤性异常。细胞活性减低多为激素（如低甲） 、衰老（如卵巢功能降低）或凋亡等生理性情况，细胞可发生萎缩和退化变性。（一）细胞数量1、细胞过多（
4、hypercellularity）表示增殖过程指数增加，代表增生或肿瘤。2、细胞过少（paucicellularity）也并非表示无恶性细胞的存在，与标本的采集、肿瘤进展、肿瘤类型有关。分化差的恶性肿瘤时，细胞常散在脱落，形态类似于正常。因此，足够量的标本是提高结果解释可靠性的重要因素。（二）细胞结构特征在细胞学涂片中常常缺乏细胞结构特征，而采集大量细胞时能显示组织学特征。1、涂片上，正常上皮细胞常保持细胞极性（cell polarity）和细胞间黏附性（intercellular adhesion） 。所谓极性，就是一种不对称性，一种非均衡性，这种不对称性是细胞生长的基础，正是因为细胞的不对
5、称性生长，产生了极性，这才完成细胞的各项功能活动。极性：细胞不同表面在结构和功能上具有明显差别，它们朝向身体表面或有腔器官的腔面称为“游离面”，与游离面相对的朝向深部组织的一面称为“基底面” ，而上皮细胞之间的连接面称 “侧面” 。细胞间黏附性，是细胞间信息交流的一种形式，可溶性递质称细胞黏附分子，是一种跨膜糖蛋白。相邻细胞以钙黏蛋白相互结合，钙黏蛋白也是一种细胞粘附分子，镶嵌于细胞膜。2、腺上皮细胞多呈规则排列，单层成片，正面观呈“蜂窝状” ，侧面观呈“尖板条栅栏状” 。3、增生和良性肿瘤的上皮细胞常保持良好的黏附性，呈特殊的外观，如乳头状、玫瑰花样结构。4、合胞体样细胞边界改变和极性紊乱时
6、应考虑肿瘤的可能。5、典型的恶性上皮细胞的极性差，细胞间相互重叠，有时三维状聚集呈球形。6、 、癌细胞具有异常黏附性和异常聚集性 2 个主要特征。但是，正常淋巴细胞、分化差癌细胞的细胞间黏附性差，常呈散在分布，而淋巴瘤细胞（肿瘤性淋巴细胞）则相反，两者很难鉴别。7、良性基质细胞常呈卵圆形、梭形，细胞间疏松黏附或呈裸核，恶性基质细胞（肉瘤）与良性基质细胞类似，但细胞核和细胞质多异常。（三）细胞核特征：是判断良性细胞与恶性细胞的关键。 （判断：多核细胞并不一定是恶性）细胞核形态的异常称为核异质（dyskaryosis） ，分为轻度、中度和重度，或者低度和高度。1、良性细胞核的一般特点：细胞核体积相
7、对较小，核呈圆形、卵圆形或肾形，核边界光滑，染色质呈细颗粒状，分布均匀；涂片上同一类型细胞之间差别很小，称为单形性。 2、恶性细胞核的一般特点：核 DNA 含量增加会产生核染色致密，即染色过深（hyperchromasia） ，核染色质分布不规则，呈粗颗粒状、核膜增厚。细胞核大小不均（anisokaryosis）时，常伴核膜异常增加，边界不规则，呈沟状、切迹状、皱缩状。核大小、形态和染色异常又称为核多形性（nuclear pleomorphism） 。常用核质比（nuclear/cytoplasmic ratio，N/C）来表达细胞核和细胞质的相对比例，分化差的细胞常具大核，而细胞质的量无变化
8、，故核质比增大。3、良、恶性细胞的细胞核变化与特征变化 良性细胞特征 恶性细胞特征数量 细胞核常单个，破骨细胞、合胞体滋养层细胞可见多核，再生或修复细胞如肝细胞和软骨细胞可见双核。常见多个核，也可见于炎症和肿瘤形态 圆形、卵圆形或肾形 形态、结构异常染色 均匀 常深染核仁 细胞核常含有小的单个核仁和相关蛋白质。 肿瘤或非肿瘤性增生时，常见大核仁。核变性 变性染色质常呈致密浓缩状物质，称为核固缩（karyopyknosis） ，如核破裂、核溶解、染色质溶解。细胞溶解形成裸核，常淡染可见核残余物、核膜破裂成丝球状，常见于淋巴样细胞或小细胞未分化癌细胞有丝分裂 正常细胞有丝分裂很罕见 有丝分裂增多，
9、常见异常纺锤体（四）细胞质特征细胞质内贮存物质（如黏液、脂肪、碳水化合物、激素或结晶）只有通过特殊染色才能鉴别。正常细胞或分化好的恶性细胞，常见黏液球、泡沫状微空泡、微绒毛刷状缘和纤毛（cilia） 。邻近细胞会出现细胞质铸模（moulding）现象，少数有细胞吞噬现象，见于良性或恶性疾病，后者更常见。细胞质退化性改变包括肿胀性、水肿性、空泡样（vacuolation）变化，质膜完整性丧失使细胞内容物溢出，即细胞溶解（cytolysis ） 。（五）背景和人为因素浸润性肿瘤常伴有血性、坏死性、变性细胞碎片，称为肿瘤素质（tumor diathesis） 。人乳头状瘤病毒感染会产生细胞凹陷症（k
10、oilocytosis） ，单纯疱疹病毒感染会导致细胞多核，核染色质呈“毛玻璃样”（ground glass） ，巨细胞病毒感染会出现“鹰眼样” （owl eye）核包涵体。第二节 正常细胞形态学根据细胞学标本特点，将细胞分为上皮源性细胞和非上皮源性细胞。同一来源细胞的组织学和细胞学之间是有差别的。在组织学上，细胞呈侧面观；在细胞学涂片上，细胞多呈正面观。 一、上皮细胞上皮组织覆盖于器官表面或形成腺体和腺体样结构。各种器官和系统组成的上皮类似，根据功能分为 5 种：鳞状上皮细胞、分泌性腺上皮、纤毛上皮、间皮、尿路上皮。（一）鳞状上皮1组织学 鳞状上皮是一种多层上皮，覆盖于器官表面，直接与外部环
11、境接触，分为 2 种亚型：角化型：分布皮肤和外阴表层。非角化型：分布于口腔前庭、角膜、咽、食道、阴道、外阴内层和子宫颈阴道口。2细胞学 在细胞学涂片上，鳞状上皮细胞能很好保持完整形态。多数鳞状上皮细胞呈扁平、多角形、边界清晰，大小与来源有关。3、鳞状上皮由多层上皮组成，通常分为 4 层。基底层细胞：正常情况下罕见，是唯一具有有丝分裂能力的细胞。（1）内底层细胞：正常为一层低柱状或立方形细胞，位于最底层，具有很强的增殖能力，又称为生发层。细胞最小，直径约10m，核相对较大；（2）外底层细胞：在内底层细胞之上，直径约 1015m，由 23 层大细胞组成。中间层细胞：直径约 1540m，由数层大细胞
12、组成。核相对较小；表层细胞：最大，直径约 4060m，由各种大细胞组成。细胞扁平，呈不规则的多边形。根据细胞成熟程度，又分为角化前细胞、不完全角化细胞和完全角化细胞。（1）角化前细胞：细胞核略小于中间层细胞，染色较深，但染色质仍然均匀、细致呈颗粒状，胞质量显著增多；（2）不完全角化细胞：细胞核明显缩小，核致密、深染、固缩，核质交界处有狭窄空晕，有时近核处可见几个棕色小点，胞质透明，细胞可卷角；（3）完全角化细胞：细胞核小时，胞质极薄。可见皱褶、卷角，此种为衰老死亡的细胞。基底层、副基底层、中层的细胞核呈球形，结构疏松，直径约 8m。 。表层上皮的细胞质常嗜酸性，底层上皮的细胞质常嗜碱性。空气干
13、燥涂片染色性会从嗜碱性变为嗜酸性。4、 （多选）鳞状上皮细胞从底层到表层细胞形态的变化规律为：细胞体积由小到大细胞核由大到小，最后消失核染色质由细致、疏松、均匀到粗糙、致密、固缩胞质量由少到多核质比由大到小。（二）分泌性腺上皮1组织学 分泌性腺上皮是具有分泌功能的上皮器官，能与外部环境进行交换，分布于消化道和相关腺体、男性和女性生殖道。覆盖在肠道和子宫颈内膜表面形成内陷或腺管，或与表面导管相连形成腺体，或单个散在分布，如呼吸道纤毛上皮中杯状细胞。2细胞学 在细胞学涂片上，保存良好的分泌细胞（ secretory cells）呈立方形或柱状，长 1020m，宽 10m，具有极性。细胞质呈透明状或
14、浑浊，常含黏液。细胞核结构疏松，平均直径 8m，多偏位，位于细胞底部，常有小核仁。分泌细胞很难保存，涂片上细胞边界常消失，形态破坏，细胞质呈淡嗜碱性。细针吸取标本中还可见肌上皮细胞，为长形的、具有收缩功能的细胞，体积较小，呈逗点形，核深染，细胞质极少，如腮腺和腮腺导管。分泌性腺上皮细胞由随机分布的、小的基底层细胞（或储备细胞）更新。（三）纤毛上皮1组织学 纤毛上皮呈柱状，罕见立方形，分布于呼吸道，如支气管、子宫颈内膜、输卵管和子宫内膜。纤毛细胞（ciliated cells）常与分泌黏液或相关物质的分泌细胞同时出现，如杯状细胞。纤毛上皮常由几层细胞组成，纤毛朝向器官腔面，而小的基底层细胞是上皮
15、细胞更新的来源。在呼吸道中支气管纤毛细胞被覆黏液，通过纤毛运动，能将灰尘或其他外来物质包裹于黏液并排出。2细胞学 纤毛细胞呈柱状，罕见立方形，一侧扁平有纤毛，具有嗜酸性，常固定在细胞的致密层上（即终板） 。一旦纤毛破坏，则出现终板的细胞就是纤毛细胞。纤毛细胞的长度和宽度不定，在呼吸道中，纤毛细胞长约 2025m，宽约 10m，而其他纤毛细胞较小。细胞呈逗点形，细胞质缩窄侧，呈鞭状。细胞核透明，有时呈颗粒状，直径约 8m，常偏位。（四）间皮细胞1组织学 体腔器官如胸腔、心包腔和腹腔由单层扁平上皮覆盖，称为间皮。间皮是一种起源于中胚层的特殊上皮。在正常环境下，间皮的功能是调节体腔内液体的量和组成，
16、间皮细胞具有胞饮空泡和微绒毛。在异常情况下，体腔内液体量增加，形成积液，间皮层增厚。2细胞学 脱落的间皮细胞（mesothelial cells）可成片或成团，呈大的立方形，邻近细胞间形成透明区域，细胞表面充满微绒毛。单个细胞呈球形，直径约 20m。细胞质在核周分布较致密。细胞核细颗粒状，呈球形，直径 8m，偶见小核仁。（五）移行上皮细胞移行上皮细胞是介于鳞状上皮细胞和假复层上皮细胞之间的一种特殊类型细胞，主要分布在肾盂、输尿管、膀胱及尿道起始部。其细胞形态可随器官的舒缩而发生变化，故又称变形细胞。当器官充盈是，细胞膜展开拉平，细胞变薄，体积增大。当呈收缩状态时，细胞层次多，可达 67 层，细胞变厚，体积变小。可分为基底层移行细胞、中间层移行细胞和表层移行细胞。二、非上皮细胞（一）血细胞在细胞学涂片上，常见红细胞和白细胞。保存良好的红细胞常提示新鲜出血，有生理性（如月经出血） 、病理性（如创伤）
