银屑病发病分子机制研究

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1、申请代码：受理部门： 收件日期：受理编号：检 查 保 护国家自然科学基金申 请 书资助类别： 亚类说明： 附注说明： 项目名称： 申 请 者： 电话： 依托单位： 通讯地址： 邮政编码： 单位电话： 电子邮件： 申报日期： 200 年 月 日国家自然科学基金委员会您现在不能检查保护文档或打印文档，请根据以下三个步骤操作：1)如果您是 Word2000 或以上版本用户，请把 Word 宏的安全性设为:中方法: Word 菜单-工具-宏-安全性-安全级,设置为中(如果您是 Word97 用户，继续执行以下步骤)2)关闭本文档，重新打开本文档3)点击启用宏按钮，即可开始填写本文档或打印了 国家自然科

2、学基金申请书第 2 页 版本 1.006.023基本信息 0UQpCL0k姓名 在 此 录 入 修改 性别 出生年月 年 月 民族 学位 职称 主要研究领域 电话 电子邮件 传真 个人网页 工作单位 申 请 者 信 息在研项目批准号 名称 在 此 录 入 修 改 代 码 联系人 电子邮件 依托单位信息电话 网站地址 单 位 名 称 代 码在 此 录 入 修 改 合作单位信息在 此 录 入 修 改 项目名称 运 用 siRNA技 术 和 人 银 屑 病 皮 损 -SCID鼠 移 植 模 型 探 讨 CD147在 银 屑 病 发 病 中的 作 用 及 机 制资助类别 面上项目 亚类说明 自由申请项

3、目 附注说明 申请代码 C030116:皮肤病学 C030115:性传播疾病学基地类别 预计研究年限 2006 年 1 月 2008 年 12 月 研究属性 应用基础研究 项 目 基 本 信 息摘 要项目研究内容和意义简介（限 400 字）：真皮内 T 细胞异常活化、角质形成细胞（KC）增殖和分化异常和中性粒细胞异常趋化是银屑病的重要特点。CD147 是一种新型跨膜糖蛋白，我们曾率先证实其与 KC 分化状态密切相关。CD147 与 T 细胞增殖、活化和聚集有关；并可以作为细胞膜受体参与亲环素（CyP）A 和 B 介导的 T 细胞基质黏附和中性粒细胞趋化。本研究中，我们将首先了解 CD147、C

4、yPA 和 CyPB 在 Jurkat T 细胞，银屑病外周血炎症细胞和皮损中的表达；再通过 CD147 siRNA 转染明确其在 T 细胞增殖、活化及基质黏附中的作用，和在 CyPA 和 CyPB 介导的中性粒细胞趋化中的作用；最后建立人银屑病皮损-SCID 鼠移植模型，在皮损内局部注射转染细胞以明确 CD147 siRNA 能否在体内缓解银屑病皮损发展。从而明确 CD147 在银屑病诸多发病环节中的作用和机制，明确 CD147 siRNA 对移植皮损的效应，为探寻银屑病新的治疗方法提供新的靶分子。关 键 词(用分号分开，最多 5 个) CD147;银屑病；亲环素；siRNA;SCID 鼠

5、国家自然科学基金申请书第 3 页 版本 1.006.023项目组主要成 员 (国 家 杰 出 青 年 科 学 基 金 不 填 此 栏 )编号 姓 名 出生年月 性别 职 称 学 位 单位名称 电话 电子邮件 项目分工每年工作时间（月）1在 此 录 入 修 改 2在 此 录 入 修 改 3在 此 录 入 修 改 4在 此 录 入 修 改 5在 此 录 入 修 改 6在 此 录 入 修 改 7在 此 录 入 修 改 8在 此 录 入 修 改 9在 此 录 入 修 改 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生8 2 2 1 1 2说明: 1. 高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由

6、申请者负责填报，总人数自动生成。说明: 2. 项目组主要成员不包括项目申请者。 国家自然科学基金申请书第 4 页 版本 1.006.023经费申请表 （金额单位：万元）科目 申请经费 备注（计算依据与说明）一.研究经费 22.4500 1.科研业务费 3.0000 （1）测试/计算/分析费 0.8000 图像分析、测序、酶联免疫检测等（2）能源/动力费 0.2000 实验期间所消耗水电的消耗（3）会议费/差旅费 1.0000 国内及国际学术会议各 1 次（4）出版物/文献/信息传播费 1.0000 资料印刷、复印、版面费、计算机和网络费用（5）其它 2.实验材料费 18.6500 （1）原材料

7、/试剂/药品购置费 17.3000 细胞分离，免疫印迹，引物合成，RT-PCR、质粒构建和转染试剂，细胞生物学试剂（2）其它 1.3500 实验动物及相关费用3.仪器设备费 0.8000 （1）购置 0.8000 补充移液枪、小型电泳仪（2）试制 4.实验室改装费 5.协作费 0.0000 二.国际合作与交流费 2.0000 1.项目组成员出国合作交流 1.0000 中前期实验结果交流和商讨2.境外专家来华合作交流 1.0000 中后期实验结果交流和商讨三.劳务费 1.2000 象征性地支付中日双方相关工作人员四.管理费 科研管理费合 计 25.6500 国家其他计划资助经费 其他经费资助（含

8、部门匹配） 与本项目相关的 其他经费来源其他经费来源合计 0.0000 国家自然科学基金申请书第 5 页 版本 1.006.023报告正文查 看 报 告 正 文 撰 写 提 纲（一）立项依据与研究内容（4000-8000 字）： 1. 项目的立项依据银屑病是一种多基因遗传背景下的免疫异常疾病，因其具有发病率较高和主要累及青壮年等特点而在皮肤科临床和科研领域倍受重视。从病理学上看，角质形成细胞增殖和分化的异常，角质层中性粒 细胞聚集所形成的 Munro 微脓疡以及真皮浅层血管周围以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润是银屑病的三个最主要的特点。尽管三者之间存在非常复杂的相互作用和因果关系，但一般认为，真皮

9、内聚集并活化的 T 淋巴细胞是银屑病皮损发生的始动因素，活化的 T 细胞可产生 bEGF，INF-和 IL-8 等细胞/趋化因子，从而导致表皮角质形成细胞增殖和分化状态的异常并诱导中性粒细胞表皮内趋化和聚集1。从目前银屑病的药物治疗手段上看，维 A 酸类药物和蒽林的主要作用机理是调节角质形成细胞的异常增殖和分化状态；传统免疫抑制剂 （糖皮质激素和 MTX 等）以及新型免疫抑制剂（环孢素 A，他克莫司，匹美克莫司，西洛莫司等）的主要作用机理是抑制T 细胞的增殖和活化；细胞/趋化因子（TNF-，CD4 ，CD25，CD11a，IL-2R，IL-6R，IL-12等）抗体主要是阻断 T 细胞活化及其相

10、关作用；IL-8 抗体主要是阻断中性粒细胞的趋化。但由于以上药物治疗手段各自不同的副作用和作用靶环节的相对单一性，其治疗效果及运用前景尚不能完全令人满意。因此，我们需要寻找同 时参与银屑病多个病理生理学环节的新的靶分子及其适当的抑制途径，从而为开辟银屑病新的研究领域和探寻银屑病新的治疗手段提供理论依据。Basigin/CD147 分子是一种属于免疫球蛋白超家族成员的新型跨膜糖蛋白，本研究组成员曾首次克隆该分子并发现它广泛存在于不同组织和细胞中，在细胞粘附及胚胎发育等方面发挥重要作用2 。本研究群体从 1998 年开始围绕 CD147 在角质形成细胞异常增殖和分化以及皮肤肿瘤中的作用及机制开展了

11、系列研究，并取得了一些原创性的科研成果：首先是明确了 CD147 位于角质形成细胞膜微 绒毛的超微分布特点，从而提示这一分子可能在细胞粘附、细胞内外分子协同作用以及细胞膜受体等方面发挥重要作用3； 国家自然科学基金申请书第 6 页 版本 1.006.023然后，我们又利用大量实验首次发现：在皮肤鳞状细胞癌及恶性黑色素瘤的肿瘤细胞膜上 CD147 的表达显著增高，增高表达的 CD147 分子可以通 过诱导肿瘤细胞周围成纤维细胞表达基质金属蛋白酶（MMPs ），从而在多种皮肤肿瘤的浸润和转移中发挥作用4-7 ；另外，我们还率先证实了 CD147 与生理和病理状态下角质形成细胞分化状态密切相关，是一

12、种新的低分化角质形成细胞的标志蛋白，并可能发挥抑制角质形成细胞分化的作用3，7-9，从而在“角质形成细胞分化异常”这一层面上为开辟银屑病新的科研领域提供了一个很有价值的靶分子。更为引起我们重视的是，几乎所有的 T 细胞淋巴瘤细胞中均有 CD147 分子的增高表达10， CD147 还被证明与 T 细胞的发育11、分化12，特别是活化13密切相关。Kasinrerk 等的早期研究 发现 ，经 PHA 诱导活化的 T 细胞中 CD147 的表达显著增高13；进一步的研究发现，T 细胞膜上的 CD147 分子可以参与 CD3 介导的 T 细胞活化14；CD98 是一种与 T 细胞等炎症细胞活化和聚集

13、密切相关的分子，而 CD147 抗体能抑制CD98 介 导的炎症细胞聚集15；最近的研究显示， T 细胞膜上的 CD147 分子可能是通过受体- 配体的信息传导作用影响 T 细胞的增殖与活化 16。亲环素（cyclophilin, CyP）是一种保守的蛋白家族，存在于包括 T 细胞在内的多种人体细胞中, CyP 家族有 CyPA、CyPB、CyPC、CyPD 等成员，其分子量以及亚细胞定位各不相同。该组蛋白有两个共同特征，一是具有 肽基脯氨酸顺/反异构酶活性,可催化细胞内蛋白质的折叠和转运；二是能与进入细胞内的免疫抑制剂（环孢素 A 等）结合形成复合物，该复合物可抑制神经钙调 磷酸酶， 进而抑

14、制 T 细胞核活化因子（NFAT），导致活化T 细胞的相关细胞因子基因不能转录和翻译，阻断 T 细胞信号传递从而实现环孢素 A的免疫抑制作用。此外, CyP 还可被活化的 T 细胞分泌,以细胞因子样的方式参与多种生理和病理过程。 国家自然科学基金申请书第 7 页 版本 1.006.023CyPA 是 CyP 家族的主要成员，由 165 个氨基酸组成，相对分子量 18kDa，约占细胞蛋白总量的 0.10.4，主要位于胞质内。可由 T 细胞等炎症细胞分泌，是一种嗜中性粒细胞17 、T 细胞18和嗜酸性粒细胞19 的趋化因子。实验证实 CyPA 的受体与人 CD147 cDNA 的核苷酸排列有 97的同源性，作为 CyPA 的受体，CD147 可以在CyPA 介导的信号传递中 发挥重要作用20。作为艾滋病毒整合 CyPA 分子的受体，CD147 参与了艾滋病毒进入和感染宿主细胞的过程 21。最新的研究 显示，CyPA 可以调节细胞膜上 CD147 的表达水平22,23。CyPB 是 CyP 家族的另一主要成员，主要存在于细胞内质网中，并可分泌到 细胞外在细胞间信号传导中发挥作用。有研究证实，CD147 也是 CyPB