《Survivin、Bcl2在I期NSCLC中的表达及其临床意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《Survivin、Bcl2在I期NSCLC中的表达及其临床意义（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1Survivin、Bcl2 在 I 期 NSCLC 中的表达及其临床意义【摘要】 目的 手术后 I 期非小细胞肺癌的预后情况与众多因素有关，凋亡相关基因在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用。本研究通过检测凋亡相关基因 Survivin 及 Bcl2 在 I 期非小细胞肺癌中的表达情况，探讨其在 I 期非小细胞肺癌的临床意义和预后价值。方法 利用免疫组化学技术检测 85 例 I 期非小细胞肺癌（NSCLC）及 20 例肺良性肺组织中 Survivin 和 Bcl2 的表达，统计分析这两者在 I 期非小细胞肺癌的作用。结果 85 例 I 期非小细胞肺癌组织中Survivin 和 Bcl2 的表达
2、率分别为 64.7% (55/85) 和52.9（45/85）与正常肺组织中的表达差异显著（ P0.05） ；多因素分析显示 PTNM 分期与 Survivin 蛋白的阳性表达是 I 期非小细胞肺癌患者独立预后因素（P0.01 ） ， Survivin、Bcl2 蛋白的表达与临床、病理各因数无相关。结论 在 I 期非小细胞肺癌中，凋亡相关基因 Survivin 及 Bcl2 可能对肿瘤的发展与预后产生一定的作用与影响；PTNM 分期与 Survivin 蛋白的阳性表达是此期非小细胞肺癌术后患者的独立预后因素。 【关键词】 肺肿瘤；癌；非小细胞性；Survivin；Bcl2ABSTRACT：Ob
3、jective To investigate the expression of the 2representative apoptosisrelated oncogene survivin and Bcl2 in stage I nonsmall cell lung cancer and its clinical value.Methods The expression of survivin and Bcl2 was detected by using Labelled Streptavidin Biotin immunohistochemistry assay in 85 NSCLC s
4、tage I surgical specimens and 20 benign disease specimens. Results The positive rates of survivin and Bcl2 were 64.7% (55/85) and 52.9（45/85）, respectively, there was significant difference between tumour and nontumour (P 0.05). PTNM stage and positive expression of survivin were independent prognos
5、tic factors of stage I NSCLC . Conclusion In stage I NSCLC, apoptosisrelated oncogene may be important to the occurrence and development of lung cancer; PTNM stage and positive expression of survivin are independent prognostic factors .KEY WORDS：Lung neoplasms；Cancer；Nonsmall cell; Survivin;Bcl2细胞凋亡
6、是一种由凋亡相关基因调控的细胞自身程序化死亡（programmed cell death，PCD） 。肿瘤的发生不仅与细胞的异常增殖和分化有关,也与细胞凋亡的异常密切相关。本研究拟分析凋3亡相关基因 Survivin 和 Bcl2 在 I 期非小细胞肺癌的表达及临床意义，研究两者对 I 期 NSCLC 术后患者治疗的指导意义及预后价值。1 资料与方法11 标本本研究收集 1997 年 6 月至 1999 年 6 月肺癌根治术后 85 例 I期非小细胞肺癌患者术后标本，无其他部位原发肿瘤，术前未接受放化疗，死亡原因明确。其中男 45 例（52.9%）,女 40 例(47.1%) ；年龄 2478
7、 岁,中位年龄 55 岁。根据 WHO 分型标准，腺癌 39 例，鳞癌 33 例，腺鳞癌 11 例，大细胞癌 2 例 。另收集 1997 年 6 月至 1999 年 6 月手术切除的肺非肿瘤组织 20 例，结核 8 例，正常肺组织 12 例，男 13 例，女 7 例，年龄 3675 岁，中位年龄 49岁。根据国际抗癌联盟（UICC）97 TNM 病理分期标准。所有组织(肺肿瘤组织与非肿瘤肺组织) 均经 10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，5m 连续切片。12 临床病理资料收集回顾性收集 85 例患者的年龄、性别、病理类型、临床分期等资料，所有病例随访完全，生存时间按月计算。413 试剂与方法Su
8、rvivin 和 Bcl2 抗体由北京中山公司提供，SP9000 试剂盒由北京中山公司提供。采用 LSAB 法。将石蜡标本以 5m 层厚切片，烤干，于二甲苯液中脱蜡，不同浓度的乙醇中脱水，3的 H2O2溶液消除内源性过氧化物酶的活性，EDTA（PH 8.0）修复液常规修复，玻片封闭，孵育盒中抗体孵育，抗原暴露，加入山羊血清，依次滴加一抗、二抗、三抗，DBA 显色，苏木精复染，烘干封片。（Survivin 的抗体工作浓度为 1:100，PBS 液代替一抗、二抗作为阴性对照） 。1.4 结果判断Survivin 染色结果评估采用综合计分法，细胞染色强度分为 3 级:1：浅黄色为弱阳性(+), 2：
9、中度阳性(+), 3:阳性(+) 。在400光镜下随机观察 5 个不同视野, 根据阳性细胞占总细胞数的百分率分为 5 个等级:0 级,75%。用细胞数分级和强度分级的乘积作为判断 Survivin 的表达结果,若乘积1 为阴性, 反之则为阳性；Bcl2 染色结果评估采用在 400 倍光镜下随机观察 5 个不同视野，着色细胞数 10判断为阳性，10 判断为阴5性。免疫组化结果由两位病理医师盲法读片得出。15 统计分析采用 SPSS10.0 软件包进行统计学分析，Survivin、Bcl2 在NSCLC 及肺良性肿瘤中的表达差异采用 2 检验，应用 COX 风险回归模型进行多因素分析，Surviv
10、in、Bcl2 在肺癌组织中表达与各临床、病理因数的相关性采用 2 检验，统计中将 P0.05 视为有统计学意义。2 结 果21 Survivin、Bcl2 蛋白在肺癌组织与非肿瘤组织中的表达Survivin、Bcl2 蛋白在肺癌组织中的表达率分别为64.7%（55/85）和 52.9%（44/85） ，肺非肿瘤组织中的表达率分别为 10.0%（2/20）和 15.0%（3/20 ） ，可见两组表达率有非常显著性差异（P0.05） 。Survivin 阳性表达呈点状，主要定位在细胞浆，呈棕黄色，胞核未见染色（图 1） ，Bcl2 蛋白阳性表达定位在细胞浆，呈棕黄色颗粒状，胞核未见染色(图 2)
11、。22 多因素分析6将性别（分为男性及女性组） 、血型（分为 B 型与非 B 型组） 、PTNM 分期（分为 IA 和 IB 期组） 、病理类型（分为鳞癌和非鳞癌组）、年龄（分为60 岁和60 岁组） ，Bcl2 （分为阳性与阴性组） 、Survivin（分为阳性与阴性组） ，引入 Cox 比例风险模型进行多因素分析，结果 Survivin 蛋白表达的情况、PTNM 分期为早期非小细胞肺癌的独立的预后因素，见表 1。 表 1 影响 I 期非小细胞肺癌术后患者 5 年生存率的多因素分析23 Survivin、Bcl2 与临床、病理指标的相关性研究（见表2） 表 2 Survivin、Bcl2 、
12、临床、病理各因素相关性3 讨 论细胞的凋亡调控存在多方面因素，越来越多的与凋亡相关的基因被发现，除了原有发现的 Bcl2 家族等凋亡调控机制外,Survivin 是发现不久的凋亡抑制蛋白（Inhibitor of Apoptosis Protein）家族成员之一。Survivin 的抗凋亡作用独立于 Bcl2 家族，它具有较特异的抗凋亡效应通道，其对 caspase3 和/或 caspase7 有直接/或间接的作用，众所周知，在细胞的凋亡过程中，各种不同的凋亡信号最终是通过凋亡效应蛋白酶（caspase）实现的， survivin 是特异与效应7蛋白酶级联反应中的关键分子 caspase3 和
13、 caspase7 相结合，从而抑制多种凋亡刺激信号的作用。Bcl2 则通过广泛的抑制各种刺激诱导的细胞凋亡，延长细胞的生存。Survivin 基因见于胚胎组织，而在成人仅见于胸腺组织与子宫内膜，大多数的正常组织均测不到 Survivin 基因的表达,研究13 表明： Survivin 蛋白在结肠癌、乳腺癌、宫颈癌等肿瘤中都有一定的表达。本研究亦发现在 I 期非小细胞肺癌组织中，Survivin 与 Bcl2 的表达率分别为 64.7和52.9明显高于非肿瘤组织的 10.0和 15.0%，差异明显（P 0.05)，这种明显的表达上调提示在早期非小细胞肺癌组织中就存在凋亡抑制基因作用增强，可能与
14、肿瘤的发生发展关系密切。现有的针对 Survivin 及 Bcl2 在非小细胞肺癌的预后研究结果尚不一致。Monica 等4对 III 期 NSCLC 的 Survivin 研究认为Survivin 基因在早期 NSCLC 发生发展中起重要作用。 Cagini 等5曾对 99 例 III 期完全切除术后的肺癌患者的 P53、Bcl2 、Ki67等多个病理临床因数进行研究，发现 P53、Bcl2 、Ki67 并非I、II 期 NSCLC 的独立预后因素。亦有研究6通过对 Survivn 在 I期 NSCLC 的蛋白表达研究，认为 Survivin 的表达与患者预后无相关性，这可能与该研究中的分层
15、后病例数少以及免疫组化染色分组误差有关。本研究将可能影响 I 期非小细胞肺癌预后的多个因素进行多因素分析，对 I 期非小细胞肺癌术后患者生存有显著意义的因素是 Survivin 蛋白的阳性表达（P=0.0015）和 PTNM 分期8(P=0.0063)。对于 I 期非小细胞肺癌，局部生长为主，若 Survivin蛋白在肿瘤细胞表达，抑制肿瘤细胞的凋亡，使肿瘤不断的发展，这可能是早期肿瘤术后预后差的原因之一。本研究中通过分析发现Survivin 和 Bcl2 在 I 期 NSCLC 的表达与各病理临床因数无相关性，两者的表达亦无相关性，这可能与两者抑制凋亡的途经不同有关。由上可见，在早期 NSC
16、LC 中，Survivin 及 Bcl2 的过表达可能是肺癌早期的发展的原因之一，而 Survivin 在正常组织中的低表达，并且对术后患者预后的影响作用，通过进一步的研究可能会为早期NSCLC 患者的治疗方法及模式开辟一条新的途经。【参考文献】1 王梅，王冰, 王晓丽，等. Survivin 在宫颈上皮内瘤样变及宫颈癌中表达初步研究J. 肿瘤研究与临床, 2001,13(4):2292 Tanaka K, Iwamoto S, Gon G, et al. Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast c
