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1、ELISA检测中 造成结果偏差的原因分析,酶免疫技术 酶免疫组织化学技术：抗原定位检测 酶免疫测定技术：均相（液相） 非均相（固相）,固相酶免疫测定 Enzyme linked immunosorbent assay 原理：将待测抗原或抗体通过吸附或特异性抗体或抗原的捕捉使其固定于固相支持物表面，再用酶标抗体或抗原的酶在液相中催化底物显色，来测定待测抗原或抗体的含量,ELISA检测的技术要点 试剂是前提 操作是关键 质量控制是保证,ELISA检测的操作特点 1. 多反应、多试剂、多步骤 2. 严格按操作说明仔细操作 3. 基本步骤：加样、温育、洗涤、比色,ELISA检测中出现假阳性的常见原因
2、1. 标本分离不完全 2. 标本严重溶血或脂血 3. 加样时间过长 4. 样品与稀释液未充分混匀 5. 酶标抗体（抗原）吸附于孔壁或表面,6. 反应与显色时未加盖封口膜 7. 温育时间（反应时间、显色时间）过长或 温度过高 8. 洗涤液污染或洗涤不彻底 9. 工作环境温度过高 *全自动酶免检测仪HBsAg 特异性从87%提高到91%,ELISA检测中出现假阴性的原因分析 1. 试剂未平衡至室温 2. 加样的量不足或样品过度稀释 3. 加样时有气泡 4. 抗原、抗体反应时间或显色时间不够 5. 过度洗涤 6. 环境温度过低 7. 试剂盒过期 *全自动酶免检测仪HBsAg 灵敏度从92%提高到93
3、%,乙肝标志物的检测,ELISA检测,CLIA检测,MEIA检测,定性,半定量/定量,半定量/定量,定性/半定量/定量,定性测定常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果 半定量测定虽介于定性和定量之间， 严格意义上来说， 其仍属于定性测定， 只不过其对定性测定中的“阳性”作了进一步的分级， 即所谓的强阳性阳性弱阳性的区别 定量测定的结果则以浓度（ 如IU/L、ug/L等）的方式表达。,ELISA检测的结果报告定性,检 测 类 型,结 果 报 告,HBsAg双抗体夹心法,正比,HBsAb双抗原夹心法,HBeAg双抗体夹心法,HBeAb竞争法,HBcAb竞争法,正比,正比,反比,反比
4、,Cutoff,阴性 阳性,MEIA检测的结果报告半定量/定量,检 测 类 型,MEIA结果报告,HBsAg双抗体夹心法,HBsAb双抗原夹心法,HBeAg双抗体夹心法,HBeAb竞争法,HBcAb竞争法,MEIA正常参考,2 S/N,1 S/CO,S/N = Sample Rate/ Index Calibrator Mean Rate,using the calibration curve 01000 mIU/ml,S/CO = Sample Rate/ Index Calibrator Mean Rate,S/CO = Sample Rate/ (Index Calibrator Mea
5、n Rate/2.5),S/CO = Sample Rate/ (Index Calibrator Mean Rate/2),CLIA检测的结果报告半定量/定量,检 测 类 型,CLIA结果报告,HBsAg双抗体夹心法,HBsAb双抗原夹心法,HBeAg双抗体夹心法,HBeAb竞争法,HBcAb间接法,CLIA正常参考,0.05 IU/ml,1 S/CO,1 S/CO,1 S/CO,using the calibration curve 0250 IU/ml,using the calibration curve 01000 mIU/ml,S/CO = Sample Rate/ Index C
6、alibrator Mean Rate,S/CO = Sample Rate/ (Index Calibrator Mean Rate/2.5),S/CO = Sample Rate/ (Index Calibrator Mean Rate/2),结果的报告,认真阅读试剂盒说明书， 按照其要求报告结果 如出现临界结果， 应明确是否需对患者进一步追踪观察（建议随访） 清楚说明结果对特定疾病诊断意义（ 可能性高或不可能） 和/ 或需进一步检测（建议检测：） 如果已在进行进一步的检测， 应在报告中予以说明（此结果已复查）,结果的解释,结果解释的责任属于临床实验室，应根据所检测的人群解释结果 临床解释的责任属于临床医生，其应根据临床信息解释结果 临床实验室与临床医生的对话对适当利用实验室数据非常重要,谢 谢 ！,
