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1、DB15内蒙古自治区地方标准DB 15/T xxxx 羊人工授精及同期发情技术操作规程发布实施内蒙古自治区市场监督管理局发布1 前言本标准由乌兰察布市农牧局和乌兰察布市场监督管理局提出。本标准归口内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）本标准起草单位：乌兰察布市家畜改良工作站、内蒙古赛诺种羊科技有限公司、内蒙古杜蒙肉羊育种科技有限公司。本标准主要起草人：张勇、陈大勇、孙晓红、罗康石、闫鑫鹏、周宁聪、李红光、张立果、刘剑锋、吴凯龙、田文亮、马云慧、萨仁格日勒。9羊人工授精及同期发情技术操作规程1 范围本规程规定了内蒙古地区羊人工授精和同期发情各环节操作中应遵循的技术标准。 本规程适
2、用于内蒙古地区内规模化养殖场、专业合作社、家庭牧场、羊人工授精站开展羊人工授精和同期发情配种。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。3 术语和定义 下列术语和定义适用于本规程。3.1 人工授精Artificial insenmination 利用器械用人工方法采集公羊的精液，经检查、稀释、保存等特定方法处理后，用器械输入到发情母羊生殖道的特定部位，使其妊娠的一种家畜繁殖技术。3.2 种公羊Breeding ram 取得种畜禽生产经营许可证的种羊场所生产，具备
3、种畜禽合格证、动物检疫合格证和三代系谱齐全的纯种公羊。用于人工授精配种的种公羊必须是一级以上。3.3 同期发情Estrus synchronization对群体母羊采取外源激素处理，使其发情相对集中在一定时间范围内的技术。3.4 活力Sperm motility直线运动的精子数占总精子数的百分率。一般采用十级评分制，如果90 %的精子呈直线运动的，评为0.9级，80 %的精子呈直线运动的，则为0.8级，以此类推。3.5 密度Semen density每毫升精液中所含的精子数。采用目测法时，镜检观察多个视野内的精子数量，精子之间距离小于一个精子长度的评为“密”，距离相当于一个精子长度的为“中”，
4、大于一个精子长度的为“稀”。每毫升精液中精子数在25亿以上者为密，2025亿为中，低于20亿的为稀。4 配种前的准备4.1 做好土杂劣质公羊的清群去势。4.2 做好试情公羊的选留和补饲工作。4.3 做好待配母羊的组群试情和饲养管理工作。4.4 对配种站室内外环境用0.1%新洁尔灭或0.2%高锰酸钾溶液喷洒消毒，并做好记录。4.5 配制所需各种试剂，建立健全配种记录和技术档案。5 人工授精5.1 器械、用具的洗涤和消毒 5.1.1 新购入的用具、器械，要先将表面擦净，用2%3%碳酸钠溶液（或中性洗涤剂）清洗后，再用温水冲洗几次，擦干或晾干备用。 5.1.2 金属和玻璃器械等接触精液的器具用高压灭
5、菌消毒或蒸汽消毒，使用前用生理盐水冲洗。5.1.3 假阴道用加入洗涤剂的温水清洗后，再用温水冲洗几次,使用前6h用75%酒精棉球擦洗，放消毒柜内备用，不能有酒精残留。5.1.4 凡士林应每天带瓶隔水煮沸消毒20min或用高压灭菌消毒。 5.1.5 工作服、纱布、毛巾等要经常清洗，保持清洁，并用蒸汽法或煮沸法进行消毒。 5.2 精液采集定点、定时、定人，使公羊建立良好的条件反射。5.2.1 采精前的准备5.2.1.1 环境采精室保持空气清洁、安静。5.2.1.2 台羊将发情母羊保定在采精架上，将后躯清扫干净。5.2.1.3 种公羊准备配种前提前进行调教和训练采精。采精时将公羊牵入采精室，清洁生殖
6、部位，接近母羊但不让其爬跨，以刺激其性欲。5.2.1.4 假阴道 安装假阴道，清洗消毒备用。采精时检查内胎松紧度，装好集精瓶，从假阴道注水口注入5055的温水150ml左右，安装调节钮，在内胎的前1/3处涂抹少许灭菌后的医用凡士林，吹气关闭调节钮，使内胎表面呈三叉形。5.2.1.5 温度要求采精室要求1820，操作室温度要求2025。5.2.2 采精5.2.2.1 温度以3842为宜。5.2.2.2 采精 采精者蹲在台羊后方一侧，用手横握假阴道，调节扭活塞向里，假阴道前低后高，与母羊骨盆的水平线呈35 40 ，紧靠台羊臀部。当公羊爬跨、伸出阴茎时，迅速用另一只手托住阴茎包皮，将阴茎导入假阴道内
7、。当公羊猛力前冲，并弓腰后，即完成射精。随着公羊从台羊身上滑下，顺势将假阴道向下向后移动取下，并立即倒转竖立，使集精瓶一端向下，然后打开调节扭放气，取下集精瓶，盖上瓶盖送操作室检查。 5.2.2.3 采精频率在配种期间，成年种公羊每天可采精12次，连采3d5d，休息1d。必要时，一天可采精34次，不可连续使用高频率采精，育成公羊酌情减少采精次数。5.3 精液品质检查5.3.1 外观检查5.3.1.1 色泽和气味呈乳白或浅黄色，肉眼可见云雾状运动，无味或略带腥味。凡带有腐败臭味，出现红色、褐色、绿色的原精，不可使用。5.3.1.2 射精量一次射精量山羊平均0.5ml1.5ml，绵羊0.5ml2.
8、0ml。5.3.2 显微镜检查镜检温度36。用灭菌玻璃棒蘸取少许原精，涂在载玻片上加盖玻片后，在200400倍显微镜下观察活力、密度。镜检活力在0.7以上，密度中等以上，畸形精子率不超过20%的精液为优良。镜检时原精活力低于0.5级的不可进行人工授精配种。5.4 精液的稀释与保存5.4.1 稀释液5.4.1.2 常用种类生理盐水、维生素B12注射液、葡萄糖-柠檬酸钠液、脱脂乳液、葡萄糖-卵黄液等。推荐使用葡萄糖-柠檬酸钠稀释液。5.4.1.3 葡萄糖柠檬酸钠稀释液的配制方法配制药品为化学纯或分析纯，取葡萄糖3g、柠檬酸钠1.4g，加入100ml注射用水搅拌溶解后，用双层定性滤纸过滤到灭菌玻璃瓶
9、内，煮沸15min消毒，取出降到常温后，加入青链霉素各10万IU，酒精灯火焰灭菌瓶口，盖好瓶盖再用医用胶布做多层封闭。常温下15d可用，45下30d可用。用时不可开口，用一次性注射器抽取,如果溶液中出现絮状物不能使用。5.4.2 精液的稀释5.4.2.2 稀释原则稀释液、精液和外部环境基本同温下进行稀释，高倍稀释时采用分步稀释。只可将稀释液缓慢多次注入精液中，不可将精液直接一次倒入稀释液中；原精采下后尽快地进行稀释处理，稀释动作要轻缓，稀释过程应避开阳光直射。5.4.2.3 稀释倍数经同期发情后实施人工授精配种的，要根据原精质量而确定稀释倍数，稀释倍数为23倍。5.4.3 稀释后精液的保存5.
10、4.3.1 常温保存（15 20 ）用一次性注射器或灭菌的输精器抽取稀释好的精液，分装于灭菌容器中，用纱布包好在室温下放于避光处保存，12h内用完。5.4.3.2 低温保存（2 5 ）稀释后的精液要逐步降温，1h2h降温到5左右，包好放于保温箱中保存，24h内用完。降温后的精液可作长距离运输，到输精点后做缓慢升温处理后输精。5.5 发情鉴定绵羊的发情周期14d19d，山羊的发情周期18d24d，发情持续期24h30h。发情母羊一般有频频走动、鸣叫、不安心采食，外阴粘膜常常充血潮红、肿胀。发情母羊喜欢接近公羊，并有强烈摆尾动作，公羊爬跨时静立不动，有时也接受其它母羊爬跨，但一般不主动爬跨其它母羊
11、。排卵多出现在发情症状结束时或发情出现以后20h30h。母羊发情鉴定一般以试情为主，结合外部观察和阴道检查方法来判断，以母羊接受试情公羊爬跨不动为发情标准。试情方法：a) 将试情公羊（输精管结扎，阴茎移位，拴系试情布）按140150的公母比例放入待配母羊群中。b) 每天清晨和傍晚时各试情一次。处于发情期的母羊见试情公羊入群后，会主动接近公羊，频频摆尾，驯服的接近公羊挑逗和爬跨。c) 试情时，要保持安静，不要大声喧叫，更不能惊动羊群，以免影响试情公羊的性欲，随时赶动母羊，不要让母羊拥挤，使试情公羊有机会追逐发情母羊。d) 只有接受公羊爬跨并站立不动的母羊才视为发情母羊，抓出隔离并打上记号以备配种
12、。5.6 精液输入5.6.1 母羊保定分为杠式、坑式（输精架）和人为保定。5.6.2 用具准备光源、清洗液、母羊外阴擦拭用具、输精枪和开膣器。5.6.3 输精将母羊保定在输精架上，外阴部清洗、擦净，将开膣器缓慢插入，打开后寻找到子宫颈口，将精液注入子宫颈口内0.5cm1cm处，输精后取出输精器，轻拍母羊后躯部,完成输精。输精剂量为每只羊0.05ml0.2ml。所含的有效精子数在3000万个以上。5.6.4 适时输精采用早晚两次输精方法，母羊发情后8h20h之内。6 同期发情6.1 常用药品氯前列烯醇钠（PG），规格为每支2 ml（0.2），4条件下保存。注射用孕马血清促性腺激素（PMSG），白
13、色冻干块状物或粉末，规格为每支1000IU，专用稀释液5ml，4条件下保存。阴道孕酮海棉栓（推荐使用进口的），密封4条件下保存。6.2 同期母羊的选择实施同情发情配种的母羊，应选择年龄在15周岁之间，繁殖机能正常，健康无疫病，有过12次自然发情周期的基础母羊为好。6.3 同期发情方法6.3.1 PG一次同期法母羊在任意一天开始注射，每只肌肉注射1 ml1.5 ml，12h72h内每天早晚观察发情，并对发情母羊进行输精配种，做好标记和配种记录。6.3.2 PG二次同期法母羊在任意一天开始注射，每只肌肉注射1ml1.5ml，第一次注射后9d12d再进行第二次注射，12h72h内每天早晚观察发情，并
14、对发情母羊进行输精配种，做好标记和配种记录。6.3.3 阴道孕酮海棉栓+孕马血清促性腺激素法。6.3.3.1 放栓母羊在任意一天，把海棉栓放入到特制的放置器内，将母羊外阴部擦净，将放置器缓缓推入母羊阴道内顶出海棉栓，然后退出放置器，完成放栓。也可以用开膣器打开母羊阴道，用长柄镊子，镊住海棉栓线头一处，将海棉栓推入母羊阴道内，取出开膣器完成放栓。海棉栓尼龙绳露出阴部5cm10cm为宜。6.3.3.2 取栓和冲洗以放栓当日为零天计算，第9d12d，取出海棉栓，同时用生理盐水加青霉素或2 %的高锰酸钾溶液（淡粉色）冲洗母羊阴道。6.3.3.3 注射血促性素在取栓同时肌肉注射孕马血清促性腺激素（PMSG）330IU（每支注射3只羊）。6.3.3.4 输精母羊撤栓后，不用进行试情，从撤栓后零小时计算，分别在36h、48h、60h各输精一次，每次输精剂量为0.1ml0.2ml。7 腹腔镜输精借助腹腔镜,采用套管穿刺方法,将精液直接输到羊的子宫角内的技术。适用于胚胎移植供体羊输精和羊细管冷冻精液配种。7.1 母羊的准备输精母羊输精前禁食、禁水2436小时。7.2 器械消毒手术器械使用前用0.5%的新洁尔灭浸泡30min，或在75%酒精中浸泡消毒。 7.3 母羊的保定将发情母羊保定在输精架上，将输精架后部升起，使母羊处于臀高头低姿势，呈仰卧状，角度为40-70
