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1、1幽门螺杆菌分型检测 90 例临床分析【关键词】 幽门螺杆菌自从 1984 年 Warren 和 Marshall 从人胃黏膜中分离培养出幽门螺杆菌(HP)后,20 多年的研究表明幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎的主要致病菌,消化性溃疡的重要致病因素,是胃癌重要的诱发因素,世界卫生组织将其列为一类致癌物。最新的研究表明 HP的致病性与菌型差异、敏感的年龄及机体的反应性有关 。作者采用免疫印迹法检测 90 例 HP 感染者血清中多种 HP 抗体,并依此对 HP 进行免疫分型,探讨不同血清分型 HP 与慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃癌的关系。1 资料与方法1.1 一般资料 选取 2005 年 1
2、 月至 2007 年 6 月本科门诊及住院病人 90 例。男 52 例,女 38 例;年龄 2158 岁,平均 37.7岁。均经胃镜检查诊断确诊为 HP 阳性;其中内镜下胃十二指肠无病变者为对照组,共 15 例,其余 75 例为病例组,并依据病理诊断2分为慢性胃炎(CG) 31 例,胃溃疡(GU) 12 例,十二指肠溃疡(DU) 23 例,胃癌(GCa) 9 例。1.2 方法 幽门螺杆菌免疫印迹检测试剂盒选用深圳有限公司。抽取待检者静脉血 1.52 ml,分离血清,按说明书操作。将提取的 HP 全菌体抗原( 含有 CagA、vacA 和尿素酶 A、B 亚单位等)用聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小
3、不同依次分开,电转印至印迹膜上,与待检者血清反应,如果被检血清中含有 HP 抗体,会与印迹膜上相应 HP 抗原结合,加入酶联第二抗体和显色剂, HP 抗原位置即出现显色带,与 HP 抗体标准区带比较,即可判断出何种 HP感染。1.3 HP 感染判断标准 HP I 型:免疫印迹技术显示 CagA 和/或 VacA 抗体阳性; HP II 型:免疫印迹技术显示仅尿素酶抗体阳性,CagA 和 VacA 抗体阴性;HP 阴性:CagA、VacA 和尿素酶抗体均阴性。1.4 统计学处理 采用 2 检验。2 结果在 90 例确诊的 HP 感染者中,免疫印迹检测 HP 抗体阳性88 例,阳性符合率 97.7
4、8%。病例组中 HP I 型阳性率在慢性胃炎3(CG),胃溃疡(GU),十二指肠溃疡(DU),胃癌(GCa)中分型结果见表 1。表 1 90 例 HP 感染者免疫印迹分型结果(n,%) 略3 讨论近年来对 HP 生物学特性、分型和致病作用等进行了较深入的探讨,在 HP 致病因素中,空泡形成毒素 (VacA)、细胞毒素相关蛋白(CagA)起重要作用。国外研究将 HP 分为两型 ,I 型 HP菌株能产生空泡毒素(VacA)和细胞毒素相关蛋白 (CagA),可破坏细胞顶端连接复合体的结构及功能。CagA 不仅能够破坏顶端连接,而且干扰上皮细胞分化,降解基膜,使上皮细胞失去极性及细胞黏附性,伸出迁移伪
5、足,具有侵袭性 ;因此 I 型 HP 能导致广泛的组织炎症,促使溃疡病的发生发展。型 HP 为不产生细胞毒素菌株,即 CagA 和 VacA 阴性株,这一类 HP 菌株毒性较小,感染后一般只是引起轻度慢性浅表性胃炎而无明显临床症状。作者检测了 90 例确诊的 HP 感染者血清中 CagA、VacA 和尿素酶抗体,其中对照组为内镜下胃十二指肠无病变,共 15 例,病例组 75 例又根据病理诊断结果分为 CG 31 例,GU 12 例,DU 23 例及 GCa 9 例。免疫分型是指采用免疫学方法,利用抗原抗体4反映检测 HP 感染者血清中针对 HP 特异抗原的抗体进行检测 。作者应用免疫印迹技术显
6、示血清中其免疫活性蛋白区带,细胞毒素相关蛋白(CagA)与 128、116 和 110KD 区带有关,空泡毒素(VacA)蛋白与 95 和 91KD 区带有关。因此通过免疫印迹试验,可成功检测出细胞毒素相关蛋白 A(VacA)和空泡毒素相关蛋白A(VacA)抗体的情况,从而将 HP 分为 I 型及型。本结果显示,胃、十二指肠疾病病人(病例组)血清 HP I 型的阳性率 73.33% (55/75),而对照组仅为 20.00%(3/15),差异有显著性(P0.01),说明 I 型 HP 能产生 VacA 和 CagA,有较强的致病力,是胃、十二指肠疾病的主要致病因素。其中 HP I 型阳性率在
7、CG,GU,DU,GCa 中分别为58.06%,83.33%,86.96%,77.78%,提示 I 型 HP 感染更易导致较严重的消化道疾病。而 II 型 HP 可能多数引起慢性胃炎,很少引起严重的消化道疾病。在作 HP 根除治疗时,可先行 HP 分型,测定毒力菌株,可指导用药,减少治疗费用以及耐药菌株的产生。因此临床上检出 HP后应进一步对 HP 检测分型,有助于对胃十二指肠疾病的正确诊断和治疗。【参考文献】51 张万岱,徐智民. 幽门螺杆菌免疫分型的研究. 世界华人消化杂志, 2002, 10(5): 509512.2 Telford JL, Covacci A, Ghiara P, et
8、 al. Unravelling the pathogenic role of Helicobacter Pylori in peptic ulcer: potential new therapies and vaccines. Trends biotechol, 1995, 12: 420426.3 Amieva MR, Vogelmann R, Covacci A, et al. Disruption of the epithelial apical- junctional complex by Helicobacter pylori CagA. Science, 2003,300: 14301434.4 余悠悠,沈霞. 免疫印迹法检测幽门螺杆菌及其分型的临床应用. 现代免疫学 , 2004, 24 (6): 511513.