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1、1实验五 植物胚的诱导培养（理论） 胚胎培养 指使胚或具胚器官在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。广义胚胎培养：胚的培养、胚乳培养、子房培养、胚珠培养、试管受精。 胚胎培养的意义 克服杂种胚的败育，获得稀有杂种 获得单倍体和多倍体植株 打破种子休眠，促进胚萌发 快繁良种，缩短育种周期 克服种子生活力低下和自然不育性，提高发芽率 提高后代抗性，改良品质 种子活力的快速鉴定 种质资源的搜集与保存2 研究胚胎发育的过程和控制机制一、植物胚的培养（一）离体胚的培养指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离出来，置于培养基上进行离体培养的方法。植物胚结构（二）离体胚培养的方法1、成熟胚将受精（传粉）后的果实或种
2、子，用药剂表面消毒，然后在无菌条件下剖开种子，取出胚接种于培养基上，在人工控制条件下发育成一棵完整植株。2、幼胚条件：完全的人工合成培养基、高剥离技术、直接接种培养基上、不同于成熟胚（三）离体胚培养的关键技术1、植物材料的选择和胚龄对培养的影响 3种胚易分离 如：十字花科和豆科控制条件下培养的植物 如：荠菜 沿花序轴由上而下，胚龄增大人工授粉手段 胚龄越大，培养越易成功2、胚的剥离因素：植物种类 胚龄 种皮的硬度3、胚的处理即胚的显微手术试验。揭示了种子萌发过程中胚各组分之间的互作及胚的各个组分的形态发生潜力。4、选择适合的培养基成熟胚：简单培养基远缘杂种胚：基本培养基 + 有机物 + 生长调
3、节剂未成熟胚：营养要求复杂，条件苛刻胚培养的成功与否，关键之一：是否提供给胚适合的营养需要。离体胚成长过程中对营养的要求是变化的。4一般幼胚培养均以 MS 为基本培养基，少数以 MB（MS无机盐，B5 有机物）为基本培养基，可加一定浓度的 2，4-D 和 KT。5、渗透压对胚培养的影响渗透压调节依赖 糖成熟胚在含 2%蔗糖的培养基上生长良好、幼胚对糖要求高原胚培养时蔗糖用量可达 8% 12%渗透压调节也可用无机盐浓度一般为 0.2% 0.4%、超过 0.8%，对胚有毒害6、生长调节物及其他附加物通常需要生长素和分裂素，可同时加入搭配要合理成熟胚和幼胚培养时，激素的使用不是必需的附加物：维生素类
4、、氨基酸类、核酸及水解物、植物激素5活性炭、天然提取物7、培养基酸碱度对胚培养的影响丁香幼胚萌发率以 pH 为 6.2 最大，达 87.5%，成苗率为88.55%pH 过高过低，萌发率和成苗率都很低。8、环境条件对胚培养的影响A、光照：幼胚黑暗或弱光较好，轻微抑制作用核桃：接种后于 221的黑暗下培养易成功龙眼：完全黑暗培养，可避免酚类的毒害荠菜：以 12h/d 光照比黑暗条件好B、温度条件：一般 25 30 之间生长良好热带植物对温度要求高些有休眠习性的植物，接种后先置于 4 下培养一段时间，再转入正常温度下培养较好二、植物胚乳培养（一）概况6取带胚乳细胞的种子表面消毒后，无菌条件下剥离胚乳
5、组织，接种培养。不同胚乳发育类型及发育时期直接影响外植体取材时期以及胚乳细胞产生愈伤组织频率。胚乳培养的后代，常发生细胞染色体数目变化，形成多倍体、非整倍体等。（二）胚乳培养的关键A、胚乳发育时期的影响发育早期胚乳：操作不便，诱导率低游离核期或刚转入细胞期的核型胚乳：难得 callus旺盛生长期胚乳：易诱导产生 callus 旺盛期胚乳特征胚已分化完成胚乳已形成细胞组织充分生长，达到成熟大小外观为半透明的固体状7富有弹性一般情况下：接近成熟或完全成熟的胚乳 callus 诱导率很低，甚至无 callus木本植物，如：桑寄生科、檀香科植物，其成熟胚乳和诱导产生 callusB、培养基和激素的影响
6、培养基：MS、B5、MT 、White、LS 等水解酪蛋白、酵母提取物也很必要激素：要求特殊大麦胚乳只有在添加 2，4-D 的培养基上才能生长猕猴桃胚乳培养中，玉米素最好枣的胚乳培养中，激素似乎无特殊要求C、其他因素的影响蔗糖浓度：3% 5% ；温度：25 ； pH 值：如 玉米 6.1 7.0 ； 苹果 6.0 6.2 等（三）几种植物胚乳培养的方法8A、枸杞 B、葡萄三、植物胚珠培养（一）胚珠培养的意义有利于合子和早期原胚的培养、胚分化不全的种子的胚培养获得杂交后代和优良品种、离体授粉的需要、获得无病毒苗（二）胚珠培养的方法长度小于 3mm 的胚珠，难与直接解剖，可先接种于液体培养基中，根
7、据培养情况采取相应培养条件。（三）胚珠离体培养的技术关键A、胚珠剥离时期的选择杂种败育类型珠被被增生抑制幼胚的发育、幼胚先于周围组织退化周围组织先于幼胚退化根据其上类型，选择在夭折发生之前剥离胚珠进行培养。9B、胎座的有无胎座组织对胚珠的生长和发育是有利的、有胎座的易于胚珠正常分化为胚无胎座的胚珠难以分化、胎座也能促进种子发育C、培养基及培养条件适合的培养基：有机附加物 ； 渗透压：以蔗糖调节 ； 温度：25四、植物子房培养（一）子房培养的意义有效地挽救杂种胚的败育 单倍体植株的培育 离体授粉的需要 离体条件形成果实 花被功能研究（二）子房培养的方法（三）技术关键1、培养材料的选择10单倍体植
8、株：采用未授粉的离体子房；杂交育种：2、培养基和培养条件举例说明。五、植物离体受精在离体条件下通过裸露的胚珠上授粉而结实的方法。离体受精技术的突破，依三项技术为前提：a、雌配子和雄配子分离技术 b、单对原生质体融合技术 c、微培养技术（一）离体受精方法A、胎座上切下单个胚珠，接种，后授粉B、长着胚珠的完整或部分胎座接种并授粉C、剥掉子房壁，露出的胎座及上着生的胚珠接种，后授粉D、柱头接近法切下含有花粉的柱头接种在培养基，后在柱头周围接种异种裸露胚珠，授粉。E、哺育法11胚珠表面蘸有花粉发育的培养基后，接种，后在胚珠上授粉（二）技术关键A、花粉的采集和灭菌确定开花、花药分裂、授粉、花粉管进入胚珠和受精作用时间去雄后将花蕾套袋隔离 采集花粉粒 消毒无菌条件分裂花粉 授粉B、外植体选择开花前套袋、去雄 开花后 1 2d，采集花蕾，放入无菌室培养准备切去柱头，防止不授粉 胚珠剥离时间（开花后 1 2d 效果好）C、适合的培养基离体受精的主要过程花粉的萌发和花粉管的生长，受精12受精胚珠发育为成熟的种子，存在生活力的胚培养基应促进受精后的胚珠正常发育（三）离体受精障碍花粉在柱头上不萌发 花粉管不能进入胚珠 花粉在花柱中破裂 受精后，胚和胚乳之间的不亲和性 受精后，胚乳发育不良 杂种胚不能发育成熟
