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1、1大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选【摘要】 【目的】从众多的树脂型号中筛选出分离纯化黄连总生物碱效果较好的一种。 【方法】运用AB8、HP20、LD605、ADS3 、ADS5 、D151、DA201 、XAD7、NKA9 9 种树脂，以黄连总生物碱的吸附率和解吸率为指标进行初筛，并以盐酸小檗碱的解吸率为指标，进一步的筛选。 【结果】9 种树脂中，ADS3 树脂的吸附和解吸能力均较强，总生物碱的吸附率达到 9726%，解吸率达到 8482%。盐酸小檗碱的解吸量达到 9311 mg。 【结论 】ADS3 树脂对总生物碱及盐酸小檗碱的吸附和解吸性能都较好，可用于黄连总生物碱的分离纯化。 【关
2、键词】 黄连/ 分离和提纯; 总生物碱 /分析;盐酸小檗碱/分析;大孔树脂黄连是毛莨科植物黄连的根茎，有效成分主要是生物碱，其中小檗碱的含量最高，可达 10%左右，而且以盐酸盐的状态存在于黄连中1。黄连中的生物碱大多是季铵型生物碱，在水中溶解度大，有一定的极性1。在运用大孔树脂分离纯化中药有效成分时，树脂的极性和所含的官能团对化合物的吸附能力有很大的影响。因此，对于中药有效成分或有效部位的纯化，树脂型号的选择非常重要。2根据已有的报道，目前常用于生物碱分离纯化的树脂型号有DA201、NKA9 、 D101、LD605、AB8 、D151、XAD4 、XAD7、ADS3 、ADS5 、HP202
3、7。其中，D101、HP20 、XAD4 实为同一种树脂。故本研究将从DA201、NKA9 、 LD605、AB8 、D151、XAD7、ADS3 、ADS5、HP20 9 种树脂中筛选一种分离效果较好的型号，现报道如下。1 仪器与材料LC10AT vp plus 高效液相色谱仪(日本岛津)，SPD10A vp plus 紫外可见检测器，紫外可见分光光度计(Thermo Electron corporation)，UVmini1240 紫外分光光度计。AB8、HP20、LD605、ADS3 、ADS5 、D151 均由天津欧瑞生物科技有限公司提供，DA201 、NKA9 由沧州宝恩化工有限公司
4、提供，XAD7 由美国哈门罗斯公司提供，黄连药材由北京同仁堂(毫州)饮片有限责任公司提供( 经广州中医药大学中药鉴定教研室黄海波老师鉴定为毛莨科植物黄连 Coptis chinensis Franch的干燥根茎)，盐酸小檗碱标准品( 批号：110713200609) 由中国药品生物制品检定所提供。2 方法与结果321 黄连提取液中总生物碱的测定211 标准曲线的绘制2111 检测波长的确定分别吸取盐酸小檗碱标准品溶液和经适当稀释后的黄连提取液，在 200600 nm 之间进行波长扫描，两者在 347 nm 波长处呈现共有吸收峰，故确定检测波长为347 nm。见图 1。2112 标准曲线的绘制精
5、密称取干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品 1110 mg，置 50 mL 量瓶中，用 005 mol/L H2SO4溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。精密量取盐酸小檗碱对照品溶液02、05 、08 、10 、15 、20 mL，分别置 50 mL 量瓶中，加 005 mol/L H2SO4 稀释至刻度，摇匀，在 347 nm 波长处测定吸光度。以吸光度 X 为横坐标，质量浓度 Y 为纵坐标，进行线性回归。结果表明在 0001761176 mg/mL 范围内盐酸小檗碱的浓度与吸光度呈良好的线性关系，其回归方程为：Y=0016 2X-0000 04，r=0999 9。2010 年第 27 卷广州中医药大学学
6、报 212 黄连提取液中总生物碱的测定称取黄连药材 10 g，加 8 倍量体积分数 60%乙醇4回流提取 3 次，每次 1 h，合并提取液。将提取液移至 1 000 mL的容量瓶中，加体积分数 60%乙醇定容至刻度。取 1 mL 样品，置25 mL 量瓶中，加 005 mol/L H2SO4 定容至刻度。取 25 mL上述样品，置 25 mL 量瓶中，加 005 mol/L H2SO4 定容至刻度。在 347 nm 处测吸光度为 0297。采用此法提取得到的总生物碱为0119 g/g 药材。22 大孔树脂型号的初筛221 供试品溶液的制备取黄连粉末 100 g，加 8 倍量的体积分数 60%的
7、乙醇，加热回流提取 3 次，每次 1 h，合并 3 次提取液，过滤。滤液减压真空浓缩至无醇味。将提取液转移至 1 000 mL 的容量瓶，加蒸馏水定容至刻度，备用。取 1 mL 上述提取液，置于 25 mL 的容量瓶中，用 005 mol/L 的 H2SO4 定容至刻度。取上述稀释液 25 mL，置于 25 mL 的容量瓶中，用 005 mol/L H2SO4 定容至刻度。在 347 nm 波长下测得吸光度为 0285。计算得提取液中总生物碱的浓度为 1144 mg/mL。222 树脂的预处理根据黄连中生物碱的性质，综合已有的文献报道27，从众多的树脂型号中选取了 9 种作为研究对象，各种树脂
8、的性能参数和预处理方法见表 1。5223 静态吸附和解析试验准确称取上述各种湿树脂 2 g，分别装入 100 mL 的三角瓶中，加入 20 mL 的黄连提取液，将上述样品放入摇床，在 100 次/min 的振速下振荡吸附 24 h。将吸附后的黄连提取液真空抽滤。取滤液 1 mL，加 005 mol/L 的 H2SO4定容至 25 mL，测其吸光度。各种树脂吸附后的吸光度见表 1。将真空抽滤后的湿树脂倒回 100 mL 的三角瓶中，加入 40 mL 体积分数 95%乙醇，振荡解吸 24 h，振荡速度为 100 次/min。将解吸后的药液真空抽滤。取滤液 1 mL，加 005 mol/L H2SO
9、4 定容至25 mL。取上述稀释液 25 mL，加 005 mol/L H2SO4 定容至25 mL，测其吸光度。各种树脂的吸附率和解吸率按以下公式计算，结果见表 1：总生物碱的吸附量 = (原料液中总生物碱的浓度 -吸附后药液中总生物碱的浓度)20 mL;总生物碱的吸附率 = 吸附量 / 加入的提取液中总生物碱的量;总生物碱的解吸量 = 解吸液中总生物碱的浓度40 mL;总生物碱的解吸率 = 解吸量 / 吸附量。表 1结果显示：AB8、ADS3 、ADS5 、HP20、 LD605 5 种树脂的吸附性能较好，但 AB8、ADS5 的解吸效果不如另外 3 种，HP20、LD605、ADS3 3
10、 种树脂的吸附和解吸效果都较好。故将作为后续研究对象，从 3 种树脂中精选 1 种最佳的树脂。表 1 不同型号的树脂初筛试验结果23 树脂的精选231 黄连提取液中盐酸小檗碱的含量测定62311 标准曲线的制备采用 Diamonsil 5 m C18 柱(250 mm46 mm);流动相为乙腈1 g/L 磷酸( 体积比为 5050)，内含 1 g/L 十二烷基磺酸钠; 流速：1 mL/min;检测波长：347 nm。准确称取 111834 mg 的盐酸小檗碱标准品，用乙腈1 g/L 磷酸 (体积比为 5050)定容至 10 mL，取上述溶液 1 mL，用乙腈1g/L 磷酸( 体积比为 5050
11、)定容至 5 mL，则盐酸小檗碱的浓度为 02237 mg/ mL。分别进样 2、4、8 、12 、16 L 的上述标准溶液，对应的盐酸小檗碱的质量为0447、0895 、1789 、2684 、3579 g。以峰面积 Y 为纵坐标，盐酸小檗碱的质量 X 为横坐标作图，得标准曲线为：Y= 3106X+229 809,r=0999。结果见图 2。张英，等.大孔树脂分离纯化黄连总生物碱型号的筛选第 1 期图 2 进样量为 12 L 的标准溶液色谱图Figure 2The chromatogram of standard solution with 12L injection volume2312
12、黄连提取液中盐酸小檗碱的含量测定取黄连提取液，进样 5 L，根据标准曲线计算盐酸小檗碱的量为 2372 g。结果见图 3。图 3 黄连提取液的色谱图7Figure 3The chromatogram of extraction liquid from Rhizoma Coptidis232 静态吸附和解析实验准确称取上述 3 种湿树脂 2 g，分别装入 100 mL 的三角瓶中，加入 20 mL 的黄连提取液，其中含有的总生物碱的质量以盐酸小檗碱计为 2288 mg，盐酸小檗碱的质量为 9488 mg。将上述样品放入摇床，在 100 次/min 的振速下振荡吸附 24 h。将吸附后的黄连提取液
13、真空抽滤。取滤液 1 mL，加 005 mol/L 的 H2SO4 定容至 25 mL，测其吸光度。将真空抽滤后的湿树脂倒回 100 mL 的三角瓶中，加入 40 mL 体积分数 95%的乙醇，振荡解吸 24 h，振荡速度为 100 次/min。将解吸后的药液真空抽滤。取滤液 1 mL，加 005 mol/L的 H2SO4 定容至 25 mL。取上述稀释液 25 mL，加 005 mol/L的 H2SO4 定容至 25 mL，测其吸光度。分别取上述 3 种树脂的解吸液，进样 10L，测其峰面积。表 2 结果显示， 3 种树脂中，ADS3 树脂对黄连提取液中的总生物碱和盐酸小檗碱的吸附和解吸效果
14、都是最好的。表 2 各种树脂精选试验结果注：因初筛和精选所用的紫外分光光度计不同，所以前后两次测得的总生物碱的吸附率和解吸率略有不同。3 讨论8通过对 9 种大孔树脂的初筛，以提取液中总生物碱的吸附率和解吸率为指标，筛选出效果较好的 3 种:HP20、LD605、ADS3 。运用该 3 种树脂，同时以提取液中盐酸小檗碱的解吸率作为考察指标，进行进一步的静态吸附和解吸实验，综合各种指标，研究发现 ADS3 是一种理想的树脂，具有较好的推广应用价值。本实验过程中同时发现，对总生物碱吸附率高的树脂，盐酸小檗碱的吸附效果也较好，分析原因可能是黄连中多数生物碱具有相似的结构和极性，所以对小檗碱和总生物碱
15、的吸附具有一致性。【参考文献】1肖崇厚 中药化学M 上海：上海科学技术出版社，2002：1422 黄建明, 郭济贤, 陈万生，等 大孔树脂对草乌生物碱的吸附性能及提纯工艺J 复旦学报(医学版), 2003，30(3):2673 任海或，查丽杭，秦川，等 大孔树脂分离提取麻黄碱的研究J 离子交换与吸附，2002，18(2)：974 赵大洲，戴胜军 大孔树脂分离夏天无总生物碱的研究J 中成药，2006 ， 28(2)：18295邹节明，陆浩，何斌，等 苦玄参、黄芩与黄柏的大孔树脂提取研究J 中草药，34(3)：2236高红宁，金万勤，郭立玮 微滤 大孔树脂法精制苦参中氧化苦参碱和苦参总黄酮J 西北药学杂志， 2004，19(1)：127魏英勤，房海燕，袁久荣 正交设计法优化黄连提取液大孔树脂洗脱条件J 制剂技术，2003，12(6)：46
