《5[1].3血红蛋白的提取和分离 课件(人教版选修一)》由会员分享,可在线阅读,更多相关《5[1].3血红蛋白的提取和分离 课件(人教版选修一)(16页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、课题 3,血红蛋白的提取和分离,关于血红蛋白的提取和分离的基础知识,1凝胶色谱法,分配色谱法,相对分子质量的大小,凝 胶 色 谱 法 也 称 作 _ , 是 根 据 _分离蛋白质的有效方法。,2缓冲溶液,酸,碱,12 种缓冲剂,水,使用比例,(1) 缓冲溶 液的作用: 在一定范围 内能够抵御 _ 和 _对溶液 pH 值的影响。 (2) 配制:缓冲溶液通常由 _溶解于 _中配制而成的。调节缓冲剂的_就可 以得到不同 pH 值范围内的缓冲液。,3电泳,琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳,(1) 概 念: 电泳是指 _ 在 电场 的作 用下 发生 的,_过程。,带电粒子,迁移,(2) 两 种 常 用
2、 的 电 泳 方 法 是 _ 和 _,在测定蛋白质分子量时通常使用 _。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中 的迁移率取决于它所带_的多少以及_等因 素。,净电荷,分子的大小,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,血红蛋白的提取和分离的实验 1流程:蛋白质的提取和分离一般分为四步:_、,粗分离、_和纯度鉴定。,纯化,2样品处理: (1)红细胞的洗涤:目的是_,以利于后续步,骤分离纯化。,去除杂蛋白,甲苯,血红蛋白的水溶液,(2)血红蛋白的释放:在蒸馏水和_的作用下,红细 胞破裂释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液:将混合液离心后,试管中的溶液分 为 4 层,第 3 层是红色透明液体,这是_。,样品处理,3粗分离:
3、透析可以去除样品中_ 的杂质,或用于更换样品的_。,4纯化:凝胶色谱操作。,分子量较小,缓冲液,凝胶色谱法分离蛋白质的原理,DNA 与血红蛋白的提取和分离的实验过程比较,血红蛋白的提取与分离 【例 1】选用哺乳动物红细胞作分离蛋白质的实验材料,,有何好处(,),A红细胞无细胞核 B红细胞无细胞膜 C红细胞蛋白质含量高 D红细胞 DNA 含量高 【名师点拨】:哺乳动物的红细胞没有细胞核,提取时杂质 较少,能得到更纯净的血红蛋白。 【答案】:A,【配对练习 1】洗涤红细胞时,分离所用方法为(,),A低速长时间离心 B低速短时间离心 C高速长时间离心 D高速短时间离心 解析:洗涤红细胞时,分离所用方
4、法为低速短时间离心。 答案:B,用疑胶色谱法分离蛋白质 【例 2】用凝胶色谱法分离蛋白质时,分子量大的蛋白质,(,) A路程较长,移动速度较慢 B路程较长,移动速度较快 C路程较短,移动速度较慢 D路程较短,移动速度较快,【名师点拨】:在凝胶小球体内部有许多贯穿的通道,当相 对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋 白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢;而 相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在 凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。,【答案】:D,【配对练习 2】凝胶色谱柱分离法分离蛋白质时,凝胶的,种类较多,但其作用的共同点是(,),A改变蛋白质
5、分子通过凝胶时的路径 B吸附一部分蛋白质,从而影响蛋白质分子的移动速度 C将酶或细胞固定在凝胶中 D与蛋白质分子进行化学反应,从而影响其移动速度 解析:凝胶的种类较多,但每一种凝胶内部都有空隙,相 对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋 白质经过的路径比相对分子质量较大的蛋白质经过的路径要 长,由此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。 答案:A,聚丙烯酰胺凝胶电泳法 【例 3】用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取血清蛋白,的实验操作中,错误的是(,),A点样时将样品小心加到电泳样品槽的胶面上 B电泳时,将稳压稳流电泳仪的电流稳定在 10 mA C染色时用 0.05%考马斯亮蓝 R2
6、50 染色液 D脱色用 7%乙酸浸泡漂洗数次,直至蓝色背景褪去,【名师点拨】:用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取蛋白 质的实验操作顺序为点样电泳染色脱色制干胶板。点 样用微量注射器取 0.5 L 样品小心地将样品加在样品槽的胶面 上。电泳时打开电泳仪开关,电流调在 10 mA,待样品进入分 离胶时将电流调至 2030 mA。溴酚蓝到达分离胶底部上方约 1 cm 处,关闭电源。,【答案】:B,【配对练习 3】SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入 SDS 的,作用是(,),A增大蛋白质的相对分子质量 B改变蛋白质的形状 C掩盖不同种蛋白质的电荷差别 D减少蛋白质的相对分子量 解析:SDS 可以消除净电荷对迁移率的影响。 答案:C,