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1、1正交试验法优选姜厚朴炮制工艺作者：欧阳荣，周新蓓，胡铁骊，刘绍贵，张志国，邓桂明【摘要 】 目的 为规范姜厚朴的炮制工艺提供技术参数。方法 采用正交设计试验优选炮制工艺，以厚朴酚与和厚朴酚总含量为指标，考察烘烤温度、烘烤时间、生姜用量 3 种因素对炮制结果的影响。结果 正交试验法取L9 （34） 为姜厚朴最佳炮制工艺，烘烤温度、烘烤时间、生姜用量对试验结果有显著影响。姜厚朴的最佳工艺为：生姜用量 5%，70 烘 8 h。结论 本试验对规范姜厚朴炮制工艺具有一定的指导意义。 【关键词】 姜制；厚朴酚；和厚朴酚；厚朴；正交试验 To optimize and establish stir-bak
2、ing magnoliae cortex with ginger juice by orthogonal test L9（34 ） and provide technical index on standardization for preparation of magnoliae cortex. Methods The orthogonal test was employed to determine the three factors including baking temperature, baking time and using quantity of ginger juice c
3、oncentration with the index of magnolol and honoliol. Results The baking temperature, 2baking time and zingiberis recens concentration were notably effected on experimental results. The best technology were 10% zingiberis recens, baking for 8 hours under 70 . Conclusion The research result can be a
4、standardization of preparing magnoliae cortex with ginger juice. magnoliae cortex; orthogonal test; stir-bake with ginger juice; magnolol; honoliol厚朴为常用中药之一，来源于木兰科植物厚朴 Magnolia officinalis Rehd. et Wils.或凹叶厚朴 Magnolia officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd. et Wils. 的干燥干皮、根皮及枝皮1 。历代炮制方法有 10 余种2
5、，姜制为常用炮制方法，但工艺尚不统一，导致质量差异较大3，4。本研究依据中国药典2005 版部的规定，对姜制厚朴的最佳工艺条件进行了初步探讨，利用L9（3）4 正交设计试验，选择烘烤温度、烘烤时间、生姜用量 3 个因素，以厚朴酚与和厚朴酚含量为质控指标，对厚朴姜制工艺进行了比较，现将实验结果报告如下。1 实验材料1.1 仪器3高效液相色谱仪：Agilent 1100 系列四元梯度泵， Agilent 1100 手动进样器、 Agilent 1100 系列二级管阵列检测器、Agilent 1100 工作站（Agilent 公司） ；岛津 UV-2501PC 型可见-紫外分光光度计（岛津公司） ；
6、万分之一分析天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司） 。1.2 药品与试剂厚朴酚（中国生物药品检定所，供含量测定用，729-200107 ） ；和厚朴酚（中国生物药品检定所，供含量测定用，730-9204） ；甲醇（色谱纯，上海陆都化学试剂厂，20041028） ，其他所用试剂均为分析纯。厚朴药材 2005 年 3 月从湖南省药材公司购入，经湖南中医药大学第一附属医院药检室周新蓓副主任药师鉴定为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.的干燥干皮。生姜市售。2 方法与结果2.1 厚朴酚与和厚朴酚的含量测定42.1.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil O
7、DS C18(4.6 mm100 mm 5 m); 流动相: 甲醇- 水（7030）, 检测波长294 nm；柱温30 ；流速 1.0 mL/min；理论塔板数以厚朴酚峰计不低于 3 800。2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 含厚朴酚 0.0534 mg、和厚朴酚 0.18 mg 的混合溶液，即得。2.1.3 供试品溶液的制备 取供试品粉末（过 3 号筛）约 0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25mL，摇匀,密塞，超声提取 30 min，滤过即得。2.1.4 线性关系的考察 精密吸取上述对照品溶液1、2 、3 、 4、5
8、 mL 置 5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取上述稀释液 5 L，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，以对照品的量为横坐标进行线性回归，结果表明厚朴酚的回归方程为:Y=1 187.694 5X+19.174 0，r=0.999 7。和厚朴酚的回归方程为:5Y=1 278.285 8X+ 38.772 9，r=0.999 7。色谱图见图 1。2.1.5 精密度实验 取同一浓度的厚朴酚对照品与和厚朴酚对照品溶液，在上述色谱条件下测定，重复进样 5 次，测定结果厚朴酚RSD 为 1.04%（n=5） 、和厚朴酚 RSD 为 1.78%。结果表明进样精密度良好。2.1.6 稳
9、定性实验 取供试品溶液，分别于配制后0、1 、2 、 4、8 、24 h 依法测定，结果厚朴酚 RSD 为 0.31%、和厚朴酚 RSD 为 0.33%。2.1.7 重复性实验 取厚朴炮制品的样品 5 份，分别按上述方法制得供试液，测定厚朴酚与和厚朴酚之和的平均含量为 2.50(g，%) ，RSD 为 2.41%（n=5） 。结果表明样品测定重复性良好。2.1.8 加样回收实验 取已知含量的供试品（厚朴酚含量为 1.41%、和厚朴酚含量为 1.09%）约 0.1 g，精密称定，各精密加入一定浓度的对照品溶液（取厚朴酚 14.72 mg、和厚朴酚 10.02 mg，置10 mL 量瓶中，加甲醇溶
10、解并定容至 10 mL,摇匀，即得）1 mL，按 2.1.3 项下操作，分别制得供试液，以上述色谱条件测定厚朴酚、6和厚朴酚含量，厚朴酚平均回收率为 99.31%，RSD 为 0.88%；和厚朴酚平均回收率为 98.55%，RSD 为 0.84%。 （见表 1、表 2） 。2.1.9 供试品测定 取生品和各炮制品，按 2.1.3 项下操作，分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各 5 L，注入液相色谱仪测定，即得。2.2 厚朴姜炙法工艺优选2.2.1 姜厚朴的炮制 取厚朴，刮去粗皮，洗净，润透，切丝，晒干。取厚朴丝，按量加入姜汁（先将生姜洗净，捣烂，加水适量，压榨取汁，姜渣再加水适量重复压榨一
11、次，合并汁液。100 g 生姜制成 350 mL 生姜汁。 ） ，充分拌匀，闷润 1 h，置控温烘箱中烘干，备用。2.2.2 正交试验及方差分析 影响炮制主要因素的确定：以烘干温度、烘干时间、生姜用量为考察因素，每个因素拟定 3 个水平。见表 3。正交试验安排及结果 选用 L9（34）正交表安排试验，炮制方法根据大生产时的实际情况操作，取表 4 中 9 个实验号的各炮制品0.2 g，精密称定，按 2.1.9 项下测定含量。结果见表 4。方差分析7结果见表 5。研究结果表明，A 因素烘干温度、B 因素烘干时间对试验结果有非常显著影响，C 因素生姜用量有显著影响，综合考虑姜炙后便于饮片干燥及成品水
12、分含量等因素，姜厚朴的最佳工艺组合确定为A2B2C1，即 70 烘 4 h 生姜用量 5%。2.3 正交试验优选工艺与药典法的比较按正交试验优选最佳工艺和药典法取厚朴丝，加姜汁拌匀，置锅内，用文火炒干（每药材 100 g，用生姜 10 g）进行炮制，取各炮制品 0.2 g，精密称定，按“2.1.9”项下测定含量。结果表明，用正交试验优选最佳工艺炮制的姜厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的含量均高于药典法，见表 6。3 讨论厚朴药材经炮制后，厚朴酚与和厚朴酚总量明显提高，可能与改变了厚朴的物理构造，增加了厚朴酚与和厚朴酚的溶出度有关；至于所含成分之间是否有转化，有待进一步考察。厚朴姜制过程中，烘干温度及时间
13、为主要因素，温度过高或时间过长可能导致部分厚朴酚与和厚朴酚的损失，而药典法炒干温度不确切，实际操作中火8候难以控制，从而影响厚朴酚与和厚朴酚的含量。在本试验中，运用正交表，选出具有代表性的进行试验，以求得最优的工艺。由于正交表“均衡搭配”的特点，不仅减少了试验次数，分析后结果也更加科学可靠。我们以最佳工艺 A2B2C1 炮制了多批厚朴进行验证试验，结果表明此工艺是合理的。【参考文献】1 中华人民共和国卫生部药典委员会,中华人民共和国药典,一部S. 北京：化学工业出版社，2005：204.2 王孝涛.历代中药炮制法汇典 M. 南昌：江西科学技术出版社,1998：239.3 郭丽冰 ,赵丽华.HPLC 测定不同来源姜制厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的含量J.中国现代中药， 2006，8 （9）：17-19.4 李水福,潘 莉, 吴俊娇.市场厚朴的质量急待重视J. 现代中药研究与实践,2006，20（6 ）：24-27.5 刘晓鹏 ,姜 宁 ,周大寨，等,超声法提取厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的研究J.中药材,2007,30 （2 ）：237-239.9
