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1、第一章 微生物基本概念【思考题】1从形态结构、培养特性和致病性上，比较原核细胞型微生物、真核细型微生物和非细胞型微生物的主要区别。（1）形态结构：原核细胞型微生物如细菌，只有原始核，由裸露的环状双链DNA构成，无核膜和核仁，细胞器很不完善，只有核糖体。真核细胞型微生物如真菌，细胞核分化程度高，有核膜和核仁，细胞器分化明显。非细胞型微生物如病毒，无典型的细胞结构，只能在活的易感细胞内生长繁殖。只有一种类型核酸（为DNA或RNA）。（2）培养特性：细菌和真菌能在人工合成培养基上生长，病毒不能在无生命培养基上生长，需采用鸡胚接种、动物接种和细胞培养方法培养。（3）致病性：细菌主要依靠侵袭力和内、外毒
2、素致病。病毒可直接杀死宿主细胞，但主要是通过免疫病理损伤致病。第二章 细菌的形态与结构【思考题】1试比较革兰阳性菌和阴性菌细胞壁结构上的差异及其在致病性、抗原性、染色性和药物敏感性的意义。革兰阳性菌细胞壁由肽聚糖和穿插其中的磷壁酸组成，特点是肽聚糖含量高，结构致密，为三维立体网状结构。革兰阴性菌细胞壁中肽聚糖含量少，结构疏松，但具有由脂蛋白、脂质双层和脂多糖构成的外膜。（1）致病性：脂多糖由脂质A、核心多糖和O特异性多糖所构成，是细菌内毒素的主要成分。革兰阴性菌主要靠内毒素致病，而革兰阳性菌无内毒素，主要靠外毒素致病。（2）抗原性：磷壁酸是革兰阳性菌特有的成分，是重要的表面抗原。（3）药物敏感
3、性：革兰阴性菌脂质双层上镶嵌有孔蛋白，可阻止一些抗菌药物如青霉素的进入，故绝大多数革兰阴性菌对青霉素不敏感，而大多数革兰阳性菌对青霉素敏感。（4）染色性：脱色时，革兰阳性菌肽聚糖结构更加致密，结晶紫不被脱出体外，菌体呈紫色。革兰阴性菌细胞壁主要成分是外膜，含大量脂质，可溶于乙醇，结构更为疏松，结晶紫易被脱出菌体外，故菌体最终呈红色。2细菌的特殊结构有哪些？各有何主要功能及医学意义？细菌特殊结构主要包括荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞。（1）荚膜：具有抗吞噬作用，并参与细菌生物被膜的形成，与细菌的致病性有关。（2）鞭毛：细菌的运动器官，有利于细菌主动地趋向高浓度营养物质和逃避有害环境，与某些细菌的致病性有
4、关。可用于鉴定细菌。（3）菌毛：普通菌毛具有黏附能力，与细菌致病性有关；性菌毛可传递遗传物质，与细菌的毒力或耐药性转移等有关。（4）芽胞：对热、干燥、化学消毒剂、辐射等抵抗力极强，是细菌在不利环境下形成的休眠细胞，在适宜条件下可迅速发芽转化为繁殖体，应以杀灭细菌芽胞作为判断灭菌效果的指标。芽胞的形状、大小、位置等可用于鉴别细菌。3细菌L型是怎样形成的？有何特点和临床意义？细菌型是细胞壁缺陷型细菌。少数自发产生型，多数诱导产生型，主要诱导剂有溶菌酶和作用于细菌细胞壁的抗生素如青霉素。细菌型因缺乏完整的细胞壁，不能维持其固有的形态，呈现高度多形性，大多为革兰染色阴性。在高渗、低琼脂、含血清的培养基
5、中能缓慢生长，27天后形成“油煎蛋”状细小菌落。去除抑制物后，型细菌可返祖而恢复成原来形态的细菌。型本身可能不致病，其致病性与回复有关。此外，有些型亦有一定的致病性，并可引起免疫病理损伤。因此，细菌型与许多慢性反复发作的感染有关，在临床上可引起尿路感染、骨髓炎、心内膜炎等，并常在作用于细胞壁的抗生素治疗后发生，易复发。在临床上遇到症状明显而标本细菌分离培养为阴性者，应考虑型感染的可能性。4试述革兰染色法的步骤、结果判定和医学意义。革兰染色法是最常用、最重要的染色法，其步骤是：在细菌涂片固定后，先用结晶紫初染、芦戈碘液媒染、95%乙醇脱色，再用稀释复红或沙黄复染。菌体最终呈紫色者为革兰阳性菌，染
6、成红色者为革兰阴性菌。革兰染色法在鉴别细菌、指导临床选用抗菌药物、了解细菌致病性等方面具有极其重要的意义。第三章 细菌的生理【思考题】1细菌分离培养和生化反应在感染性疾病诊断中有何意义？为什么？（1）感染性疾病的病原学诊断：由细菌引起的感染性疾病，最确切、最可靠的诊断依据（“金标准”）是，从患者标本中将病原菌分离培养出来，并鉴定其菌属、种和型。细菌的生化反应对菌体形态、革兰染色反应和菌落特征相同和相似的细菌的鉴定尤为重要。细菌药物敏感试验能指导临床选用抗菌药物治疗。（2）生物制品的制备：制备疫苗、类毒素、抗毒素等用于防治，制备菌液、抗血清等用于诊断。2根据培养基的性质与用途，可将培养基分为几类
7、？培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。按营养组成和用途，可分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基等；按物理性状分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基三大类。其中，平板固体培养基用作纯种细菌的分离；斜面固体培养基用于菌种的保存；液体培养基主要用于细菌的增菌；半固体培养基主要用于检查细菌的动力，即有无鞭毛。第四章 消毒与灭菌【思考题】1在防治疾病过程中，为什么强调医务人员一定要树立无菌观念和严格执行无菌操作？从预防感染出发，医务工作者必须建立“处处有菌”和无菌观念，严格执行无菌操作，这就要求必须对所用的物品（如注射器、手术器械、手术衣等）、工作环境（如无菌操
8、作室、手术室、产房等）和人体体表进行灭菌或消毒，以确保所用的物品和工作环境的无菌或处于无菌状态。为防止疾病的传播，对传染病患者的排泄物和实验废弃的培养物亦须进行灭菌或消毒处理。2简述湿热灭菌法的杀菌机制和各种湿热灭菌法的特点和用途。热力灭菌的杀菌机制主要是，促使菌体蛋白质（酶）变性和凝固，失去生物活性而死亡。（1）巴氏消毒法：72 1530s，可杀灭液体中的病原微生物或特定微生物，用于牛奶和酒类等不耐高温物品的消毒。（2）煮沸法：100 5min，常用于饮水、食具、注射器等消毒。（3）间歇灭菌法：100水蒸汽1530 min，取出后置37培养过夜，次日再加热一次，如此连续3d，可达到灭菌目的，
9、用于不耐高温的含糖、牛奶或血清等培养基灭菌。（4）高压蒸汽灭菌法：在一定蒸汽压下，水蒸汽温度达到1213，维持1520 min，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。这是最有效和最常用的灭菌方法，常用于一般培养基、生理盐水、手术器械等耐高温、耐湿物品的灭菌。3简述化学消毒剂的分类与常用化学消毒剂的主要用途。（1）使菌体蛋白质变性或凝固：红汞（皮肤黏膜、小创伤）、乙醇（皮肤、温度计）、重金属盐类如高锰酸钾（尿道、阴道冲洗）、甲醛（浸泡尸体）等。（2）破坏细菌的酶系统：双氧水（外耳道、口腔冲洗）、碘液（皮肤）、氯（饮用水）等。（3）改变细菌细胞壁或细胞膜的通透性：新洁尔灭（洗手）、肥皂（洗手）、醋酸
10、（空气消毒）。第五章 噬菌体【思考题】1试述噬菌体感染细菌的可能结局。噬菌体侵入宿主菌后有两种结局：一是能在宿主细胞内复制增殖，产生子代噬菌体，并最终裂解细菌，释放出大量的子代噬菌体，这类噬菌体称为毒性噬菌体；二是噬菌体核酸整合到宿主菌染色体基因组中，随细菌DNA复制而复制，随细菌的分裂而传代，不产生子代噬菌体，也不引起细菌裂解，即为溶原状态，这类噬菌体称为温和噬菌体或溶原性噬菌体。2为什么质粒、噬菌体和转座子可作为基因工程的重要载体？噬菌体基因数量少，结构简单，容易获得大量的突变体，已成为分子生物学研究的重要工具。例如，利用噬菌体作为载体，构建基因文库；利用噬菌体展示技术，可将外源目的基因插
11、入到噬菌体衣壳蛋白基因中，以融合蛋白形式表达在噬菌体表面，从而简化抗体库和单克隆抗体的筛选过程。第六章 细菌的遗传与变异【思考题】1试述细菌的生物学性状变异及其在医学实践中的意义。（1）耐药性突变：耐药菌产生、选择标记。（2）毒力突变：减毒活疫苗研制、新现传染病的产生。（3）营养缺陷体突变：新药诱变作用检测。（4）高产突变：抗生素等药品、食品生产。（5）抗原性突变：逃逸免疫机制。2什么是质粒？质粒DNA有哪些主要特征？质粒是细菌染色体外的遗传物质，大多由闭合环状双链DNA组成。质粒DNA的特征：具有自我复制的能力；所携带的基因往往赋予宿主菌新的生物学性状（如F质粒、R质粒、毒性质粒、代谢质粒）
12、，增加细菌在不利环境下的存活机会；非生命活动所必需，可自行丢失或消除；可在细菌之间转移。3试述抗菌药物的作用机制和主要种类。临床应用的抗菌药物包括抗生素和化学合成抗菌药物。抗菌药物的作用机制主要有：（1）抑制细胞壁的合成：主要有：-内酰胺类如青霉素类、头孢菌素类等；糖肽类如万古霉素。（2）干扰细菌核糖体的功能，抑制蛋白质的合成：主要有：氨基糖苷类如链霉素；四环素类如四环素、多西环素；大环内酯类如红霉素。（3）抑制核酸的合成：主要有：喹诺酮类如环丙沙星，可抑制DNA聚合酶，干扰DNA复制；利福霉素类如利福平，抑制DNA依赖的RNA聚合酶，干扰mRNA的合成；磺胺类药物如磺胺甲噁唑，竞争抑制核酸前
13、体物质的合成。（4）影响细胞膜的功能：多黏菌素作用于革兰阴性杆菌的磷脂，使细胞膜受损，细胞质内容物漏出，引起细菌死亡。4试述细菌产生耐药性的生化机制和遗传机制，并举例说明。如何防止细菌耐药性的产生和扩散？（1）耐药的生化机制：灭活作用：这是细菌产生耐药性的最重要方式。细菌被诱导产生灭活酶，通过修饰或水解作用破坏抗生素，使之失去活性；靶位改变：通过产生诱导酶对抗生素的作用靶位进行化学修饰，或通过基因突变造成靶位变异，使抗菌药物不能与靶位结合，失去杀菌作用；药物累积不足：通过减少药物吸收或增加药物排出，使菌体内的抗生素浓度明显降低，不足以杀死细菌。（2）耐药的遗传机制：基因突变：由突变产生的耐药性
14、一般只对一种或两种相类似的药物耐药，且比较稳定，突变频率较低；R质粒接合转移：细菌的耐药性质粒（R质粒）可携带一种或多种耐药基因，主要通过接合方式在相同或不同种属细菌之间转移，造成耐药性的广泛传播；转座：当转座子或整合子插入某一基因时，可因带入耐药基因而使细菌产生耐药性，并与多重耐药性的产生密切相关。此外，还有转化和转导等方式。为了提高抗菌药物的疗效，防止耐药菌株的出现和扩散，应合理、科学地使用抗菌药物。在使用抗生素前，除危重患者外，应根据细菌药物敏感试验结果，选用敏感的药物。联合用药必须有明确的指征，如病原体不明或单一抗菌药物不能控制的严重感染或混合感染。剂量要足，疗程要尽量缩短。5试述细菌
15、遗传物质的主要种类及其特点。（1）细菌染色体：为一条环状双链DNA，含核蛋白，但缺乏组蛋白，无核膜包围。有4000多个基因，遗传信息是连续的，无内含子，功能相关的基因组成操纵子结构。 （2）质粒：是染色体外的遗传物质，为环状闭合的双链DNA。 （3）转座元件：是存在于细菌染色体或质粒上的特异性DNA片段，可在质粒与质粒之间或质粒与染色体之间随机转移。转座元件主要有插入序列和转座子。其中，转座子不能独立复制，必须依附在染色体或质粒上与之同时复制。在结构上分为中心序列和二个末端反向重复序列。中心序列带有遗传信息，如常带有一种或多种耐药基因。（4）整合子：是可移动的基因元件，由5端保守序列、中间的可变序列和3端保守序列组成，具有启动子、整合酶基因和位点特异性的重组表达系统，可识别和捕获外源基因和基因盒，尤其是抗生素耐药基因。6试述微生物基因组序列测定的意义。（1）研究病原微生物的致病机制及其与宿主的相互关系：阐明病原微生物致病基因及其产物对于了解其致病机制至关重要。根据病原微生物的全基因序列，应用现代生物信息软件对基因序列进行分析，可以确定哪些基因与毒力有关，为研究细菌的致病性和毒力因子提供了有效的途径。（2）寻找更灵敏及特异的微生物分子标记，作为诊断、分型等依据：通过测定多种致病与非致病微生物的基因组序
