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1、六、试述体细胞胚胎发生的实际应用。（1）无性繁殖（2）人工（合成）种子的制备（3）分离可再生的原生质体的材料（4）遗传转化（5）代谢产物的合成（6）遗传资源的保存单细胞培养方法有平板培养法、看护培养法、微室培养法和条件培养基培养法。五、试述细胞培养的应用。1 突变体选择2 植物次生代谢产物的生产（细胞的工厂化生产、高产细胞系的建立、 “种子”培养、细胞的大量培养）3 生产天然的植物成分4 生物转化5 细胞固定化二、简述花药培养的一般程序。（1）取材：一般而言，单核后期花药对培养反应较好。（2）预处理： 适当的预处理可以显著提高花药的愈伤组织诱导率。常用的预处理方法是低温冷藏，具体的处理温度和时
2、间长度因物种而异：烟草 79，714 d；水稻 710，1015 d；黑麦 13，714 d；大麦 37，714 d。但低温预处理对小麦效果不稳定，有时还有负效果。（3）消毒：通常只要以 70酒精喷洒或擦拭花器或包被着麦穗的叶鞘表面，即可达到灭菌要求。（4）接种（5）培养方式和培养条件：培养方式：花药的培养方式主要有 3 种：一是在琼脂固化培养基表面培养，二是在加入 30Ficoll(水溶性聚蔗糖)的液体培养基表面飘浮培养，三是利用固体一液体双层培养基培养，以便既能保持较高的接种密度，培养基又不易失水干涸。培养条件：主要包括温度和光照。 （ 6）花粉植株的诱导三、简述花粉分离与纯化的方法及花粉
3、培养的方式。将小孢子从花药里游离出来的主要方法有（1）自然散落法（2）挤压法（直接挤压法、研磨过滤收集法）（3）机械游离法（磁搅拌法、小型搅拌(超速旋切)法）纯化方法：过筛、离心收集、使用聚果糖等制成不连续梯度等方法。花粉培养方式：平板培养、液体培养、双层培养、看护培养、微室培养、条件培养基培养四、影响雄核发育的因素有哪些？1）基因型：植物基因型是影响花药离体培养诱导单倍体成功的最重要的因素之一。迄今为止，花药培养的成功主要局限于 3 个科的植物茄科、禾本科和十字花科。2）植株生理状态和生长条件：供体植株的年龄及其所处的生长条件(如光周期、光强、温度和矿质营养)也能影响花药对离体培养的反应。一
4、般来说，幼年植株的花药反应能力较好。在开花末季采集的花药不但形成孢子体的频率很低，而且发生反应的时间也较迟。3）花粉发育时期：花粉发育时期的选择对雄核发育也是至关重要的。一般而言单核后期花药对培养反应较好，但不同物种最适的发育时期不同。4）预处理：接种前或后对花药采用适当的方法进行预处理，能使绿苗产量大量增加。在花药培养中采用的预处理方法很多，有高低温、化学物质、离心、射线等方法。5）培养基6）药壁因子7）培养条件：培养条件如温度、光照、板植密度等对雄核发育也有一定的影响。五、试述单倍体植株的鉴定方法及其染色体加倍的方法。1）花粉和花药植株的倍性鉴定：染色体直接计数法、间接鉴定（扫描细胞光度仪
5、鉴定、细胞形态学鉴定法、植株形态学鉴定法、高低温胁迫法 、杂交鉴定法分为自交鉴定和测交鉴定、分子标记鉴定分为生化标记鉴定分子标记研究）2）花粉和花药植株的染色体加倍茎段培养：单倍体愈伤组织培养过程中会有一定频率的核内有丝分裂(没有核分裂的染色体复制)及花粉核的融合，形成二倍体细胞，可有意识地利用这一特点来获得纯合的二倍体植株。化学试剂诱变:单倍体植物染色体加倍用得最多的是化学诱变法，常用的诱变剂有秋水仙素和 Oryzalin(黄草消)、trifluralin(氟乐灵 ,一种除莠剂)、APM(amiprophos methyl)等除草剂，其中秋水仙素应用最广泛。二、简述离体授粉的程序。确定开花、
6、花药开裂、授粉、花粉管进入胚珠和受精的时间；去雄后将花蕾套袋隔离；制备无菌子房或胚珠；制备无菌花粉；胚珠(或子房)的试管内授粉。三、什么是胚珠培养和子房培养？简述胚珠培养和子房培养的技术措概念:胚珠培养:是将胚珠从母株上分离出来，在人工控制的条件下，进行离体培养，使其生长发育形成幼苗的技术。根据培养目的的不同，可将胚珠培养分为受精胚珠培养和未受精胚珠培养。子房培养:是指将子房从母体上分离下来，置于培养基上，使其进一步发育成幼苗的技术。根据培养的子房是否授粉，可将子房培养分为授粉子房培养和未授粉子房培养。技术措施: 胚珠培养:（1）材料的选择和灭菌.（2）培养基:多为White、Nitsch、M
7、S 等，Nitsch 使用更普遍。离体胚珠发育中，培养基的渗透压起着重要的作用，特别是对幼嫩的胚珠。不同发育时期的胚珠对培养基的要求也不同。 （3）胎座和子房对胚珠培养的影响: 胎座或子房的某些组织在胚珠发育初期起着重要的作用。 （4）胚发育时期的影响: 合子和早期原胚期的胚珠较难剖取和培养，对培养基成分也要求严格。培养发育到球形胚期的胚珠，较容易获得种子，对培养基的要求也不高。子房培养:（1）子房外植体的制备.（2）培养基:用于子房培养的培养基有 MS、White、B 5、N 6、Nitseh 等。此外，培养基的成分对子房的生长发育及成熟有很大的影响。 （3）培养子房的发育.（4）影响子房培
8、养的因素:可以通过控制培养基及激素条件调节子房发育的方向。五、离体胎座授粉技术有哪些方面的应用？克服自交不亲合性. 克服杂交不亲合性 : 离体胎座授粉方法最重要的应用潜力，是在那些由于受精前不亲合性障碍从未形成过杂种的植物间建立杂种。通过孤雌生殖产生单倍体:能通过未受精子房培养产生孤雌生殖单倍体的植物已知有大麦、烟草和小麦等。培育抗逆性植物.一、什么是植物的胚胎培养?什么是合子胚培养？简述胚培养的方法和应用。(1)植物胚胎培养:是指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植株的技术。(2)合子胚培养:是指在无菌条件下分离和培养有性胚，以期获得可育植株的一种技术。(3)方法: 成
9、熟胚培养:培养基和培养条件:培养基只需含无机盐和糖即可;提供合适的生长条件及打破休眠.操作:受精后的果实或种子(带种皮) 表面消毒 剥离种胚 培养 完整植株.幼胚（未成熟胚）培养: 幼胚指的是尚未成熟即发育早期的胚。在人工培养基上幼胚培养难成功,利用胚乳看护培养,可显著提高幼胚的成活率.可用同种胚乳,也可用异种胚乳. 进行幼胚培养时，关键是维持胚性生长。此途径为需要途径.操作:表面消毒(对受精后子房进行表面消毒) 切开子房壁 取出胚珠 剥离胚珠 取出完整幼胚 培养 完整植株.(4)应用: 通过“胚拯救获得远缘杂种。通过“胚拯救” 即可克服这种受精后障碍，产生远缘杂种。 “胚拯救”的方式有 3
10、种：一是杂种幼胚在人工培养基上培养，二是杂种幼胚的胚乳看护培养，三是杂种幼胚的愈伤组织培养。其步骤是：有性杂交 杂种幼胚培养 杂种愈伤组织形成 愈伤组织增值 茎芽分化 植株再生。获得单倍体。在远缘杂交之后，通过染色体的定向消除而产生单倍体，是胚培养的另一项新用途。打破种子休眠，缩短育种周期。在有些情况下，园艺植物如落叶树的育种工作，会因种子休眠期太长而延误。通过胚的离体培养，可使休眠期缩短。许多植物的种子发育不完全或有抑制物存在而影响种胚发芽。提高种子萌发率。长期营养繁殖的植物具有形成种子的能力，但其生活力较低，萌发成苗率低下，胚培养可促进这类种子萌发和形成幼苗。种子生活力的快速测定。通过胚培
11、养可以打破种子休眠，因而也可以利用这项技术进行种子生活力的快速测定。三、植物超低温保存的概念是什么？它的基本操作程序如何？1、植物超低温种质保存的概念；指将植物的离体材料包括茎尖(芽)、分生组织、胚胎、花粉、愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等，经过一定的方法处理后在超低温(一 196液氮)条件下进行保存的方法。2、基本操作程序；一、简述单倍体在遗传研究和植物育种中的意义和单倍体获得的途所谓单倍体，指的是具有配子染色体数的个体或细胞。(一)意义：（ 1）单倍体是体细胞遗传研究和突变育种的理想材料。在诱导频率较高时，单倍体能在植株上较充分地显现重组的配子类型，可提供新的遗传资源和选择材料。显著缩短了育
12、种年限。（二）途径 1 整体操作技术雌核发育。通过阻止授粉途径(利用预先离子辐射处理的花粉或使用不亲和花粉)，引起未受精卵细胞发育成单倍体植株。胚珠雄核发育。由有雄核的卵细胞发育成单倍体植株。在这种发育途径中，卵细胞核在受精前发生消失或失活。通过远缘杂交消除一个亲本的基因组。这种情况出现在属间和种间杂交中，在受精之后的发育过程中双亲之一的基因组被选择性消除。于是，形成的胚只具有一亲本的基因组，由此发育形成的植株理所当然属于单倍体。半受精。杂交过程中，卵细胞核与萌发花粉粒产生的精核不发生融合，各自独立地进行分裂，产生嵌合的单倍体植株。化学处理。一些化学试剂如氯霉素和对氟苯丙氨酸，可能诱导体细胞或
13、组织中的染色体丢失，产生单倍体。用甲苯蓝、顺丁烯二酰肼、一氧化二氮和秋水仙素也可能产生类似的结果。高低温处理。高低温处理，可以起到抑制配子融合，诱导单倍体的作用。辐射效应。据报道，X 射线或紫外线能诱导染色体断裂，导致亲本的染色体丢失，形成单倍体植株。2 花药、花粉的离体培养技术花药和花粉培养都指在合成培养基上，改变花粉的发育途径，使其不形成配子，而像体细胞一样进行分裂、分化，最终发育成完整植株。花药的离体培养过程中，花粉粒的命运会脱离常轨，最终发育成一个单倍体的孢子体。为什么会这样呢？这涉及到花粉小孢子的发育途径。五、试述单倍体植株的鉴定方法及其染色体加倍的方法。1）花粉和花药植株的倍性鉴定
14、：染色体直接计数法、间接鉴定（扫描细胞光度仪鉴定、细胞形态学鉴定法、植株形态学鉴定法、高低温胁迫法 、杂交鉴定法分为自交鉴定和测交鉴定、分子标记鉴定分为生化标记鉴定分子标记研究）2）花粉和花药植株的染色体加倍茎段培养：单倍体愈伤组织培养过程中会有一定频率的核内有丝分裂(没有核分裂的染色体复制)及花粉核的融合，形成二倍体细胞，可有意识地利用这一特点来获得纯合的二倍体植株。化学试剂诱变:单倍体植物染色体加倍用得最多的是化学诱变法，常用的诱变剂有秋水仙素和 Oryzalin(黄草消)、trifluralin(氟乐灵 ,一种除莠剂)、APM(amiprophos methyl)等除草剂，其中秋水仙素应
15、用最广泛。二、简述离体授粉的程序。确定开花、花药开裂、授粉、花粉管进入胚珠和受精的时间；去雄后将花蕾套袋隔离；制备无菌子房或胚珠；制备无菌花粉；胚珠(或子房)的试管内授粉。胚珠培养的意义为：通过受精前胚珠培养以及未受精的胎座或子房培养，可以作为试管受精的基础；利用胚珠培养技术，使杂种尽早培养，防止杂种胚早期败育，获得杂种植株；未受精的胚珠培养能和花药培养一样，诱导出大孢子或卵细胞增殖，形成单倍体植株，用于单倍体育种。技术措施: 胚珠培养:（1）材料的选择和灭菌.（2）培养基:多为White、Nitsch、MS 等，Nitsch 使用更普遍。离体胚珠发育中，培养基的渗透压起着重要的作用，特别是对
16、幼嫩的胚珠。不同发育时期的胚珠对培养基的要求也不同。 （3）胎座和子房对胚珠培养的影响: 胎座或子房的某些组织在胚珠发育初期起着重要的作用。 （4）胚发育时期的影响: 合子和早期原胚期的胚珠较难剖取和培养，对培养基成分也要求严格。培养发育到球形胚期的胚珠，较容易获得种子，对培养基的要求也不高。子房培养:（1）子房外植体的制备.（2）培养基:用于子房培养的培养基有 MS、White、B 5、N 6、Nitseh 等。此外，培养基的成分对子房的生长发育及成熟有很大的影响。 （3）培养子房的发育.（4）影响子房培养的因素:可以通过控制培养基及激素条件调节子房发育的方向。四、影响植物离体快繁的因素；1、外植体；起始的外植体状况如外植体的来源、发育阶段、大小及预处理等，是决定植株繁殖速率和再生植株质量的最重要因素。具有拟分生组织的外植体如茎尖、带芽茎段等是最佳的植物快繁外植体，沿植物
