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1、消毒 灭菌 消毒 disinfection 杀灭物体上病原微生物的方法 但不一定杀死细菌芽胞 灭菌 sterilization 杀灭物体上包括芽胞在内的所有病原性和非病原性微生物的方法 防腐 antisepsis 防止或抑制细菌生长繁殖的方法 细菌一般不死亡 无菌 asepsis 不含活菌的意思 防止微生物进入机体或物体的操作方法 称为无菌操作或无菌技术 进行微生物实验 外科手术及医疗技术操作等过程 均需进行严格的无菌操作 1 消毒灭菌的方法 一 物理消毒灭菌法 二 化学消毒法 2 一 物理消毒灭菌法 1 热力灭菌法热力灭菌法分干热灭菌和湿热灭菌两大类 在同一温度下 后者效力比前者为大 这是因
2、为 1 湿热中细菌菌体蛋白较易凝固 2 湿热的穿透力比干热大 3 湿热的蒸汽有潜热存在 水由气态变为液态时释放出的潜热 可迅速提高被灭菌物体的温度 3 干热灭菌法 1 焚烧 是一种彻底的灭菌方法 但仅适用于废弃物品或尸体等 2 烧灼 直接用火焰灭菌 适用于微生物学实验室的接种环 试管口等的灭菌 3 干烤 鼓风干燥箱灭菌 一般加热至160 170 经2小时 适用于高温下不变质 不蒸发的物品 如玻璃器皿 瓷器等 4 湿热灭菌法 1 煮沸法 1个大气压下 煮沸的水温为100 一般细菌繁殖体煮沸5 10分钟即被杀死 细菌芽胞常需煮沸1 小时 才被杀死 水中加入2 碳酸钠 可提高沸点达105 促进细菌芽
3、胞的杀灭 2 巴氏消毒法 pasteurization 用较低温度杀灭液体中的病原菌 同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒方法 加热61 1 62 8 半小时即可 常用于牛奶和酒类等的消毒 5 3 间歇灭菌法 郭霍氏蒸汽消毒 将待灭菌的物品100 加热15 30分钟 杀死其中的细菌繁殖体 然后将物品置于37 温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体 次日再通过流通蒸汽加热 如此连续三次 可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死 针对有些培养基和牛奶 糖等在100 以上有效成分易被破坏的产品进行灭菌 6 4 高压蒸汽灭菌法 是灭菌效果最好 目前应用最广的灭菌方法 在一密闭蒸锅 高压蒸汽灭菌器内进行的 通常采用
4、纯饱和蒸汽压为103 4kPa 温度达121 维持15 30分钟 可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物 适用于各种耐热 体积大的培养基的灭菌 也适用于玻璃器皿 工作服 耐高温塑料用品等物品的灭菌 7 2 辐射 利用辐射进行灭菌消毒 可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点 所以应用越来越广 1 紫外线 紫外线波长为200 300nm时具有杀菌作用 其中以260nm最强 紫外线杀菌机理主要是作用于细菌DNA 使同一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体 因而改变DNA的分子构型 干扰细菌DNA的复制与转录 导致细菌的死亡或变异 紫外线穿透力差 故只适用于空气及不耐热物品的表面消毒 2
5、应用 射线作食品表面杀菌 射线用于食品内部杀菌 经辐射后的食品 因大量微生物被杀灭 再用冷冻保藏 可使保存期延长 8 3 滤过除菌 采用机械方法 设计一种滤孔比细菌还小的筛子 做成各种过滤器 通过过滤 只让液体培养基从筛子中流下 而把各种微生物菌体留在筛子上面 从而达到除菌的目的 这种灭菌方法适用于一些对热不稳定的体积小的液体培养基的灭菌以及气体的灭菌 它的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分 滤过除菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清 毒素 抗生素 药液 空气等除菌 但是比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内 有时会给实验带来一定的麻烦 9 10 二 化学消毒法 化学药物根据其抑菌或杀死微
6、生物的效应分为杀菌剂 消毒剂 防腐剂三类 1 凡杀死一切微生物及其孢子的药剂称杀菌剂 2 只杀死感染性病原微生物的药剂称消毒剂 3 只能抑制微生物生长和繁殖的药剂称为防腐剂 但三者界限往往难以区分 化学药剂的效应与药剂浓度 处理时间长短和菌的敏感性均有关系 主要仍取决于药剂浓度 大多数杀菌剂在低浓度下只起抑菌作用或消毒作用 它们的杀菌或抑菌原理基本相同 实验室中常用的化学杀菌剂和消毒剂列于下表 11 实验室中常用的化学杀菌剂和消毒剂 12 13 14 接种室 培养室空气熏蒸消毒 甲醛熏蒸消毒法过氧乙酸消毒法 15 影响消毒灭菌效果的因素 1 消毒剂的性质 浓度和作用时间 一般情况下浓度越大 作
7、用时间越长 杀菌效果越好 但95 的乙醇消毒效果反不如75 为好 因为高浓度乙醇使细菌表面的蛋白质迅速脱水而凝固 影响乙醇进入菌体内 减弱其杀菌作用 2 微生物的种类与数量 同种消毒剂对不同微生物的杀菌效果不同 如结核杆菌对酸 碱的抵抗力比其他的菌强 70 乙醇可杀死一般细菌繁殖体 但不能杀灭细菌芽胞 因此 必须根据消毒对象选择合适的消毒剂 3 环境中有机物的影响 消毒环境中如有有机物存在 如血清 脓汁 痰 粪便等 可与消毒剂结合而影响杀菌效果 16 2020 4 4 17 一 药品无菌检测概念及意义 无菌检查 用于确定要求无菌的药品 医疗器具 原料 辅料及要求无菌的其他用品是否染有活菌的一种
8、方法 17 2020 4 4 18 一 样品无菌检测概念及意义 确定样品是否污染 控制样品的质量 保证用药的有效性和安全性都具有重要意义 同时也可作为衡量样品生产全过程卫生水平的重要根据之一 18 2020 4 4 19 无菌检测概念及意义 环境要求 无菌室内进行 背景洁净度10 000级下的局部100级 单向流空气 操作人员 卫生 着装符合要求 操作要求 严格遵守无菌操作 严防污染 19 2020 4 4 20 无菌检测概况 利用无菌操作 将药品分别加入适合需氧菌 厌氧菌和真菌生长的液体培养基中 置于适宜温度下培养一段时间 观察有无微生物生长 由此判断药品是否合格 20 2020 4 4 2
9、1 无菌检测概况 1 检查项目 1 阴性对照试验 稀释液 培养基 应无菌生长 2 阳性对照试验 供试品 阳性对照菌 培养基 应有菌生长 3 供试品检查 供试品 培养基 有菌生长 判不符合规定 无菌生长 判符合规定 21 2020 4 4 22 无菌检测概况 2 检查数量和检查量 p130 检查数量与批产量 检品来源有关检查量与装量有关 22 2020 4 4 23 无菌检测概况 3 培养基 培养温度 培养时间 23 2020 4 4 24 无菌检测概况 4 检查方法 薄膜过滤法 直接接种法 24 2020 4 4 25 一 直接接种法 25 2020 4 4 26 二 薄膜过滤法 封闭式薄膜过
10、滤器 传统开放式薄膜过滤器 26 2020 4 4 27 二 薄膜过滤法 培养 观察结果 写检验记录 取规定量供试品 预处理 滤膜过滤 冲洗滤膜 27 细菌在培养基中的生长现象 在液体培养基中生长的现象 主要有三种生长现象 大多数细菌在液体培养基生长繁殖后呈现混匀混浊状态 成链状排列的细菌可沉淀生长 枯草芽孢杆菌 结核分枝杆菌等专性需氧菌呈表面生长 形成菌膜 在固体培养基中生长的现象 在培养基表面出现由单个细菌繁殖形成一堆肉眼可见的细菌集团 28 改良马丁培养基硫乙醇酸盐流体培养基 污染后 污染后 29 2020 4 4 30 三 结果判断 供试品管均澄清 或虽显浑浊但经确证无菌生长 判供试品符合规定 供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长 判供试品不符合规定 当符合至少一个条件时 可判试验结果无效 并取同量供试品重试 30 2020 4 4 31 填写记录单 31 2020 4 4 32 注意事项无菌检查时 除无菌室应符合洁净级要求 应严格掌握无菌操作技术 使用的器材 培养基需灭菌彻底 按药典要求的接种量接种 阳性对照菌未生长时 供试品的检验结果应判为无效 在培养期内必须逐日观察 了解培养过程的变化 不可在培养期结束时才观察结果 32 2020 4 4 33 注射剂的无菌检查 思考 33
