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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询131I 标记抗 CD20 单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的放射免疫显像【摘要】 目的探讨 131IantiCD20McAb 经瘤内注射后在荷人Burkitts 淋巴瘤细胞系 Raji 细胞移植瘤裸鼠体内的放射免疫显像。方法 131I 标记物的标记采用 IODOGEN 碘化标记；注射标记物后第 1、3、7、15 天将荷瘤裸鼠 SPECT 显像后活杀，定标器测量并计算瘤、血等 12 种器官或组织的ID/g 值，根据 MIRD 委员会推荐的公式计算肿瘤累积吸收剂量。结果 131IantiCD20McAb 瘤内注射组的 SPECT 显像结果优于腹腔注射组
2、和 131IIgG 瘤内注射组，该组肿瘤%ID/g 值在给药后第 1、3 和 7 天分别为后两组的 1.417倍和 1.73.7 倍，肿瘤累及吸收剂量在给药后第 3、7 和 15 天分别为后两组的 1.52.5 倍和 6.012.6 倍。结论131IantiCD20McAb 经瘤内途径给药可以使肿瘤获得最高的放射性药物摄取率，为下一步运用该途径进行放射免疫治疗提供了实验依据。 【关键词】 131I；抗 CD20 单克隆抗体；非霍奇金淋巴瘤；放射免疫显像1 材料与方法精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.1 材料 抗 CD20 单克隆抗体由罗氏公司提供，鼠 IgG 为 SIGM
3、A公司产品，Na131I 溶液购自成都中核高通同位素公司，人Burkitts 淋巴瘤细胞系 Raji 细胞由上海细胞研究所提供。1.2 抗体标记及标记物活性测定抗 CD20 单克隆抗体和鼠 IgG 与131I 的标记均采用 IODOGEN 碘化标记，抗体重量（mg）与 131I放射性强度(mci)比为 110，纸层析法测定标记物标记率和放化纯度，过量肿瘤细胞抗原结合法测量标记物免疫活性。1.3 实验动物模型 BALB/C 裸鼠由南方医科大学动物实验研究所提供，将处于对数生长期的 Raji 细胞悬液，按 67106/ 只，接种于裸鼠右臀部皮下。1.4 实验分组按肿瘤体积大小将荷瘤裸鼠随机分为 4
4、 大组，16 小组，4 只/小组。第 1 组瘤内注射 131IIgG ，第 2 组瘤内注射 131I与抗 CD20 单抗混合液，第 3 组瘤内注射 131IantiCD20 McAb，第 4 组腹腔注射 131IantiCD20 McAb。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.5 体内动态分布研究按预定方案分别注入含有 131I 标记物，注射后第 1、3、7、15 天 SPECT 显像后活杀，摘眼球取血，再取肿瘤、肝、脾、肾、心、肺、胃、大肠、小肠、对侧大腿肌肉及股骨等组织，电子天平称重，在定标器上测定各组织的放射性活度（cpm） ，计算各组织的比放射性活度（cpm/g）和I
5、D/g 值（每克组织摄入注入量的百分数） 。ID/g=组织的比放射性活度（cpm/g）/注入标记物的放射性活度（cpm）1.6 累积吸收剂量计算根据标记抗体在荷瘤裸鼠体内的动态分布ID/g 值，按照 MIRD 委员会推荐的公式计算肿瘤组织累积吸收剂量2。以注射后活杀时间为自变量，ID/g 值为因变量，对 4 组分别进行曲线拟合，建立曲线方程，运用积分的方法计算曲线下面积，相应值乘以 0.5Ci（因注入量的 1为 0.5Ci）即得 Ah/mk 值(cih/g)，代入下列公式计算累积剂量（Gy） 。DkAh/mknpnpnp(rkrh)+ppp(rkrh)式中：Dk：靶器官 k 吸收剂量（rad）
6、 ；Ah：源器官累积活度（Cih） ；mk：靶器官 k 的质量（g） ；npnpnp(rkrh)+ppp(rkrh)：给定放射性核素和器官下单位累积放射性活度在单位时间所致的吸收剂量，本实验 131I 为 0.421 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询grad/Cih。1.7 统计学方法使用 SPSS 10.0 统计软件，采用方差分析。2 结果2.1131I 标记物的标记率、放化纯度及免疫活性标记物标记参数见表 1。2.2 荷瘤裸鼠注入不同 131I 标记物后肿瘤和各组织ID/g 值 131IantiCD20McAb 瘤内注射后各时间点的肿瘤%ID/g 值均显著高于腹腔注射组
7、和 131IIgG 瘤内注射组，分别为后两组的1.417 倍和 1.73.7 倍；各非瘤组织和器官的%ID/g 值，除个别外（如第 15 天心）均小于后两组。131IIgG 瘤内注射组肿瘤ID/g 值在第 1 天显著高于 131IantiCD20McAb 腹腔注射组（P0.05） ，但第 3 天开始已降至较低水平，与后者比较无显著性差异（P0.05） ，见表 2。131I 表 1131I 标记物标记参数标记物 注：IgG:131IIgG 瘤内注射组； IT:131IantiCD20McAb 瘤内注射精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询组；IP:131IantiCD20McAb
8、腹腔注射组与抗 CD20 单抗混合液经瘤内注射后肿瘤ID/g 值在 24 小时内从注射即时的 192.4 下降至0.6。上一页 1 2 下一页2.3 肿瘤累积吸收剂量给药后不同时间肿瘤累积吸收剂量，131IantiCD20McAb 瘤内注射组均高于其他各组。其中给药后 3天，该组肿瘤累积吸收剂量分别为腹腔注射组和 131IIgG 瘤内注射组的 12.6 和 2.1 倍；给药后 7 天为 6.0 和 2.5 倍；给药后 15 天为 7.0 和 1.5 倍，见表 3。表 3 各组给药后不同时间的累积吸收剂量组别累积吸收剂量（Gy） 第 3 天第 7 天第 15 天 131IIgG(IT)5.155
9、.6513.99131IantiCD20McAb （IT）10.8313.9021.65131IantiCD20McAb （IP）0.862.323.09131I+antiCD20McAb （IT）0.070.100.462.4 放射免疫显像 给药后 1、3 和 7 天放射免疫显像，131IantiCD20McAb瘤内注射组肿瘤影像清晰，而腹腔注射组在整个过程中肿瘤影像均未显示；131IIgG 瘤内注射组仅第 1 天肿瘤影像清晰，第 3 天较模糊，第 7 天基本未能显示；131I+antiCD20McAb 瘤内注射组在第 1 天已无任何影像显示，见图 1。3 讨论多数临床研究结果表明，放射免疫
10、治疗采用传统的静脉给精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询药难以达到足够的肿瘤治疗剂量3,4。采用肿瘤内直接注射标记单抗的方法是解决这一问题的有效途径之一。本实验旨在研究 131I 标记的抗 CD20 单抗经瘤内注射后在荷瘤裸鼠体内的组织分布和放射免疫显像，为下一步放射免疫治疗的实验研究奠定基础。以往的荷瘤裸鼠实验多采用静脉注射或腹腔注射给药，两者标记抗体的动态分布基本一致5。静脉或腹腔给药主要存在以下问题68 ：标记抗体进入血循环，可被血液稀释，被血中游离抗原中和；标记抗体难以通过血管壁进入肿瘤组织； 标记抗体进入机体正常组织，与其他组织形成非特异性结合。为了克服上述不利因素的
11、影响，我们采用了瘤内注射的给药途径，与腹腔注射比较具有以下优点：（1）局部给药减少了全身对标记抗体的暴露，明显增加了标记抗体在肿瘤内的浓聚912 。本实验中，131IantiCD20McAb 经瘤内注射后肿瘤%ID/g 值以注射即时最高，72 小时内较快降至一定水平，表明抗 CD20 单抗与瘤细胞的结合是在注射后短时间内完成的。实验中各时间点的肿瘤累积吸收剂量，瘤内注射组高于腹腔注射组，充分显示了这一给药途径对提高标记抗体浓聚于肿瘤的作用。 （2）瘤内注射可以将最高比放射性活度和免疫活性状态的标记抗体首先贡献给肿瘤，因此能够获得抗体与肿瘤的最佳结合和对肿瘤细胞的最强杀伤力。本实验 131Ian
12、tiCD20McAb 瘤内注射组瘤内%ID/g 明显高于腹腔精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询图 1 荷瘤裸鼠注入 131I 标记物后体外放射免疫显像注射组，而各非瘤组织和器官的%ID/g 值均低于腹腔注射组，充分说明瘤内注射这一治疗途径在保证疗效的同时，由标记抗体非特异性分布带来的毒副作用亦会显著下降。131I 的 射线具有细胞杀伤作用，但以 131I 和抗 CD20 单抗单纯混合进行瘤内注射，由于 131I 不能特异性的定位于肿瘤组织，肿瘤ID/g 值在给药后 24 小时以内已降至0.6，肿瘤累积吸收剂量极低，起不到杀瘤作用，这一点也充分说明了放射性核素标记抗体是肿瘤放射
13、免疫治疗的中心环节。总之，本实验结果显示，131IantiCD20McAb 经瘤内途径给药可以使肿瘤获得最高的放射性药物摄取率，为下一步放射免疫治疗的动物实验研究奠定了基础。【参考文献】1Tedder TF, Engel P. CD20: a regulator of cellcycle progression of B lymphocytesJ. Immunol Today, 1994,15(9):450454.2Dillman LT. Radionuclide decay schemes and nuclear 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询parameters fo
14、r use in radiation dose estimationJ. J Nucl Med,1969,10(Suppl 2):132.3Patel S, Stein R, Ong GL, et al. Enhancement of tumortonontumor localization ratios by hepatocytedirected blood clearance of antibodies labeled with certain residualizing radiolabelsJ. J Nucl Med,1999, 40(8):13921401.4Kinuya S, Li
15、 XF, Yokoyama K, et al. Intraperitoneal radioimmunotherapy in treating peritoneal carcinomatosis of colon cancer in mice compared with systemic radioimmunotherapyJ. Cancer Sci,2003,94(7):650654.5Reddy LH, Murthy RS. Pharmacokinetics and biodistribution studies of Doxorubicin loaded poly(butyl cyanoa
16、crylate) nanoparticles synthesized by two different techniquesJ. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub,2004,148(2):161166.6邓敬兰,李宝安. 131IMGb 单克隆抗体对荷胃癌裸鼠放射免疫治疗的实验研究J.中华核医学杂志,1993,13(3):176178.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询7Wilder RB, DeNardo GL, DeNardo SJ. Radioimmunotherapy recent results and f
