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1、Y1212119护J-涨学硕士学位论文作者 睦整鸿 ，完成日期 2壁壁2生垒旦。培养单位一 生全盘堂堂瞳 一一、指导老师 二蔓丝蓥塾撬专 业 二丝生塑堂一 研究方向丝垒堑鲍佥差鉴蕉鱼麈圃：授予学位日期 一 生 。i旦。 旦山葵病原菌拮抗菌的筛选、鉴定及田间防治研究专业：微生物分类鉴定与应用硕士生陈静鸿 指导教师葛绍荣教授摘 要山葵，属十字花科多年生草本植物，产于目本富士山和台湾阿里山，是生产芥术的主要原料，沿海人们喜食生鱼片，以芥末为佐餐，被日本人民称为生活必需品。美国，加拿大，澳洲也有出口，因此市场销售量大。近年国外研究发现：山葵还具有杀菌防病、防腐利尿、发汗、清血、增进食欲、减脂和软化血管
2、的功能，从而更增加了山葵的需求。因此，种植山葵有很好的经济社会效益。近年山葵己在大陆大量种植，我省青城、邛崃、雅安、乐山、绵阳、凉山等地区都建有种植基地，全国种植面积不下数十万亩。但其植株被一种黑根病感染，黑根病病原菌为一种丝状真菌墨入菌(Phoma wasabiae Yokogi)引起。凡感染黑根病的山葵其产值下降50以上。本研究用稀释分离法对成都、简阳、雅安等地区的农田、自然保护区的13个土壤样品进行放线菌和细菌的分离，共分离到放线菌119株，细菌67株。以山葵墨入菌为供试菌，采用点对峙培养筛选法对分离到的101株放线菌，57株细菌进行初筛，结果显示，对山葵墨入菌具有拮抗活性的放线菌38株
3、，细菌10株。再通过打孔法复筛，得到产生抑菌圈最大的菌株SA2。根据传统的表型分类、生理分类，化学分类和现代16S rDNA序列分析的分子分类方法，即多相分类，对拮抗菌株SA2进行形态特征，生理生化特征分析以及16S rDNA序列分析。SA2为产芽胞细菌，周身鞭毛，芽胞中生，椭圆形，菌呈短杆状，菌体长L 9-28tun，宽06-11um，具有运动性。LB培养基斜面30培养72h后，菌落呈乳白色，产生折皱。以16S rDNA序列为基础构建了包括14株相关种属细菌在内的系统发育树，其中，与芽孢杆菌属细菌有很高的同源性(92-983)，与苏云金芽胞杆菌(Bacillus拍州，增0ensis)十分接近
4、，序列相似性值983。通过对平板对峙筛选的最强拮抗菌s11，S13，SA2，SAl6进行室内盆栽试验，选取盆栽试验效果最好的菌株SA2进行田间试验。试验地选在成都市都江堰龙池镇的山葵种植场黑根病发病率在50以上的场地。盆栽试验结果表明：SA2拮抗细菌菌株对山葵黑根病有良好的防治效果，对山葵黑根病的防效为8557。山葵种植1，3，5个月后，SA2对黑根病防效分别为7412，7657和7898，有较好的防治效果，且随时间的延长而增加。关键词：山葵黑根病：拮抗菌；筛选；鉴定：苏云金芽胞杆菌SA2；生物防治VScreening，identification and antagonism of anta
5、gonisticorganisms against Phoma wasabiae Yokogi and TheirBiocontrol EfficiencyMajor：MicrobiologyMaster Candidate：Chen-Jinghong Tutor：ProfGeShaorongAbstraetWasabi is the main material of mustardS production，growing in Fuji in Japanand Ali Mountain in Taiwan，which is necessity of JapaneseAnd it is exp
6、orted toAmerican，Canada and AustraliaSo there is a large demand for itAccording torecent abroad studies，scientists found wasabi has the functions of sterilization，protection from illness，antisepsis，diuresis，diaphoresis，clearing blood，whettingappetite，decreasing fat and intenerating blood vesselThere
7、for，the need of wasabiis increasing and it is a farm produce which will bring great profitsRecent yearswasabi has cropped largely in mainland of China,there are fields of wasabi inQingcheng，Leshan，Mianyang Sichuan provinceBut its individual plant is infectedby phoma wasabiae YokogiIf the plants were
8、 infected，the production value wouldreduce more血an 50In our study,soil samples were gathered from wasabi fields in OingchengChengdufrom which l 01 actinomyces strains and 57 bacterial strailIS were isolatedby tube dilution assayWithphoma wasabiae Yokogi as the tested stain，38 antibioticactinomyces s
9、tains and l 0 bacterial strains were screened out by hyphal extensioninhibition assayAnd with the best antibiosis against phoma wasabiae Yokogibacterium SA2 strain Was resceened from these strains through aperturestrikeingmethodTraditional phenotype classification,chemotaxonology,and moderm molecula
10、rtaxonology were nse,d to study the strain SA2It Was identified as Bacillusthuringiensis by morphological，cultural playsiological，biochemical characteristics，and 16S rDNA sequences analysisBecause of good anfibiosis against phoma wasabiae Yokogi，SA2，Sll，S13，SAl6 were used to control the disease in t
11、he potted plantThe tests exhibited thatSA2 had the highest control efficacyAnd the next field text of SA2 indicated thatSA2 could control the disease and the control efficacy reached 7898Theantifungal strains in the study were well worth developing and applying for thebiocontrol ofthe diseaseKey wor
12、ds：Phoma wasabiae场勋；Antagonism；Screening；IdentificationBacillusthuringiensis；BiocontrolVIIpq川人学硕十学位论文声 明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师葛绍荣教授指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师葛绍荣教授指导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。导 厩叁铗主硕士生：讯酱高2007年4月旧JIX学
13、颀学位论文日H百山葵(wasabi)又称山嵛菜，属十字花科多年生草本植物，原产于日本富士山和台湾的阿里山，根据山葵的栽培环境，分为水生与陆生山葵。水生山葵品质优于陆生山葵，价格相对高。水生山葵需要水质清凉的山间溪谷；陆生山葵适合栽培于溪谷沿边有一定坡度的树林空间。山葵的形态结构分为叶、叶柄、根、根茎、花茎、花、种子，其主要产品是根茎，而叶、叶柄、根主要用于加工香辛调料剂原料。日本、台湾及我国沿海一带人们喜食生鱼片，以芥末为调味的香辛佐料，香辛成分主要是芥子苷，芥子苷在有氧条件下，经芥子酶的水解作用，水解成具有芳香性辛味的芳香芥子油等多种成分，不仅刺激食欲，而且具有消炎、镇痛等功能，被称为日本人
14、民的生活必需品。近年国外研究发现：山葵具有杀菌防病、防腐、利尿、发汗、清血、增进食欲、减脂和软化血管等功能，因此山葵也是医保用品的主要原料。美国，加拿大，澳洲等国也有出口，因此市场销售量大，从而更增加了山葵的需求量。山葵是高经济收益型植物，据日本的山葵生产情况调查分析表明，在适宜的环境条件下，根茎产量为07 kgm2左右，叶、叶柄、根产量为23 kgIll。目前，日本市场上的鲜山葵价格已上升至18美元kg。因此，种植山葵有很好的经济社会效益，在劳动力费用高的日本、韩国也把种植山葵列入高收入型经济植物。近年来山葵种植已推广到大陆，仅成都青城山地区2000年就建立了一定规模的山葵基地，2002年四
15、川省曾立为“星火计划”项目推广，我省青城、邛崃、雅安、乐山、绵阳、凉山等地区都建有种植基地，全国种植面积不下数十万亩。大陆种植的山葵普遍被一种黑根病浸染，黑根病病原菌为一种丝状真菌一一墨入菌(Phoma wasabJae Yokogi)。极易从根系、茎部伤口侵入，进而危害整个植株，山葵的叶、叶柄、根茎、须根均可受害。被害叶片初期呈黑色小斑点，尔后病斑逐渐广大，有的顺着叶脉蔓延，后期病斑融合，叶肉黄化变薄，干燥时易脆，病斑中间有褐色分生孢予器产生，发生较严重时，叶片焦枯死亡。危害叶柄时，病原菌随着雨水往下部蔓延，因此病症呈线状并有褐色小粒点，有时与根茎相连，后期逐渐扩大，使叶柄内维管束褐化，呈黑
16、腐状脱落。根茎、须根被害时，表皮呈不规则黑色病斑，用刀剖歼检查，发现内部维管四川大学硕上学位论文束呈延伸性黑化，严重影响山葵质量，产值相应下降50以上，给山葵种植者造成极大损失。据青城后山山葵基地主管人介绍，每亩山葵产值在3000元以上，若全国以50万亩计，产值应在15亿元以上，若损失50，就有75亿元，因此防治山葵黑根病的研究工作尤为重要与迫切。长期以来，国内外对于植物病害的防治多从化学农药防治出发，由于其防治见效快，杀菌谱广，成本低，使用简便等优点，其在农业防治中迅速发展，成为防病丰产的有效手段之一。但是长期、反复和大量使用化学农药存在着潜在的危害，它引起土壤、水体和大气的污染，农副产品中农药残留增加，直接危害了人类的健康及生存。而且化学农药在杀病原菌的同时也杀伤了其他有益微生物、昆虫和畜禽，破坏了生态平衡。同时病原真菌和细菌抗药性不断加深和扩大，不得不加大农药的施用量和
