《5[1].3血红蛋白的提取和分离 课件(人教版选修一)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《5[1].3血红蛋白的提取和分离 课件(人教版选修一)（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、课题 3,血红蛋白的提取和分离,关于血红蛋白的提取和分离的基础知识,1凝胶色谱法,分配色谱法,相对分子质量的大小,凝 胶 色 谱 法 也 称 作 _ ， 是 根 据 _分离蛋白质的有效方法。,2缓冲溶液,酸,碱,12 种缓冲剂,水,使用比例,(1) 缓冲溶 液的作用： 在一定范围 内能够抵御 _ 和 _对溶液 pH 值的影响。 (2) 配制：缓冲溶液通常由 _溶解于 _中配制而成的。调节缓冲剂的_就可 以得到不同 pH 值范围内的缓冲液。,3电泳,琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳,(1) 概 念： 电泳是指 _ 在 电场 的作 用下 发生 的,_过程。,带电粒子,迁移,(2) 两 种 常 用
2、 的 电 泳 方 法 是 _ 和 _，在测定蛋白质分子量时通常使用 _。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中 的迁移率取决于它所带_的多少以及_等因 素。,净电荷,分子的大小,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,血红蛋白的提取和分离的实验 1流程：蛋白质的提取和分离一般分为四步：_、,粗分离、_和纯度鉴定。,纯化,2样品处理： (1)红细胞的洗涤：目的是_，以利于后续步,骤分离纯化。,去除杂蛋白,甲苯,血红蛋白的水溶液,(2)血红蛋白的释放：在蒸馏水和_的作用下，红细 胞破裂释放出血红蛋白。 (3)分离血红蛋白溶液：将混合液离心后，试管中的溶液分 为 4 层，第 3 层是红色透明液体，这是_。,样品处理,3粗分离：
3、透析可以去除样品中_ 的杂质，或用于更换样品的_。,4纯化：凝胶色谱操作。,分子量较小,缓冲液,凝胶色谱法分离蛋白质的原理,DNA 与血红蛋白的提取和分离的实验过程比较,血红蛋白的提取与分离 【例 1】选用哺乳动物红细胞作分离蛋白质的实验材料，,有何好处(,),A红细胞无细胞核 B红细胞无细胞膜 C红细胞蛋白质含量高 D红细胞 DNA 含量高 【名师点拨】：哺乳动物的红细胞没有细胞核，提取时杂质 较少，能得到更纯净的血红蛋白。 【答案】：A,【配对练习 1】洗涤红细胞时，分离所用方法为(,),A低速长时间离心 B低速短时间离心 C高速长时间离心 D高速短时间离心 解析：洗涤红细胞时，分离所用方
4、法为低速短时间离心。 答案：B,用疑胶色谱法分离蛋白质 【例 2】用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质,(,) A路程较长，移动速度较慢 B路程较长，移动速度较快 C路程较短，移动速度较慢 D路程较短，移动速度较快,【名师点拨】：在凝胶小球体内部有许多贯穿的通道，当相 对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋 白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而 相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。,【答案】：D,【配对练习 2】凝胶色谱柱分离法分离蛋白质时，凝胶的,种类较多，但其作用的共同点是(,),A改变蛋白质
5、分子通过凝胶时的路径 B吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C将酶或细胞固定在凝胶中 D与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度 解析：凝胶的种类较多，但每一种凝胶内部都有空隙，相 对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋 白质经过的路径比相对分子质量较大的蛋白质经过的路径要 长，由此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。 答案：A,聚丙烯酰胺凝胶电泳法 【例 3】用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取血清蛋白,的实验操作中，错误的是(,),A点样时将样品小心加到电泳样品槽的胶面上 B电泳时，将稳压稳流电泳仪的电流稳定在 10 mA C染色时用 0.05%考马斯亮蓝 R2
6、50 染色液 D脱色用 7%乙酸浸泡漂洗数次，直至蓝色背景褪去,【名师点拨】：用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离和提取蛋白 质的实验操作顺序为点样电泳染色脱色制干胶板。点 样用微量注射器取 0.5 L 样品小心地将样品加在样品槽的胶面 上。电泳时打开电泳仪开关，电流调在 10 mA，待样品进入分 离胶时将电流调至 2030 mA。溴酚蓝到达分离胶底部上方约 1 cm 处，关闭电源。,【答案】：B,【配对练习 3】SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法加入 SDS 的,作用是(,),A增大蛋白质的相对分子质量 B改变蛋白质的形状 C掩盖不同种蛋白质的电荷差别 D减少蛋白质的相对分子量 解析：SDS 可以消除净电荷对迁移率的影响。 答案：C,
