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1、1,常用细菌生化反应,触酶试验 凝固酶试验 胆汁溶菌试验 氧化/发酵试验 氧化酶试验 苯丙氨酸脱氨酶试验 硝酸盐还原试验 糖发酵试验 吲哚试验（靛基质试验） 甲基红试验 V-P（Voges-Proskauer）试验 枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验 克氏双糖铁（KIA）复合试验 动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验,2,原理： 有触酶的细菌能催化过氧化氢生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。,触酶试验,3,方法： 用接种环取备检菌少许，置于洁净的玻片上，滴加3%的过氧化氢12滴，观察结果。 试管法：用洁净的玻棒蘸取待检菌少许，置于装有3%过氧化氢的试管内，观察结果。,触酶试验方法,4,触酶试验
2、结果,应用： 用于革兰阳性球菌初步分属。 注意事项：,5,血浆凝固酶试验,原理： 有些细菌能产生血浆凝固酶，可以使人和动物血浆中的纤维蛋白原转化成纤维蛋白，从而使血浆凝固。,6,方法： 玻片法：取洁净玻片一张，加生理盐水两小滴于玻片两端，用接种环挑取待检菌落和对照菌均匀涂于盐水中，制成浓菌液，加兔或人血浆一滴于菌液中，观察结果。 试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的血浆0.5ml，1支管加入待检菌肉汤培养物0.5ml,另两支分别加阴阳性对照菌肉汤培养物0.5ml，35培养34h后观察结果。 应用：主要用于金葡菌的鉴定。,血浆凝固酶试验方法,7,(-)凝固酶(+),1）凝固酶试验 玻片法测定
3、结合型凝固酶；试管法测定分泌型凝固酶。金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反应。路邓葡萄球菌产生结合型凝固酶而不分泌游离型凝固酶, 因而玻片凝固酶试验阳性、试管凝固酶试验阴性。 玻片法 少许菌落 + 兔血浆 10 s 内出现凝集为阳性,阳性：金葡、中间葡 阴性：其它葡萄球菌,试管法: 试管2支，各加0.5 ml兔血浆，取被检菌和阳性对照菌分别加血浆混匀，37 水浴34 h,（3）种的鉴定,(-)商品化的胶乳凝集试验(+),8,原理： 胆盐、去氧胆酸钠和硫磺胆酸钠能选择性地溶解肺炎链球菌，胆汁降低细胞膜的张力-膜破损或裂解,胆汁溶菌试验,9,方法： 平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的菌落上，
4、3530min观察结果。 试管法：于0.9ml培养了1824小时的菌液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆盐0.2ml混匀，37水浴1030min，观察结果。 应用： 主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。,胆汁溶菌试验方法,10,CAMP试验,原理： B群链球菌能产生一种胞外因子 CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌-溶血毒素的活性，因此，在两菌交界处出现箭头样的溶血增强区。,11,方法： 取血平板一块，用产生-溶血毒素的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此线0.5cm处垂直划线。351824小时培养，观察结果。 应用： 用于鉴定B群链球菌。,CAMP试验方法,3）CAMP试验,无乳链球菌能产生CAM
5、P因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验,13,13,涂片：G+C,触酶试验,链球菌 肠球菌,+,葡萄球菌、微球菌,标本,氧化酶(双糖), (O),+ (F),微球菌,葡萄球菌,凝固酶试验,鉴定流程,+,金葡,表葡、腐生,新生霉素,表葡,腐生,S,R,14,14,触酶试验：阴性,链球菌属鉴定流程,观察血平板上溶血环,-溶血环,非-溶血环,Optochin、杆菌肽、 胆七 、高盐,杆菌肽 、CAMP、 胆七 、高盐,非溶血链球菌鉴定,16,氧化-发酵试验,又称O/F试验或Hugh-Ldifson（HL）试验,17,原理： 细菌分解葡萄
6、糖对O2需求不同， 氧化型：细菌只在有氧环境中分解葡萄糖; 发酵型：细菌可在有氧、无氧环境中分解G; 产碱型：细菌在有氧、无氧环境中都不 分解葡萄糖;,葡萄糖氧化/发酵试验,18,硝酸盐还原试验,某些细菌能还原培养基中的硝酸盐-亚硝酸盐、氨和氮。,原理：,19,原理： 使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中获得氧，使其成为亚硝酸盐或其它还原物。培养基中的亚硝酸基能与-萘氨和苯磺酸形成红色的N-萘氨偶氮苯磺酸。若出现红色现象则说明该菌还原硝酸盐。,硝酸盐还原试验,20,方法： 取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜面上，35培养1824小时，然后依次加入含-萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL，30s后观察结果。,
7、硝酸盐还原试验方法,21,应用： 有助于鉴别肠杆菌科、奈瑟菌属、布兰汉菌属、假单胞菌属等,22,氧化酶试验,原理： 某些细菌具有细胞色素氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化成紫红色醌类化合物,23,方法： 滤纸法：用洁净滤纸蘸取菌落，加一滴试剂，观察结果 菌落法：直接在菌落上加试剂，观察结果 纸片法：使用试剂浸泡制成的试剂纸片，取足够的菌落，观察结果。 应用：用于科别鉴定试验。,氧化酶试验方法,24,苯丙氨酸脱氨酶试验,原理： 有苯丙氨酸脱氨酶的细菌，可以使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙铜酸与三氯化铁作用形成绿色化合物。,25,方法： 琼脂斜面法：将待检细菌接种到苯丙氨酸琼脂斜面
8、上， 35培养2448h，取出，将三氯化铁试剂45滴滴于斜面上，观察结果。 快速纸片法：将待检菌涂于苯丙氨酸纸片上，孵育15min，取出，滴加三氯化铁试剂，立即观察结果。,苯丙氨酸脱氨酶试验方法,26,应用：多用于肠杆菌科的鉴定。 变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属为阳性。,27,1.糖发酵试验,【原理】： 各种细菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，对糖（苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的分解后仅产酸，有的分解后产酸产气，故可用来鉴别细菌。 【方法】： 将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种葡萄糖、乳糖发酵管，35C培养18-24h 观察结果。,28,1.糖发酵试验,【结果】： 首先确定细
9、菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状： 1）不分解糖，培养基顔色与接种前无变化，以“-”表示； 2）分解糖产酸不产气，培养基由紫色变为黄色，以“+”表示； 3）分解糖产酸产气，除培养基顔色变化外，倒管中还有气泡，以“”表示。,29,2.吲哚试验（靛基质试验）,【原理】：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，与吲哚试剂形成红色化合物。 【方法】：大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水培养基中，35C18-24h后，加入吲哚试剂数滴，静置分层，观察结果。 【结果】：在培养物液面上层呈玫瑰红色为阳性，不变色者为阴性。,30,31,3.甲基红试验,【原理】：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮
10、酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基pH 在4.5以下，加入甲基红指示剂后呈红色（阳性）；有些细菌分解葡萄糖产生的酸进一步化为醇、酮等非酸性物质，使培养基pH在6.2以上，加入甲基红指示剂后呈黄色（阴性）。 【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨水培养基中，35C18-24h，加入甲基红指示剂2-3滴观察结果。 【结果】：红色为阳性，黄色为阴性。,32,4.V-P（Voges-Proskauer）试验,【原理】：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP
11、试验阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌酐，以加速其反应。 【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水中，35C，24-48h，加入VP试剂甲液和乙液各1滴，充分摇动，观察。 【结果】：红色为阳性，若为阴性应再培养4h观察，仍无红色者为阴性。,33,5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验,【原理】：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时柠檬酸盐为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色为阳性，培养基不变色（绿色）为阴性。 【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于柠檬酸盐培养基中，35C，24-48h
12、，观察。 【结果】：菌苔出现，培养基变为深蓝色为阳性。细菌不能生长，培养基不变色（绿色）为阴性。,34,6.克氏双糖铁（KIA）复合试验,【原理】：该培养基用酚红指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色。细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸产气，则斜面与底层均呈黄色，且有气泡。如只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接触空气而氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层由于是在相对缺氧状态下，细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不被氧化挥发而保持黄色。如细菌分解蛋白产生硫化氢，则与硫化亚铁作用生成黑色的硫化铁，使培养基变黑。,35,6.克氏双糖铁（KIA）复合试验,【方法】：将待检菌接种
13、于克氏双糖铁培养基（底层穿刺，上层斜面划线），35C，24h，观察。 【结果】：发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁沉淀。,36,7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验,【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。 【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU培养基，35C，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加吲哚试剂。 【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。,37,伊红美蓝培养基（EMB）,38,原理：（EMB平板) 非致病菌：,致病菌：,不分解乳糖，菌落呈无色、半透明。,其它类似培养基？,39,SS培养基 （Salmonella Shigella Agar Medium）,40,原理：（ SS平板） 非致病菌：,致病菌：,不分解乳糖，菌落呈透明无色； 枸橼酸铁能指示硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色,注意： 非致病菌并非被杀灭，故挑病原菌菌落时，尽量挑取菌落中心部分,
