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1、勿忘草的组培快繁技术学生：张骏坤 指导教师：杨保明 黄玉玲摘要：以勿忘草为外植体进行组培快速繁殖，选用 MS 培养基为基本培养基，添加不同浓度的 6-BA 和 NAA，接种后进行对比试验。选择出勿忘草组培的增殖培养基以及最佳生根培养基。关键词： 勿忘草 组织培养 快速繁殖勿忘草，别名勿忘我，紫草科，勿忘草属，多年生草本；原产欧亚大陆，多年生草本植物，叶互生，狭倒披针形或条状倒披针形；喜阳，能耐阴，易自播繁殖。昆明市是一个气候宜人四季如春的城市，其气候对于花卉产业有着先天的优势，在经济的发展中花卉产业也在 80 年代末期随之崛起，在 20 年的过成中已经发展到相当的水平，以有大规模的生产，创造了
2、不小的经济价值，但生产技术上在世界处于落后的水平。在种苗的培植方式上多依赖于扦插、播种等方式。用这些方法育苗已经不能满足现今市场对勿忘草种苗的需求，随着组织培养技术的应用推广，组织培养种苗也进入市场，并有着较好的发展前景，组织培养可以得到无病毒的苗，并且繁殖速度快，可短时间内获得大量种苗。在此对勿忘草的繁殖技术进行实验研究，本实验通过对勿忘草的组培寻找对勿忘草的最佳培养基，培养得到大量的无菌组培苗。1 材料与方法1.1 试验材料已经培养分化出芽的无菌勿忘草组培苗，由云南省农业科学院环境资源所组培室提供。1.2 培养基配制采用 MS 培养基做为基本培养基，和附加不同浓度的蔗糖、6-BA、NAA、
3、琼脂。待培养基煮沸后将 PH 调为 5.8 后注入容器中，封好盖后放入高压灭菌锅内灭菌 20 分钟。 1-3继代培养基：蔗糖为 30g/L,琼脂 5g/L。(1)MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L;(2) MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.5mg/L; (3)MS+6-BA0.6mg/L+NAA0.5mg/L; (4) MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L; (5)MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L。生根培养基：蔗糖为 30g/L,琼脂 5g/L。(6)MS+NAA0.2mg/L; (7)MS+NAA0.4mg/L; (8) MS +NAA0
4、.6mg/L; (9) MS +NAA0.8mg/L;。1.3 组培苗接种将准备的勿忘草瓶苗在洁净台内分单株，后接种于实验用的培养基。分苗时应将基部的老化组织切去，并且切单而不是丛芽，以免影响实验效果。1.4 培养条件将接种了组培苗的培养瓶置于光照培养室内，室温 25左右，高低幅度为2。光照度为 20000Lx（变化幅度我 10005000Lx） ，每天光照时间为 12 小时，继代培养 20 天后进行生根培养。 41.5 观察记录在组织培养的不同时期观察记录苗的单丛率、发育情况、幼苗长势及生根情况。2 结果与分析2.1 不同培养基对苗的继代培养的影响勿忘草的重生直接影响着后期花的产量和品质，所
5、以在做组培时不仅要考虑苗的长势，还要考虑它的单株率。继代培养中苗越单越有利于生根培养，生根培养出的苗才会单不重生，有利于提高花的产量和品质。由表 1 可以看出，5 种不同配比的培养基下继代培养，幼苗的分化结果有很大不同。 （1）处理的单株率最好，其次是（3） （4）处理的；从分化情况来看，（3）处理的分化情况比较好，增殖系数较高，其次是（2） （4）处理的， （1）（3）处理分化较差。 （1）处理的单株率之所以比较好是因为它分化的苗较少，从而显得比较单。综合苗的单株率、生长状况及幼苗的分化情况来看， （3）处理的培养基继代培养效果最好，分化出的苗较多，单株率及生长状况也较好。与其他的比较（1）
6、 （5）处理的结果不理想，分化的苗较少达不到增殖的效果。表 1 不同培养基处理下对苗的继代培养的影响处理编号 培养基 单株率 生长状况 幼苗的分化情况（1） MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L 较好 较好 20 天均分化 12 苗（2） MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.5mg/L 一般 好 20 天均分化 34 苗 （3） MS+6-BA0.6mg/L+NAA0.5mg/L 好 好 20 天均分化 46 苗（4） MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L 好 一般 20 天均分化 34 苗（5） MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L 一般 差 2
7、0 天均分化 13 苗2.2 不同培养基对苗的生根培养的影响由表 2 可知，在 4 钟不同的生根培养基中生根效果有明显的差异性。处理（9）的生根效果最好，13 天就有根生成 20 天均生根 2-4 条。随着培养基中NAA 浓度的降低，生根效果逐渐变差，在培养基(6)MS+NAA0.2mg/L 处理中 20 天还不能生根或是已经不能生根。表 2 不同培养基处理下对苗的生根培养的影响处理编号 培养基 生根效果（6） MS+NAA0.2mg/L 20 天无生根（7） MS+NAA0.4mg/L 20 天均生根 1-3 条（8） MS+NAA0.6mg/L 20 天均生根 2-4 条（9） MS+NA
8、A0.8mg/L 13 天就有根生成，20 天均生根 2-4 条3 结论与讨论激素浓度、种类及不同的配比组合对植物的诱导分化起着重要作用。本试验选用的 6-BA 为细胞分裂素，NAA 为生长素类物质，各有不同的作用和特点。生长素的添加量低的时候，愈伤组织生长缓慢；浓度过高时，生长受到抑制。生长素与细胞分裂素的协同调控作用在植物组织培养中起着重要的作用，即“激素杠杆” 。生长素的生物学高于细胞分裂素时，诱导植物组织脱分化和根的形成；细胞分裂素的效应高于生长素时，诱导植物组织再分化和芽原基的形成。 5 因此，在实际应用时一定要注意激素的使用浓度。在本试验中勿忘草的最佳增殖培养基是（3）MS+6-B
9、A0.6mg/L+NAA0.5mg/L，细胞分裂素的效应高于生长素的效应，这样有利于细胞的分裂和芽的分化。但激素的浓度过高时植物的生长会受到抑制或导致植物死亡，如：培养基（4） （5） 。降低 6-BA 的浓度导致芽不分化或分化较弱，如：（1） （2）处理。生根试验中随着 NAA 浓度的增加生根的条数增加， （9）MS+0.8mgNAA/L 为勿忘草的最佳生根培养基配方。致谢 本人在毕业实习及论文撰写过程中得到了，农科院环境资源所杨保明和黄玉玲老师的精心指导，以及李炜、周星宇、王振宇、刘燕华、孔银梅同学的帮助。在此一并表示衷心的感谢！参考文献 1 汪一婷. 工厂化组培苗的污染及控制研究 J . 安徽农业科学，2005，33（12）：23572358. 2 邓小梅. 植物组织培养过程中污染现象的研究进展 J . 江西林业科技，2006， （1）：1112. 3 刘进平，莫饶. 热带植物组织培养 M . 科学出版社，4257 . 4 巩振辉，申书兴. 植物组织培养 M . 化学工业出版社. 4550. 5 王小青，李玲. 植物生长调节剂在植物组织培养中的应用 M . 化学工业出版社. 42.
