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1、泌尿生殖道支原体和衣原体检测的现状和存在问题【 摘 要 】 对 泌 尿 生 殖 道 支 原 体 和 衣 原 体 检 测 的 现 状 进 行 综 述 ， 着 重 分 析 目 前 支 原 体 和衣 原 体 检 测 中 存 在 的 亟 待 解 决 的 问 题 。 解 脲 脲 原 体 （ UU） 、 人 型 支 原 体 （ MH） 、生 殖 支 原 体 （ MG） 和 沙 眼 衣 原 体 （ CT） 都 是 寄 生 在 泌 尿 生 殖 道 的 病 原 体 ， 常 引 起 泌 尿 生殖 道 疾 患 。 支 原 体 和 衣 原 体 感 染 不 但 是 非 淋 菌 性 尿 道 炎 （ NGU） 的 最 主
2、要 病 因 (90%以 上 )， 且 已 成 为 发 病 率 最 高 的 性 传 播 疾 病 ， 已 越 来 越 受 到 重 视 。 但 由 于 技 术 局 限 ， 目 前对 其 检 测 仍 存 在 不 少 问 题 亟 待 解 决 。 笔 者 结 合 自 己 的 工 作 经 验 ， 综 述 并 分 析 泌 尿 生 殖 道 支原 体 和 衣 原 体 检 测 的 现 状 和 存 在 问 题 ， 以 裨 于 试 剂 的 改 进 和 临 床 检 测 方 法 的 提 高 。1 检 测 现 状1.1 培 养 法 支 原 体 可 用 人 工 合 成 培 养 基 培 养 ， 由 于 不 具 有 甾 醇 合 成
3、 能 力 ， 培 养 系 统 应添 加 含 甾 醇 等 长 链 不 饱 和 脂 肪 醇 丰 富 的 物 质 ， 一 般 采 用 SP 4 培 养 基 加 马 血 清 。 MG生 长 所 需 的 营 养 成 复 杂 ， 生 长 极 缓 慢 ， 一 般 需 2 周 3 月 。 CT 必 须 采 用 细 胞 培 养 ， 一般 用 McCoy 细 胞 系 进 行 培 养 ， 但 细 胞 培 养 需 专 业 化 技 术 、 试 剂 和 设 备 ， 要 求 较 高 ， 周 期 也较 长 ， 目 前 临 床 一 般 不 采 用 ， 仅 在 科 研 单 位 进 行 科 研 活 动 ， 或 作 为 新 诊 断
4、试 剂 方 法 学 评 价的 金 标 准 。 培 养 法 不 能 快 速 检 测 支 原 体 感 染 ， 一 般 UU 和 MH 需 2 3 天 才 能 出 结 果 。不 过 随 着 实 验 水 平 提 高 ， 市 面 上 已 出 现 一 些 24h 可 出 结 果 的 试 剂 。 但 MG 尚 未 实 现24h 培 养 出 结 果 ， 因 此 临 床 上 不 采 用 培 养 法 检 测 MG， 仅 用 于 科 研 活 动 。 目 前 临 床 培 养法 检 测 UU 和 MH 多 采 用 液 体 培 养 基 ， 加 样 培 养 变 色 判 断 结 果 。 理 论 上 这 种 变 色 也 可 能
5、 由于 其 它 微 生 物 代 谢 而 发 生 ， 因 此 要 求 变 色 后 过 滤 除 菌 ， 再 接 种 到 固 体 培 养 基 上 观 察 菌 落 。若 培 养 基 选 用 适 当 抗 生 素 ， 有 效 地 抑 制 杂 菌 生 长 ， 单 纯 液 体 培 养 基 结 果 就 有 相 当 高 的 临 床可 信 度 。 即 使 有 个 别 变 色 是 杂 菌 所 致 ， 标 本 病 人 也 有 细 菌 性 炎 症 ， 采 用 抗 生 素 也 不 为 过 。1.2 免 疫 法 采 用 此 法 检 测 的 试 剂 目 前 临 床 较 常 用 。 一 般 为 间 接 法 （ ELISA 法 或
6、 金标 法 ） 检 测 抗 体 ， 比 较 而 言 金 标 法 检 测 抗 体 的 试 剂 用 得 更 多 ； 而 用 于 检 测 支 原 体 抗 原 的 试剂 目 前 尚 未 商 品 化 。 此 类 试 剂 一 般 采 用 夹 心 法 检 测 CT 特 异 性 脂 多 糖 抗 原 (LPS)， 影响 较 大 的 有 金 标 试 剂 和 免 疫 荧 光 试 剂 。 由 于 免 疫 反 应 的 特 异 性 和 酶 催 化 底 物 反 应 的 高 效 性或 荧 光 信 号 的 高 敏 性 ， 故 此 类 试 剂 理 论 上 灵 敏 度 和 特 异 性 都 较 高 。1.3PCR 法 此 类 衣 原
7、 体 试 剂 有 定 性 和 定 量 （ 多 是 PCR 酶 免 试 剂 ） 两 类 ， 而 支 原 体 试剂 只 有 定 性 一 类 。 PCR 反 应 有 较 高 的 灵 敏 度 ， 对 实 验 条 件 、 试 剂 以 及 操 作 人 员 的 要 求 都较 高 ， 操 作 不 当 易 造 成 错 误 判 断 ， 并 且 PCR 定 性 试 剂 一 般 没 有 药 品 批 准 文 号 ， 临 床 上使 用 应 慎 重 。 定 量 试 剂 有 药 品 批 准 文 号 ， 但 面 市 不 久 ， 尚 处 于 推 广 中 。 科 研 单 位 使 用 PCR试 剂 一 般 用 于 鉴 定 血 清 型
8、 ， 而 医 疗 单 位 使 用 PCR 定 量 试 剂 多 用 于 临 床 疗 效 观 察 。1.4 快 速 生 化 法 由 于 支 原 体 生 化 酶 反 应 速 度 和 特 异 性 都 存 在 问 题 ， 目 前 尚 无 检 测 支 原体 快 速 生 化 法 试 剂 ， 但 衣 原 体 已 有 此 方 法 学 试 剂 。 国 内 开 发 的 生 殖 道 CT 生 化 检 测 试剂 即 为 此 类 ， 它 是 根 据 CT 侵 染 上 皮 细 胞 后 产 生 的 独 特 的 化 学 结 构 ， 配 以 生 化 酶 试 剂 与之 反 应 ， 观 察 变 色 与 否 判 断 结 果 。 临 床
9、 观 察 资 料 表 明 ， 以 细 胞 培 养 为 金 标 准 ， 此 试 剂 的 灵敏 度 和 特 异 性 分 别 为 87%以 上 和 97%以 上 ， 加 之 价 格 较 低 ， 具 有 良 好 的 应 用 前 景 。2 存 在 问 题2.1 由 于 支 原 体 在 人 群 中 广 泛 存 在 ， 许 多 正 常 人 也 有 低 滴 度 抗 体 水 平 ， 单 纯 根 据 一 次抗 体 检 测 结 果 ， 很 难 判 断 标 本 病 人 是 既 往 感 染 还 是 现 症 感 染 ， 再 次 测 定 支 原 体 抗 体 滴 度 增加 时 方 可 判 为 支 原 体 阳 性 。 为 此
10、要 求 检 测 支 原 体 抗 体 的 应 为 定 量 试 剂 ， 而 目 前 国 内 间 接 法检 测 支 原 体 抗 体 的 试 剂 都 是 定 性 试 剂 ， 且 有 一 定 的 市 场 占 有 率 ， 这 就 说 明 了 为 什 么 许 多 病人 检 测 抗 体 为 阳 性 而 培 养 则 为 阴 性 1 ， 也 在 一 定 程 度 上 影 响 了 病 情 的 确 诊 。 国 内 有些 科 研 单 位 正 研 制 间 接 法 检 测 支 原 体 抗 原 的 试 剂 2 ， 直 接 检 测 病 原 体 抗 原 ， 因 此比 检 测 抗 体 试 剂 有 更 高 的 特 异 性 和 准 确
11、性 。 基 于 支 原 体 抗 体 定 性 检 测 试 剂 的 可 靠 性 存 在 问题 ， 在 检 测 支 原 体 抗 体 定 量 试 剂 和 支 原 体 抗 原 试 剂 商 品 化 之 前 ， 宜 采 用 液 体 培 养 法 。2.2MG 诊 断 问 题 以 往 资 料 显 示 MG 感 染 率 不 超 过 5%， 鉴 于 培 养 周 期 长 ， 有 关 研 究 又不 多 ， 临 床 一 般 不 检 测 MG。 但 有 资 料 表 明 MG 的 阳 性 率 并 不 低 （ 14.1%） 3 ， 以前 资 料 的 低 感 染 率 可 能 是 试 剂 的 灵 敏 度 偏 低 所 致 。 因 此
12、 进 一 步 开 展 MG 的 研 究 ， 开 发临 床 适 用 的 试 剂 ， 应 是 当 前 工 作 重 点 之 一 。2.3 支 原 体 计 数 的 可 靠 性 问 题 目 前 国 内 市 场 上 销 售 的 支 原 体 药 敏 试 剂 ， 一 般 都 带 支 原体 计 数 ， 计 数 的 前 提 必 须 是 标 本 采 集 量 的 标 准 化 ， 若 标 本 采 集 量 不 标 准 ， 计 数 就 是 空 谈 。血 清 标 本 比 较 容 易 定 量 采 集 ， 而 支 原 体 测 定 所 取 的 标 本 是 分 泌 物 或 中 段 尿 ， 则 不 容 易 定 量采 集 。 对 于 分
13、 泌 物 来 讲 ， 采 集 标 本 量 时 多 时 少 ， 如 果 这 次 取 的 分 泌 物 少 ， 而 分 泌 物 中 支 原体 数 量 10 4， 采 用 所 谓 的 可 计 数 的 试 剂 检 测 可 能 会 得 到 支 原 体 数 量 10 4 的 结 果 ；同 样 中 段 尿 是 一 个 定 性 且 很 泛 的 概 念 ， 每 次 不 可 能 取 到 相 同 位 置 的 中 段 尿 ， 也 不 可 能 标 准化 。 既 然 取 样 不 能 标 准 化 ， 计 数 就 不 科 学 ， 可 能 给 临 床 治 疗 工 作 带 来 误 导 。 市 面 上 的 试 剂带 计 数 功 能
14、的 可 能 原 因 ： 厂 家 没 有 意 识 到 标 本 采 集 量 的 标 准 化 问 题 ； 故 弄 噱 头和 跟 风 。 衣 原 体 PCR 定 量 试 剂 也 是 测 分 泌 物 ， 存 在 同 样 问 题 。2.4 发 病 率 高 而 阳 性 率 低 的 问 题 随 着 与 国 际 接 轨 ， 发 病 率 可 比 性 会 增 加 。 西 方 国 家NGU 中 UU 阳 性 率 一 般 为 40% 60%（ 含 多 重 感 染 ， 下 同 ） ， MH 阳 性 率 一 般 为20% 50%， CT 阳 性 率 一 般 为 25% 55% 4 6 。 而 纵 观 近 十 年 国 内 临
15、 床 资 料 ， UU阳 性 率 一 般 为 20% 30%， MH 阳 性 率 一 般 为 10% 20%， CT 阳 性 率 一 般 为16.2% 27.0% 7 ， 国 内 明 显 比 国 外 低 ， 临 床 实 际 的 阳 性 率 更 低 ， 究 其 原 因 ， 可 做 以 下分 析 。 支 原 体 试 剂 灵 敏 度 偏 低 的 原 因 ： 没 有 充 分 考 虑 支 原 体 生 长 增 殖 所 需 的 最 佳 条件 ； 仅 考 虑 其 它 微 生 物 存 在 造 成 的 假 阳 性 而 没 考 虑 某 些 微 生 物 存 在 会 抑 制 支 原 体 的 生 长繁 殖 ； 为 了 对
16、 UU 和 MH 鉴 别 ， 培 养 基 一 般 添 加 野 株 天 然 耐 药 的 抗 生 素 ， 但 临 床 株 可 能在 进 化 过 程 中 突 变 而 对 这 种 抗 生 素 敏 感 ， 导 致 假 阴 性 的 结 果 。 我 们 在 临 床 工 作 中 发 现 一 种支 原 体 试 剂 ， 性 病 门 诊 UU 阳 性 率 为 60.65%， MH 阳 性 率 为 23.26%， 与 国 外 资 料 比 较符 合 ， 并 且 与 国 内 程 文 献 报 道 （ 58.97%） 接 近 8 ， 与 此 对 比 国 内 另 一 种 同 类 试 剂UU 阳 性 率 为 22.17%， MH 阳 性 率 为 9.35%。 有 些 正 常 人 通 过 液 体 培 养 基 培 养 可 能 判 为 阳性 ， 这 些 人 虽 无 任 何 症 状 ， 但 其 作 为 支 原 体 携 带 者 可 看 作 泌 尿 生 殖 道 炎 症 性 疾 病 的 危 险 人群 ， 临 床 上 也 应 予 以 高
