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1、泰山四叶参多糖的提取及含星测定【摘要】目的从泰山四叶参中提取多糖并测定多糖含量。方法经脱脂、醇提后， 用水提醇沉法提取多糖，用苯酚-硫酸法测 定其含量。结果泰山四叶参中多糖含量为平均回收率为 RSD=%结论泰山四叶参多 糖含量较高，具有开发利用价值。【关键词】 四叶参；多糖； 提取 Abstract : ObjectiveTo extract the polysaccharide and measure the content in Radix Codonopsis Lanceolatae from Mountain polysaccharide was obtained with the w
2、ater extraction and alcohol precipitation method, and the polysaccharide content was measured with the phenol-sulphuric acid polysaccharide content in Radix Codonopsis Lanceolatae was %, the rate of recovery was %, and RSD was %(n=4). ConclusionRadix Codonopsis Lanceolatae from Mountain Taishan cont
3、ainsplentiful polysaccharide, and it has much economic value.Key words : Radix Codonopsis Lanceolatae; Polysaccharide; Extracion; Content determination四叶参Codonopsis lanceolata又名轮叶党参、羊乳、山胡萝卜等，系桔梗科党参属 多年生草质缠绕藤本植物，在我国主要分布 于东北地区，在泰山山系也有分布。四叶参 为药食两用植物，在民间采其春季幼苗或根 作山珍食用，美味可口。传统上其根入药， 具清热解毒、止咳祛痰、补虚通乳、健身补 气
4、等功效，用于肺痈咳嗽、病后虚弱、产后 缺乳等症，系泰山四大名药之一 :1。泰山 四叶参的块根中含丰富的糖类化合物，但缺乏研究。本实验参考文献方法:2, 3,提 取泰山四叶参多糖并测定其生药中多糖含 量，以期为泰山四叶参的进一步开发利用及 其多糖生物学活性研究奠定基础。1材料与仪器药材四叶参采自泰山东麓，秋季挖取，洗 净，切片，50 C烘干，粉碎成粗粉备用。经本院中药学教研室鉴定为四叶参的干燥根。试剂与仪器石油醍、乙醇、丙酮、氯仿、 正丁醇、浓硫酸、苯酚、葡萄糖等均为国产 分析纯。中药粉碎机、RE-52A旋转蒸发仪、 S-54紫外可见分光光度计、离心机、干燥箱 等均为国产仪器设备。2方法与结果泰
5、山四叶参多糖的提取与精制称取泰山 四叶参粗粉150 g ,加4倍量石油醍回流脱 脂2次，2 h/次；滤渣加4倍量80%乙醇回 流提取2次，2 h/次。经脱脂、醇提后的滤 渣在60C烘干，分别加6, 5, 4倍量蒸储水 在95C水浴中浸提3次，2 h/次，合并滤液， 减压浓缩至200 ml左右。以每100 ml浓缩 液加20 ml氯仿正丁醇液，剧烈振荡30 min, 以4 000 r - min -1离心15 min ,去除下层 氯仿及中层变性蛋白， 取上部水层再重复去 蛋白操作，至无明显中层为止。收集去蛋白 后的上部水层，加无水乙醇至溶液含醇量达 80%，静置过夜，以 4 000 r - mi
6、n-1离心 15 min，收集沉淀物，再依次用 95%乙醇、 无水乙醇、乙醍、丙酮洗涤各 2次，得多糖粗品。再以水一乙醇重结晶纯化2次，60C烘干，得白色粉末状精制泰山四叶参多糖g ,得率。标准曲线的制备葡萄糖标准溶液的配制精密称取105C 干燥至恒重的葡萄糖对照品 100 mg加适量 水溶解，转移至100 ml容量瓶中，加蒸偕 水至刻度，摇匀，配成 1 mgml-1葡萄糖 标准液备用。5%苯酚溶液的配制取苯酚 100 g,加铝片 和碳酸氢钠g ,常压蒸储，收集182 C偕分 10 g，加蒸储水200 ml溶解，置棕色瓶内 放冰箱备用。标准曲线的制作分别吸取葡萄糖标准液10, 20, 40,
7、60, 80, 100 it l 置于大试管 中，各补加蒸储水至 ml ,葡萄糖浓度分别 为 5, 10, 20, 30, 40, 50 p g ml-1 ,然 后各加入5%苯酚溶液1 ml ,缓慢沿壁加浓 硫酸5 ml，混匀，放置5 min后，再沸水浴 加热15 min，流水冷却至室温，在波长 490 nm处测定吸光度。以蒸储水代替葡萄糖溶液 作空白对照。结果表明，葡萄糖浓度在 550(1 g ml-1 范围内，吸光度与浓度具有良好的线性关系。 以浓度为纵坐标，吸光度为横坐标，绘制标 准曲线，得回归方程：C=+, r= 4。换算因子的测定精密称取干燥至恒重的 精制泰山四叶参多糖 20 mg置
8、100 ml容量 瓶中加蒸偕水，定容至刻度，作为多糖储备 液。精密吸取多糖储备液 ml 3份，按标准 曲线制作方法测定其吸光度。经测定，3份多糖储备液平均吸光度为， 从回归方程中求出多糖液中折合葡萄糖的 浓度为g ml-1。按下式计算换算因子F=W/C D其中W为多糖的重量，C为多糖液中折合葡 萄糖的浓度，D为稀释因素。测得 F= 1。泰山四叶参多糖含量的测定精密称取泰 山四叶参粉末g 3份，分别置圆底烧瓶中加 80%乙醇150 ml回流提取2 h,趁热抽滤， 滤渣用80%乙醇洗涤3次。然后滤渣连同滤 纸置烧瓶中，加蒸储水 150 ml, 95 C水浴加 热提取2h ,趁热抽滤，用热水洗涤烧瓶
9、和 滤渣，洗液并入提取液中，待冷后转移于250 ml容量瓶中，补加蒸留水定容至刻度，如此 制作样品溶液3份，置冰箱中备用。精密吸取样品溶液ml ,按标准曲线制作方 法测定其吸光度。每份样品溶液重复操作2次，取平均吸光度。3份样品溶液的平均吸 光度分别为，平均。从回归方程中求出样 品溶液中折合葡萄糖浓度为1 g - ml-1。按下式计算四叶参中多糖的百分含量。多糖含量=CDFW 100%其中W为四叶参样品的重量，C为样品液中 折合葡萄糖的浓度，D为稀释因素。计算泰 山四叶参中多糖含量为。回收率测定采用加样回收法。 取样品溶液 ml 4份，分别加入葡萄糖标准液 10, 20, 40, 60从l ,
10、按标准曲线制作方法测定其吸 光度，根据葡萄糖的检出量，计算其回收率。回收率=/葡萄糖加入量X 10 0%。测得平 均回收率为 , RSD=%。稳定性实验将供试品溶液完成显色后，每隔h测吸光度1次，连测5次。结果表明 2h内稳定性良好，以 A值计算，RSD=%。 3讨论多糖是一类由醛糖或酮糖通过糖昔键连接 而成的天然高分子聚合物，是构成生命的分 子基础之一，是自然界含量最丰富的生物聚 合物。人们陆续发现，多糖不仅作为广谱免 疫促进剂，具有免疫调节功能，还在抗肿瘤、 抗病毒、抗炎、降血糖、降血脂、抗辐射等 方面具有广泛的药理作用:4。研究表明， 我国东北产四叶参提取物具有镇咳、镇痛抗炎、抗疲劳、抗
11、氧化、抗衰老、降血脂等作 用，其中不少药理作用与其多糖有密切关系5。多糖的测定方法很多，本实验通过脱 脂，以80%乙醇提取以除去单糖、寡聚糖、 昔类及生物碱等醇溶成分，再用水提醇沉法 分离多糖成分，并以苯酚-硫酸法测其含量。 通过回收率实验和稳定性实验可知，本法所测多糖含量，简便可靠、重复性好、显色稳 定。实验结果表明泰山四叶参中多糖含量 为,但其化学成分、理化性质及药理活性 还有待于进一步研究。【参考文献】1 王德才，李同德，康颂建.泰山四 大名药之一四叶参J.食品与药品,2006,8(9):73.2 刘文生，薛霖莉，卫萍，等.潞党 参多糖的提取及含量测定J .安徽中医学 院学报，2005, 24: 42.3 高丽君，王汉忠，崔建华，等.苯酚 -硫酸法测定白首乌中多糖含量J.山东 农业大学学报，2004, 35: 295.4 邓小云，丁登峰，戴美红，等.植物 多糖药理作用研究进展:J .中医药导报， 2006, 12: 86.5 吴丽花，朴惠善，韩春姬.轮叶党参 化学与药理研究进展:J.中国中医药信息 杂志，2005, 12: 97.
