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1、细胞生物学实验四 染色体制备,覃钦博 博士 湖南师范大学生命科学学院 鱼类发育生物学实验室,2,3,对实验鱼注射PHA 3次，每次剂量为8-10 g/g体重，每一针PHA的效应时间分别为12h、4h和2h; 原理：植物血球凝集素（PHA）能刺激B淋巴细胞有丝分裂，但是过量使用PHA能导致血液凝聚。,1.刺激淋巴细胞的有丝分裂,4,2.抑制淋巴细胞有丝分裂,在解剖取材前的2h注射秋水仙素，剂量为2-4 g/g体重。 原理：秋水仙碱能破坏纺锤体，是分裂的细胞处于有丝分裂中期。,5,3.取材,将实验鱼剪鳃放血，从泄殖腔沿腹部剖开实验鱼，从相应部位取出肾脏组织（包括前肾和中肾脏）；放入盛有0.8%的生
2、理盐水的培养皿中清洗，用剪刀充分剪碎（约3min成糊状）材料后移于离心管中，充分吹打（3min)；将离心管中的生理盐水加至10ml后，静置5-8min。,6,4.低渗,将样品1000 rpm离心5min，弃上清液；收集的细胞沉淀在低渗液（0.075 M Kcl），充分吹打使沉淀均匀分散，加低渗液至10ml，低渗30-40 min；低渗过程中每隔5分钟轻轻吹打溶液，使其充分低渗。 此时细胞体积膨大，处于一个极其容易破裂的状态。,7,5.固定,低渗后将样品1000 rpm离心5min，收集沉淀；加入甲醇和冰醋酸(3:1)混合液，轻轻吹打样品沉淀，使其充分散开；加入固定液至5ml，并静置15分钟 ，使其充分固定；样品再离心、再固定，重复1次后，样品可长期保存（4）。,
