《精编》实验室生物安全通用要求培训

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1、GB 19489 2004 实验室生物安全通用要求 培训班 中国CDC传染病所 什么是生物危险 生物危险是指由生物因子形成潜在的危险 当在实验室中处理致病微生物时 或处理基因重组过程中产生的可能具有潜在生物危害的新未知基因时 或在处理致病因子的产物时 这些病原体有可能对实验室的工作人员造成危害 当实验室硬件条件缺失 管理制度不完善以及不规范的操作程序 导致实验室致病因子泄漏和逃逸 则可能造成灾难性的后果 什么是生物安全 生物安全是指避免危险生物因子造成实验室人员暴露 向实验室外扩散并导致危害的综合措施 什么是生物安全实验室 生物安全实验室是指在研究传染性疾病或微生物时能够避免病原体意外伤害的实

2、验室 气溶胶感染主要途径 吸球 即吸管 操作 吸球是微生物学方面最基本的器具 用吸球操作时 能导致气溶胶发生 例如由吸管中向外排液 用力过猛则会使液滴飞溅 弹离液体或固体培养基表面 释放出大量微粒 或者 当吸管末端含有物快排尽时 可能产生气泡 尤其是富于蛋白性悬液更易形成气泡 而气泡破裂就成为气溶胶 离心沉淀时 沉淀管装量太满 管盖未盖或不严 以及离心操作过操作过程中离心管破裂 都可导致气溶胶散播 气溶胶感染主要途径 注射器操作时 当抽吸后或者拨出时 注射器针头由于颤动而散发出液体微粒 用接种针去粘沾液体时 液柱断裂 镜检涂片时 液丝断裂 传染性材料倾注出来 打开培养皿盖时 盖内壁往往有传染性

3、的凝结水薄膜 因破裂而散播气溶胶 气溶胶感染主要途径 开安瓿时 如瓿内为液体 则当锉刀锉断瓿颈后 即可能发生气溶胶 如瓿内为干燥的活菌或菌种 特别是用真空熔封的 更易产生溶胶 机械振荡和超声振荡 或者研磨 浸解 拨出研磨柱时 都可形成气溶胶 装有液体容器的破损或液体益出 用超声波清洗机清洗污染器具时 也可能发生大量气溶胶 在粗糙的培养基表面涂布菌液时 高压灭菌器在灭菌前的排气 从玻璃或离心管上拨出棉塞时 处理关过受感染动物的笼子 各种操作的气溶胶飞散系数 各种操作的气溶胶飞散系数 各种操作的气溶胶飞散系数 各种操作的气溶胶飞散系数 可能产生危险的设备和操作方法 可能产生危险的设备和操作方法 可

4、能产生危险的设备和操作方法 可能产生危险的设备和操作方法 可能产生危险的设备和操作方法 可能产生危险的设备和操作方法 可能产生危险的设备和操作方法 可能产生危险的设备和操作方法 生物安全实验室微生物操作技术规范 实验室事故 伤害以及与工作有关的感染主要是由于人为失误 不良实验技术以及仪器使用不当造成的 实验室样品的收集以及内部传递和接收不当时 都能够带来使相关人员感染的危险 应建立完善的管理制度与操作细则 避免或尽量减少这类问题的发生 生物安全实验室微生物操作技术规范 样品容器样品容器可以是玻璃的 但最好使用塑料制品 样品容器应当坚固 正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏 在容器外部不能有残留物

5、容器上应当正确地张贴标签以便于识别 样品的要求或说明书不能够卷在容器外面 而是要分开放置 最好放置在防水的袋子里 样品在设施内的传递为了避免意外泄漏或溢出 应当使用盒子等二级容器 并将其固定在架子上使装有样品的容器保持直立 二级容器可以是金属或塑料制品 应该可以耐高压灭菌或耐受化学消毒剂的作用 密封口最好有一个垫圈 要定期清除污染 样品接收需要接收大量样品的实验室应当指定专门的房间或空间 生物安全实验室微生物操作技术规范 包装开启接收和打开样品的人员应当了解样品对身体健康的潜在危害 并接受过如何采用常规预防措施的培训 尤其是处理破碎或泄漏的容器时更应如此 样品要在生物安全柜内打开 并准备好消毒

6、剂 生物安全实验室微生物操作技术规范 移液管和移液辅助器的使用1 应使用移液辅助器 严禁用口吸取 2 所有移液管应带有棉塞以减少移液器具的污染 3 不能向含有感染性物质的溶液中吹人气体 4 感染性物质不能够用移液管反复吹吸混合 5 不能将液体从移液管内用力吹出 6 刻度对应 Mark to mark 移液管不需要吹出最后一滴液体 因此最好使用这种移液管 生物安全实验室微生物操作技术规范 移液管和移液辅助器的使用7 污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中 移液管应当在消毒剂中浸泡18 24小时后再进行处理 8 盛放废弃移液管的容器应当放在生物安全柜内 而不能放在外面 9 固定有皮下

7、注射针头的注射器不能够用于移液 应当用钝头导管替代针头 可以用工具打开瓶塞后再用移液管取样 从而避免使用注射器和针头 10 为了避免感染性物质从移液管中意外滴出而扩散 在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸 使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理 生物安全实验室微生物操作技术规范 避免感染性物质的扩散1 为了避免转移物质洒落 微生物接种环的直径应为2 3mm并完全封闭 手柄 shanks 的长度应小于6cm以减小振动 或者采用一次性灭菌棉签 2 使用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅 最好使用不需要再进行消毒的一次性接种环 3 为了避免产

8、生气泡和气溶胶的扩散 不要在玻片上进行触酶试验 而应当采用试管 毛细管或盖玻片法 4 准备高压灭菌和 或处理的废弃样品和培养物应当放置在防漏的容器内 如实验室废物袋 5 在每一阶段工作结束后 必须采用适当的消毒剂清除工作区的污染 生物安全实验室微生物操作技术规范 生物安全柜的使用1 应参考国家标准和相关文献 介绍生物安全柜的使用方法和局限性 并发给工作人员书面的操作步骤 安全或操作手册 应明确注明当出现溢出 破损或不良操作时 安全柜就不再能保护操作者 2 生物安全柜必须运行正常时才能使用 3 生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板 4 安全柜内应尽量少放置器材或样品 不能阻碍后部的气流循环 样

9、品在放人安全柜内的工作区前需要清除表面污染 5 安全柜内不能使用酒精灯 否则燃烧产生的热量会干扰气流并可能损坏过滤器 允许使用微型电加热器 但最好使用一次性无菌接种环 生物安全实验室微生物操作技术规范 生物安全柜的使用6 所有工作必须在工作台面的中后部进行 并能够通过观察挡板看到 7 尽量减少操作者身后的人员流动 8 操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流 9 实验记录 移液管以及其他物品不能够阻碍前面的空气格栅 因为这将干扰气体流动 引起物品的潜在污染和操作者的暴露 10 工作完成后以及每天下班前 应使用适当的消毒剂对生物安全柜的表面进行擦拭 11 工作开始前和结束后 安全柜的风机应至少运

10、行5分钟 生物安全实验室微生物操作技术规范 避免感染性物质的注入1 通过认真练习和仔细操作 可以避免破碎玻璃器皿的意外刺伤 尽可能用塑料制品代替玻璃制品 2 皮下注射针头 玻璃吸管以及破碎的玻璃均可能将感染性物质注入体内 3 以下两点可以减少针刺事故 a 注射时特别小心 b 减少使用注射器和针头 许多操作可用带有钝头导管的注射器替代 可用一些简单的装置来打开瓶塞 然后使用吸管取样 4 不要重新给用过的针头戴护套 一次性注射器用完后 不必将针头从注射器上取下 应丢弃在防穿透的带盖容器中 5 应当用塑料吸管代替玻璃吸管 生物安全实验室微生物操作技术规范 血清的分离1 只有经过严格培训的人员才能进行

11、这项工作 2 操作时应戴手套以及眼睛和黏膜的保护装置 3 规范的实验操作技术可以避免或尽量减少喷溅和气溶胶的产生 血液和血清应当小心吸取 而不能倾倒 严禁用口吸液 4 移液管使用后应完全浸入次氯酸盐或其他适当的消毒液中 移液管应在消毒液中浸泡至少18小时 然后再丢弃或灭菌清洗后重复使用 5 带有血凝块等的废弃样品管 在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和 或焚烧 6 为了清洗喷溅和溢出的血样 应当备有每天新鲜配制的次氯酸盐溶液 生物安全实验室微生物操作技术规范 离心机的使用1 在使用实验室离心机时 仪器良好的机械性能是保障微生物安全的前提条件 2 应按照操作手册来操作离心机 3 离心机放置

12、的高度应当使低于平均身高的工作人员也能够看到离心机腔体内部 以正确放置十字轴和离心管套 4 离心管和盛放离心样品的容器应当由厚壁玻璃制成 或最好为塑料制品 并且在使用前应检查是否破损 5 用于离心的试管和样品容器应当始终牢固盖紧 最好使用螺旋盖 6 离心管套的装载 平衡 密封和打开必须在生物安全柜内进行 生物安全实验室微生物操作技术规范 离心机的使用7 离心管套和十字轴应按重量配对 并在装载离心管后正确平衡 8 操作指南中应给出液面距离心管边缘需要留出的空间大小 9 空离心管套应当用蒸馏水或乙醇 异丙醇 70 平衡 盐溶液或次氯酸盐溶液对金属具有腐蚀作用 因此不能使用 10 对于危险度3级和4

13、级的微生物 必须使用可封口的离心离心管套 安全杯 11 当使用固定角离心转子时 必须小心不能将离心管装得过满 否则会导致漏液 12 应当每天检查离心机内转子部位的腔壁是否被沾染或弄脏 如污染明显 应重新评估离心操作规程 生物安全实验室微生物操作技术规范 离心机的使用13 应当每天检查离心转子和离心管套是否有腐蚀或细微裂痕 14 每次使用后 要清除离心管套 转子和离心机腔的污染 15 使用后离心管套应当倒置存放使平衡液流干 16 当使用离心机时 可能喷射出可在空气中传播的感染性颗粒 如果将离心机放置在传统的前开式的I级或 级生物安全柜内 这些粒子由于运动过快而不能被安全柜内的气流截留 而在 级生

14、物安全柜内封闭离心时 可以防止生成的气溶胶广泛扩散 但是 良好的离心操作技术和牢固加盖的离心管可以提供足够的保护 以防止感染性气溶胶和可扩散粒子的产生 生物安全实验室微生物操作技术规范 匀浆器 摇床 搅拌器和超声处理器的使用1 实验室不能使用家用 厨房 匀浆器 因为它们可能泄漏或释放气溶胶 使用实验室专用搅拌器和消化器 stomacher 更为安全 2 盖子 杯子或瓶子应当保持正常状态 没有裂缝或变形 盖子应能封盖严密 衬垫也应处于正常状态 生物安全实验室微生物操作技术规范 3 在使用匀浆器 摇床和超声处理器时 容器内会产生压力 含有感染性物质的气溶胶就可能从盖子和容器间隙逸出 由于玻璃可能破

15、碎而释放感染性物质并伤害操作者 建议使用塑料容器 尤其是聚四氟乙烯 po1ytetranuoroe thylene PTFE 容器 4 使用匀浆器 摇床和超声处理器时 应该用一个结实透明的塑料箱覆盖设备 并在用完后消毒 可能的话 这些仪器可在生物安全柜内覆盖塑料罩进行操作 5 操作结束后 应在生物安全柜内打开容器 6 应对使用超声处理器的人员提供听力保护 生物安全实验室微生物操作技术规范 组织研磨器的使用1 使用玻璃研磨器时应戴手套 并用一块具有吸收性的软物包住研磨器 塑料 聚四氟乙烯 研磨器更加安全 2 操作和打开组织研磨器时应当在生物安全柜内进行 生物安全实验室微生物操作技术规范 冰箱与冷

16、柜的维护和使用1 冰箱 低温冷柜和干冰柜应当定期除霜和清洁 应清理出所有在储存过程中破碎的安瓿和试管等物品 清理时应戴厚橡胶手套并进行面部防护 清理后要对内表面进行消毒 2 储存在冰箱内的所有容器应当清楚地标明内装物品的学名 储存日期和储存者的姓名 未标明的或废旧物品应当高压灭菌并丢弃 3 应当保存一份冻存物品的清单 4 除非采用有效防爆措施 否则冰箱内不能放置易燃溶液并冰箱门上应明确标示 生物安全实验室微生物操作技术规范 装有冻干感染性物质安瓿的开启当打开装有冻干物的安瓿时必须小心 因为其内部可能处于负压 瞬间进入的空气可能使一些物质扩散进入空气 安瓿应该在生物安全柜内打开 建议按下列步骤打开安瓿 1 首先清除安瓿外表面的污染 2 如果管内有棉花或纤维塞 可以在管上靠近棉花或纤维塞的中部锉一痕迹 3 用一团酒精浸泡的棉花将安瓿包起来以保护双手 然后手持安瓿从标记的锉痕处打开 4 将顶部小心移去并按污染物处理 5 如果塞子仍然在安瓿上 用消毒镊子除去 6 缓慢向安瓿中加入液体来重悬冻干物 避免出现泡沫 生物安全实验室微生物操作技术规范 装有感染性物质安瓿的储存装有感染性物质的安瓿不能浸