抗ENA抗体的检测与意义

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1、抗 ENA抗体的检测与意义抗 ENA抗体：又称盐水可提取性核抗原的抗体。 是抗小分子细胞核核糖核蛋白（ snRNPs） 和小分子细胞浆核糖核蛋白（ scRNPs）的自身抗体，不含组蛋白。主要有七种：抗 Sm抗体 、抗SS-A/Ro 抗体、抗 SS-B/ La 抗体、抗 Scl-70 抗体、抗 Jo-1 抗体、抗 U1-RNP抗体、抗 r-RNP 抗体。对结缔组织疾病诊断和鉴别诊断有重要意义，与疾病严重程度和活动性无明显相关。结缔组织疾病患进体内存在有 ENA抗体， 不同的抗 ENA抗体与其疾病的类型有关。如约有1/2 的 系统性红斑狼疮患 者具有抗 ENA抗体， SLE 的特点是多种抗体同时存

2、在，其中 Sm抗体是SLE 的标记抗体。临床上 Sm抗体阳性常同时伴 RNA抗体阳性，单一 Sm抗体阳性者较少见。一般方法难以将 Sm与 RNP抗原纯化、分离。 混合结缔组织病 患者呈高频率、高效价的抗 ENA抗体，主要是针对核糖核蛋白。 血清中几乎都有高滴度抗 RNP抗体， 抗 RNP抗体测定阴性可做为排除诊断混合结缔组织病的一项指标。 具有抗 DNA抗体的患者， 若同时具有抗 ENA抗体其预后较好。 抗RO和抗 La 抗体常常伴随 干燥综合征 （ Sjogren 综合症） 同时出现 。 因此检测 ENA抗体有助于结缔组织疾病的早期诊断和鉴别诊断。非风湿病病人和正常血清中未检测到抗 Sm抗体

3、和抗 RNP抗体，抗 Sm抗体与 SLE 疾病活动和肾脏损害无关，故不能做为判断 SLE 及肾病活动、好转和疗效的依据。盐水可提取核抗原抗体（抗 ENA）对流免疫电泳（ CIE）检测项目 抗 Sm 抗 RNP 抗 SSA 抗 SSB 正常值 未设别沉淀线 （） 未设别沉淀线 （） 未设别沉淀线 （） 未设别沉淀线 （）免疫印迹法检测 ENA多肽抗体谱（ IBT ）项目 抗 Sm 抗U1RNP 抗SSA/Ro 抗SSB/La 抗 Jo-1 抗Scl-70 抗核糖体 rRNPs抗体正常值 （） （） （）（） （） （）P0,P1,P2 阳性意义SLE标记性抗体MCTD、SLE、 SSc SCLE

4、、SS SS标记性抗体PM/DM标记性抗体SSc标记性抗体 SLE （ 1） 抗 Sm抗体： 是 SLE 的特异性抗体。 Sm 抗原是 U族小分子细胞核核糖核蛋白 （ UsnRNP） ，具有抗原性的蛋白的分子量是 29KD、 28KD、 13.5KD。 在 SLE 中阳性率为 30.2% 。 虽然敏感性较低，但特异性较高。在全部抗 Sm阳性的病例中， 92.2% 为 SLE。因此，抗 Sm抗体为 SLE 的标记抗体。另外，有人还发现 SLE 病人由活动期转为缓解期后，狼疮细胞可转阴， ANA、抗 DNA抗体效价可降低，但 Sm抗体依然存在。因此，对早期、不典型的 SLE 或经治疗缓解后的回顾性

5、诊断有一定意义。 Sm抗体和 SnRNP是同一分子复合物中的不同抗原位点，故抗 Sm抗体很少单独出现，它常于 U1RNP抗体相伴，约 60 抗 U1RNP抗体与抗 Sm抗体中的 28/29KD 有交叉反应。 抗 Sm抗体阳性均伴有抗 U1RNP抗体，而抗 U1RNP抗体可以单独存在。（ 2）抗 SSA Ro 抗体：抗 SSA Ro抗体 R0 、 SSA抗原在免疫学上是一致的，即有共同的抗原决定簇。 SSA Ro 是小分子细胞浆核糖核蛋白（ scRNPs） ，是蛋白和小分子核糖核酸形成的复合物。抗原是含有 Y YRNA的蛋白质，它更多的存在于胞浆中，其分子量有 52KD 及 60KD。 52KD

6、的多肽条带与干燥综合征（ SS）相关，而 60KD 的多肽条带则更多存在于 SLE 患者中。 以鼠肝为底物的 ANA检测中抗 SSA抗体常呈阴性反应，而 Hep-2 细胞为底物的， ANA常为阳性。抗 SSA抗体主要见于原发性干燥综合征，阳性率高达 60 75 。此外，抗 SSA 抗体常与亚急性皮肤性红斑狼疮、抗核抗体阴性狼疮、新生儿狼疮等相关（ SSA抗体可通过胎盘进入胎儿引起新生儿儿狼疮综合症 ） 。 SSA抗体与广泛光过敏性皮炎症状相关。（ 3）抗 SSB/La/Ha 抗体：是抗小分子细胞核核糖核蛋白（ snRNP） 。抗原是 RNA多聚酶转录中的小 RNA磷酸蛋白质。其分子量为 48K

7、D、 47KD、 45KD，其中 48KD 更具特异性。对干燥综合征的诊断具有特异性。抗 SSB/La/Ha 抗体 SSB/La/Ha 抗原在免疫学上是一致的。抗 SSB阳性几乎总伴有抗 SSA抗体阳性， 抗 SSB抗体较抗 SSA抗体诊断干燥综合征更特异， 是干燥综合征血清特异性抗体。 原发性干燥综合征阳性率达 40左右 。其他自身免疫性疾病中如有抗 SSB 抗体，常伴有继发性干燥综合征。唾液腺、唇腺活检可见大量淋巴细胞浸润。在原发性干燥综合征中，抗 SSA和抗 SSB的阳性率分别是 60和 40，但在其它结缔组织病中， 该两种抗体也可出现， 且常提示继发性干燥综合征的存在。 抗 SSB和抗

8、 SSA抗体相伴出现，有单独的 SSA出现， 但单独的 SSB出现的少。 抗 SSA和抗 SSB抗体阳性， 可造成新生儿狼疮及先天性房室传导阻滞。且常与血管炎、淋巴结肿大、白细胞减少、光过敏、皮损、紫癜等临床症状相关。（ 4） 抗 Scl-70 抗体： 是分子量为 100KD 的 DNA拓朴异构酶 I 的降解产物， 首先在皮肤弥漫型多发性系统性硬化症（ PSS） 患者血清中发现抗 Scl-70 抗体。 因其主要见于硬皮病， 且其相应抗原 分子量为 70KD，故取名为抗 Scl-70 抗体。PSS 病人阳性率达 30% 40%。虽然阳性率不高，但 对 PSS（ SSC）有较高特异性 （特异性达1

9、00%） 。 有抗 Scl-70 抗体阳性表示病性进展较迅速， 皮肤病变往往弥散广泛，易发生肺间质纤维化和指骨末端吸收。重症弥漫性 PSS（ SSc） 中抗 Scl-70 抗体阳性率高达 75。 有雷诺现象的患者存在抗 Scl-70 抗体，提示可能发展为 PSS。抗 Scl-70 抗体与恶性肿瘤有明显相关。（ 5）抗 JO-1 抗体：抗 Jo-1 抗体 Jo-1 抗原是 组氨酰 tRNA 合成酶 在胞浆中以小分子核糖核蛋白（ scRNPs）形式出现， 分子量为 50KD， 它是氨酰 tRNA 合成酶之一。抗 Jo-1 抗体对多发性肌炎的诊断具有较强的特异性，是目前公认的多发性肌炎（ PM） 的

10、血清标记抗体。 在多发性肌炎（ PM） 中阳性率达 25左右。 在皮肌炎 （ DM） 中阳性率为 7.1% 。 合并肺间质病变的 PM DM患者，阳性率高达 60。 67抗 Jo-1 抗体阳性的患者有 HLA DR3抗原。其他结缔组织病为阴性。在抗 JO-1 和抗 SSA二项阳性，约 80%的多发性肌炎和皮肝炎患者合并有干燥综合征。而抗 JO-1 与抗 RNP两项阳性者临床上都发现有雷诺氏现象。 抗 Jo-1 抗体综合征： 抗 Jo-1 抗体阳性、 急性发热、对称性关节炎、“技工手”、雷诺现象、肌炎、肺间质病变。（ 6）抗 rRNP（ ribosome ）抗体 ：抗 rRNP 抗体的靶抗原是核

11、糖体大亚基上磷酸蛋白。为 胞浆抗原 （ 抗原是主要存在于胞浆中的一种磷酸蛋白 ） 。 免疫印迹法测得抗 rRNP 主要有 38KD、 16KD、15KD 三条蛋白多肽。抗 rRNP 抗体主要见于 SLE，常在 SLE 活动期中存在，阳性率在 10% 20%左右， 是诊断 SLE 的特异性抗体。 如仅有抗 rRNP 抗体阳性的 SLE 患者， ANA常为阴性。抗 rRNP 抗体阳性患者中枢神经系统病变发生率高。抗 rRNP 抗体与抗 dsDNA 抗体的消长相平行，但与抗dsDNA抗体不同的是不会随病情好转立即消失，可持续 1 2 年后才转阴。（ 7）抗 RNP抗体：抗 nRNP（ nuclear

12、 RNP ） ：临床上应用较多的是 U1RNP抗体， U1snRNP由U1RNP和 9 种不同的蛋白质组成。具有抗原性的分子量有 70KD、 32KD 和 22KD。因为是以抗核内的核糖核蛋白得名 ， 所作用的抗原是 U1小分子细胞核核糖核蛋白 （ U1snRNP） ， 所以 又称抗 U1RNP抗体 。1）混合性结缔组织病 (MCTD)： 几乎均为阳性，且滴度很高，对确立 MCTD的诊断很有帮助。高滴度的抗 RNP， 尤其在没有其他自身抗体存在的情况下， 一般认为是混合性结缔组织病 （ MCTD）的诊断标志。 MCTD的抗 RNP阳性率 95%。此种抗体阳性的患者，常有双手肿胀、雷诺现象、肌炎

13、和指（趾）端硬化。2）系统性红斑狼疮（ SLE） ： 抗 RNP抗体在 SLE 中的阳性率为 40%左右，仅产生抗 RNP抗体的 SLE 病人，常常 抗 DNA抗体 阴性 ，肾脏受累较少，一般来说皮质激素类药物有很好的治疗效果， 预后理想，定期监测抗 RNP对疗效观察及预后判断有实际意义。抗 RNP抗体如和抗 ds-DNA抗体、抗 Sm抗体同时存在，则发生狼疮肾炎的可能性较大。3）其他结缔组织病： 抗 RNP抗体在其他结缔组织病阳性率较低且滴度低。其他 ENA抗体抗增殖细胞核抗原抗体（抗 PCNA抗体） ：该自身抗体是检查细胞的 DNA合成开始 48 小时的S 期细胞核出现特异复制的 DNA的

14、抗体，故称作增殖细胞核抗原抗体。其抗原是分子量为 35KD的 DNA聚合酶副蛋白。虽免疫双扩散法测得在 SLE 血清中阳性率只 3% 5%， 但是 SLE 的特异抗体，具有诊断价值。 其它结缔组织病中常为阴性。与 ANA共存在时，呈斑点型，对荧光法判断PCNA有干扰。抗 DNP抗体：主要见于 SLE，尤为活动期 SLE 其阳性率可达 90%。有时其他结缔组织病亦可见阳性。抗 PM-1 抗体：在皮肌炎中可查到。抗 RANA抗体：在类风湿关节炎中有特异性，阳性率达 95%。抗 KU抗体： 抗原 KU是直接与 DNA结合的 70KD和 80KD的蛋白二聚体， 多见于 PM/SSC和 SSC，也可在

15、MCTD、 SLE 中见到。 50 的 Graves 患者有抗 KU抗体。抗 PM Scl 抗体： 抗原是分子量为 110KD 120KD 不等的多种蛋白， 此抗体主要出现在 PM/DM相叠的患者中， PM/DM重叠且伴有肾炎的患者中，阳性率高达 80。ENA自身抗体谱免疫印迹检测免疫印迹技术具有高特异性、 高灵敏度及易操作性， 适应临床用于对不同自身免疫性疾病的诊断与鉴别诊断。 在我国自 1988 年起用免疫印迹术对抗 SM，抗 U1RNP及抗 SSB等抗体的检测， 此后通过对抗原抽提技术的改进及印迹技术的改良， 可同时过筛和鉴别 7种自身抗体，包括抗Sc1-70 、 抗 JO-1 、 抗

16、SSA及抗核糖（即抗 Rrnp ）等抗体。近年来，通过进一步探索又相继发现抗 DE 多肽抗体，抗 DM53及抗 RA54抗体分别对 MCTD， DM及 RA的诊断有高度特异性。使新一代 ENA自身抗体谱试剂盒可同时筛查并鉴别上述 10 种自身抗体。上图为 ENA自身抗体谱标准带，将膜条上显色带与抗体谱标准带对照，即可判断出阳性抗体 。ENA 自身抗体谱试剂盒可检测 10 种自身抗体，其临床意义如图：显色区 检测抗体 相关疾病及阳性率60KD 52KD 抗 SSA， 52KD应出现。干燥综合症（ SSA-65%、 SSB-40%）。少见于 SLE、 MCTD、 PSS等。50KD 48/47KD 45KD 抗 SSB， 50KD较弱， 48/47KD，45KD应出现。55KD 抗 JO-1 多发性肌炎 / 皮肌炎（ PM/DM）（ 25%）。38KD 16 5KD 15KD 抗 Rib 38KD 应出现 . 系统性红斑狼疮（ SLE）（ 10%）。少见于 PSS等。29KD 28K