《P-V杀白细胞素相关肺损伤的炎症机制研究（毕业设计-临床检验诊断学专业）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《P-V杀白细胞素相关肺损伤的炎症机制研究（毕业设计-临床检验诊断学专业）（55页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、目 录英 文 缩 略 词 表 1中 文 摘 要 2英 文 摘 要 4正 文 P-V 杀白细胞素相关肺损伤的炎症机制研究 71 前 言 72 材 料 与 方 法 83 结 果 204 讨 论 295 结 论 33参 考 文 献 34综 述 金 黄 色 葡 萄 球 菌 Panton-Valentine 杀 白 细 胞 素 的 研 究 进 展 38参 考 文 献 43staphylococcus aureus 社 区 获 得MRSA安 徽 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文英文缩略词对照表英 文 简 写 英 文 全 称 中 文 全 称MRSA Methicillin-resistant stap
2、hylococcus aureus耐 甲 氧 西 林 金 黄 色葡 萄 球 菌CA-MRSACommunity-associatedmethicillin-resistantPVL Panton-Valentine leukocidin P-V 杀 白 细 胞 毒 素NF-B Nuclear factor-kappa B 核 转 录 因 子 -BIL-6 Interleukin-6 白 介 素 -6IL-8 Interleukin-8 白 介 素 -8IL-10 Interleukin-10 白 介 素 -10TNF- Tumor necrosis factor- 肿 瘤 坏 死 因 子 DA
3、B Diaminobenzidine 二 氨 基 联 苯 胺PMNs Polymorphonuclear leukocytes 多 形 核 粒 细 胞ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay 酶 联 免 疫 吸 附 实 验BALF Bronchoalveolar lavage fluid 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液PBS Phosphate Buffer 磷 酸 盐 缓 冲 液HE Hematoxylin-eosin 苏 木 精 -伊 红 染 色kDa Kilo-dalton 千 道 尔 顿LB Luria-Bertani medium LB 培 养
4、基OD optical density 光 密 度DMSO Dimethyl Sulfoxide 二 甲 基 亚 砜DHR123 Dihydrorhodamine123 二 氢 罗 得 明 123SDS-PAGESodiumdodecylsulphatepolyacrylamidegelelectrophoresis1十 二 烷 基 磺 酸 钠 -聚丙 烯 酰 胺 电 泳（安 徽 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文中文摘要P-V 杀 白 细 胞 素 相 关 肺 损 伤 的 炎 症 机 制 研 究目的：金黄色葡萄球菌是引起人类各种感染性疾病的重要病原菌，携带 P-V 杀 白细 胞 素 (Pa
5、nton-Valentine leukocidin, PVL)基 因 的 金 葡 菌 致 病 性 增 强 ， 分 布 更 广 ， 可引起社区人群的严重感染。大量临床流行病学资料都强烈提示，PVL 是金黄色葡萄 球 菌 所 致 坏 死 性 感 染 的 重 要 毒 力 因 素 ，但其 致 病 机 制 尚 不 清 楚 。 本 课 题 通 过 体内 试 验 观 察 重 组 PVL（ rPVL） 引 起 兔 肺 炎 性 损 伤 的 变 化 ， 探 讨 多 形 核 粒 细 胞(PMNs)、 核 转 录 因 子 -B（ NF-B） 和 细 胞 因 子 在 肺 炎 症 性 损 伤 中 的 作 用 ， 为 阐
6、释PVL 的致病机制，寻求 PVL 相关肺炎症性损伤治疗方法提供新思路。方法：（1 ） 动 物 模 型 的 建 立 ： 取 45 只 新 西 兰 大 白 兔 随 机 分 为 3 组 ， 分 别 为 正 常对 照 组 、 rPVL 组 和 VCR+rPVL 组 （ 实 验 前 用 长 春 新 碱 预 处 理 ）， 每 组 15 只 。 正 常对 照 组 使 用 PBS 灌 肺 ， 其 它 两 组 均 用 rPVL 灌 肺 。 2） BALF 中 PMNs 计 数 、 凋 亡/坏 死 、 ROS、 LDH 和 LPI 检 测 ： 造 模 后 9 h， 采 集 支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 （ B
7、ALF） ，计 数 BALF 中 PMNs， 流 式 细 胞 术 （ FCM） 检 测 BALF 中 PMNs 的 凋 亡 /坏 死 率 和活 性 氧 （ ROS）自由基释放量，比色法检测 BALF 上 清 中 乳 酸 脱 氢 酶 （ LDH） 含量 ， BCA 法 检 测 肺 通 透 指 数 （ LPI） 。 （ 3） 肺 组 织 湿 干 比 及 病 理 检 测 ： 造 模 后 9 h，收 集 肺 组 织 检 测 湿 重 /干 重 比 ， 并 进 行 苏 木 精 -伊 红 （ HE） 染 色 。 （ 4） 肺 组 织 细 胞因 子 和 NF-B 检 测 ： 分 别 于 造 模 后 3h、 6
8、h 和 9h 收 集 肺 组 织 ， 每 个 时 间 段 5 只 ，ELISA 方法检测肺组织匀浆上清中 IL-6、 IL-8、 TNF- 和 IL-10 含 量 变 化 ， 免 疫 组织 化 学 和 Western blotting 方 法 检 测 肺 组 织 NF-B p65 蛋 白 的 表 达 。结果：（1 ） 与 正 常 对 照 组 比 较 ， rPVL 组 BALF 中 PMNs 数 量 显 著 增 高 ， 为 (3.010.02)106/ml vs（ 0.570.01)106/ml； BALF 中 PMNs 以 晚 期 凋 亡 为 主 ， 晚 期 凋亡 率 显 著 增 高 ， 为
9、（ 63.563.53） % vs（ 0.950.33） %； PMNs 释 放 ROS 增 多 ， 平均 荧 光 强 度 （ MFI） 为 （ 1.560.39） vs（ 0.410.03） ； LDH 含 量 和 LPI 均 显 著 增 高 。2（安 徽 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文VCR+rPVL 组 BALF 中各项炎症指标均无明显增高。 2） 与 正 常 对 照 组 比 较 ， rPVL组肺湿重/ 干重比显著增高，为（6.450.35） vs（ 3.510.17） ，肺组织病理检查显示 有 弥 漫 性 炎 性 细 胞 浸 润 、 出 血 、 水 肿 等 。 VCR+rPVL
10、 组 肺 组 织 湿 重 /干 重 比 无 明显 增 高 ， 病 理 检 查 未 见 明 显 炎 性 变 化 。（ 3） rPVL 组肺组织匀浆上清中 IL-6、 IL-8、TNF- 含 量 逐 渐 升 高 ， IL-10 含 量 于 9h 开 始 升 高 。 VCR+rPVL 组 各 种 细 胞 因 子 含量 均 无 明 显 升 高 。 免 疫 组 织 化 学 方 法 检 测 结 果 显 示 ， rPVL 组 NF-Bp65 被 激 活 转入核内，染色以核明显，且呈时间依赖性。V CR+rPVL 组胞核中极少见或没有阳性 免 疫 反 应 物 质 。 Western blotting 方 法
11、检 测 结 果 表 明 ， rPVL 组 肺 组 织 细 胞 核 内NF-Bp65 蛋 白 表 达 明 显 增 加 ， 且 具 有 时 间 依 赖 性 。结论：（1 ） 本 课 题 通 过 体 内 实 验 证 实 rPVL 可 以 不 依 赖 于 细 菌 的 生 存 和 繁 殖 ， 单独 引 起 肺 组 织 炎 症 性 损 伤 。 （ 2） rPVL 引 起 肺 炎 症 性 损 伤 依 赖 PMNs 的 招 募 和 聚集 ， 继 而 坏 死 ， 释 放 细 胞 毒 素 颗 粒 内 容 物和通 过 呼 吸 爆 发 释 放 活 性 氧 代 谢 产 物 ，引 起 肺 组 织 损 伤 。 （ 3） r
12、PVL 感 染 后 ， 肺 组 织 表 现 有 NF-B 持 续 活 化 ， 促 炎 因 子IL-6、 IL-8、 TNF- 含 量 逐 渐 升 高 ， 后 期 伴 有 抑 炎 因 子 IL-10 升 高 。 推 测 rPVL 可能 通 过 激 活 NF-B， 诱 导 促 炎 因 子 产 生 ， 促 发 炎 症 级 联 反 应 ， 引 起 肺 组 织 损 伤 。关键词：金黄色葡萄球菌 Panton-Valetine 杀 白 细 胞 素 多形核粒细胞 核转录因子-B3安 徽 医 科 大 学 硕 士 学 位 论 文英文摘要The Study on the Inflammatory Mechanis
13、m of Panton-ValentineLeukocidin-Induced Lung InjuryObjective: Staphylococcus aureus, an important human pathogen, can cause a series ofinfections. The strains producing Panton-Valentine leukocidin(PVL) which contributeto the virulence, are widespread and cause a series of severe community associated
14、infections. Compelling epidemiological data point to PVL as an important virulencefactor in S.aureus necrotizing infections, but its pathogenic mechanisms are notcompletely known. Therefore, in the present study, from animal experiment studies, westudy the mechanism of recombinant PVL (rPVL)-induced
15、 lung inflammation andinjury. To explore the role of polymorphonuclear leukocytes （ PMNs ） , nucleartranscription factor-B (NF-B) protein and cytokines in Panton-Valentine leukcocidin（ PVL） induced lung inflammation and injury. All these studies may establish thebasis for the further studies of its pathogenic mechanism and shed ligh
