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1、离体蛙心灌流离体蛙心灌流 1 1 目的要求目的要求 1 1 学习斯氏离体蛙心灌流法 学习斯氏离体蛙心灌流法 2 2 观察离子及药物等对离体心脏活 观察离子及药物等对离体心脏活 动的影响 动的影响 2 2 基本原理基本原理 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内 环境 如环境 如NaNa K K CaCa2 2 等的浓度及比例 等的浓度及比例 pHpH值和温度 内环境的变化直接影响值和温度 内环境的变化直接影响 到心脏的正常节律性活动 到心脏的正常节律性活动 将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的 理化环境中 理化环境中 任氏液
2、任氏液Ringer solutionRinger solution 在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和 收缩 收缩 3 3 离子对心脏活动的影响离子对心脏活动的影响 改变任氏液的组成成分 离体心脏的活动改变任氏液的组成成分 离体心脏的活动 就会受到影响 就会受到影响 K K 参与心肌细胞的复极化和自律细胞的参与心肌细胞的复极化和自律细胞的4 4期期 自动去极化过程 其改变不仅取决于细胞自动去极化过程 其改变不仅取决于细胞 内外内外K K 浓度梯度 还与细胞膜对浓度梯度 还与细胞膜对K K 通透性有通透性有 关 因此其影响是多方面的 关 因此其影响是多方面的
3、 CaCa2 2 对 对NaNa 内流存在竞争抑制作用 称膜屏内流存在竞争抑制作用 称膜屏 障作用 对静息电位无影响 障作用 对静息电位无影响 Ca Ca2 2 o o 可使心肌细胞的兴奋性降低 传导减慢 可使心肌细胞的兴奋性降低 传导减慢 收缩力增强 收缩力增强 4 4 在体心脏受在体心脏受交感神经交感神经和和迷走神经迷走神经的双重支的双重支 配配 交感神经末梢释放交感神经末梢释放去甲肾上腺素去甲肾上腺素 与心肌细胞 与心肌细胞 受体受体结合 使心肌收缩力加强 传导速度加结合 使心肌收缩力加强 传导速度加 快 心率加快 阻断剂快 心率加快 阻断剂心得安心得安 迷走神经末梢释放乙酰胆碱 与心肌
4、细胞迷走神经末梢释放乙酰胆碱 与心肌细胞MM受受 体体结合 使心肌收缩力减弱 心肌传导速度减结合 使心肌收缩力减弱 心肌传导速度减 慢 心率减慢 阻断剂慢 心率减慢 阻断剂阿托品阿托品 5 5 动物 器材与试剂动物 器材与试剂 蟾蜍或蛙 纱布 毁髓针 眼科镊 手蟾蜍或蛙 纱布 毁髓针 眼科镊 手 术剪 眼科剪 蛙板 蛙钉 玻璃分针术剪 眼科剪 蛙板 蛙钉 玻璃分针 滴管 细棉线 蛙心夹 铁支架 万 滴管 细棉线 蛙心夹 铁支架 万 能滑轮 小烧杯 能滑轮 小烧杯 斯氏蛙心套管斯氏蛙心套管 双凹 双凹 夹 套管夹 张力换能器 生物信号计夹 套管夹 张力换能器 生物信号计 算机采集系统算机采集系统
5、 任氏液 任氏液 0 65 NaCl 0 65 NaCl 2 CaCl2 CaCl 2 2 1 1 KCl KCl 1 100001 10000肾上腺素 肾上腺素 1 100001 10000乙酰乙酰 胆碱 阿托品 胆碱 阿托品 300U ml300U ml肝素 肝素 6 6 方法与步骤方法与步骤 1 1 仪器准备 仪器准备 2 2 离体蛙心的制备 离体蛙心的制备 3 3 连接实验装置 连接实验装置 4 4 实验观察 实验观察 7 7 1 1 仪器准备 仪器准备 打开计算机生物信号采集系统 选择打开计算机生物信号采集系统 选择 实验项目实验项目 循环实验循环实验 离体蛙心灌流离体蛙心灌流 熟悉
6、实验熟悉实验标记标记的使用 的使用 参考 生理模拟实验软件参考 生理模拟实验软件 离子和药物离子和药物 对离体蛙心的影响对离体蛙心的影响 8 8 2 2 离体蛙心的制备 斯氏蛙心插管法 离体蛙心的制备 斯氏蛙心插管法 在左主动脉在左主动脉下方穿下方穿 线 靠线 靠上端上端结扎 结扎 作插管时牵引用作插管时牵引用 在主动脉干下方穿在主动脉干下方穿 线线 在动脉圆锥上 在动脉圆锥上 方打一活结备用 方打一活结备用 用以结扎和固定插用以结扎和固定插 管 管 取蛙或蟾蜍 取蛙或蟾蜍 双毁髓双毁髓后后背位背位置于蛙板上 暴置于蛙板上 暴 露心脏 仔细识别心脏周围的大血管 露心脏 仔细识别心脏周围的大血管
7、 9 9 左手提起左主动脉上方的结扎线 右手用眼左手提起左主动脉上方的结扎线 右手用眼 科剪在结扎线下方 沿向心方向将动脉管壁科剪在结扎线下方 沿向心方向将动脉管壁 剪一斜口剪一斜口 注意要剪破血管内膜 每次心缩 注意要剪破血管内膜 每次心缩 时有血自切口涌出 但不要把血管剪断 剪时有血自切口涌出 但不要把血管剪断 剪 口位置视套管尖端长度与心脏大小而定 口位置视套管尖端长度与心脏大小而定 选择大小适宜的选择大小适宜的斯氏蛙心套管斯氏蛙心套管 盛入少量任 盛入少量任 氏液 内加一滴氏液 内加一滴肝素肝素溶液 套管内溶液 套管内2 2 3cm3cm 高度 高度 左手用眼科镊提起切口缘 右手将注有
8、任氏左手用眼科镊提起切口缘 右手将注有任氏 液的斯氏套管插入动脉干内 然后左手持左液的斯氏套管插入动脉干内 然后左手持左 侧血管分支上的结扎线向外拉 右手侧血管分支上的结扎线向外拉 右手将蛙心将蛙心 套管送入动脉圆锥套管送入动脉圆锥 1010 当套管尖端到达动脉圆当套管尖端到达动脉圆 锥基部时 应将套管锥基部时 应将套管稍稍 向后退向后退 因主动脉内有 因主动脉内有 螺旋瓣会阻碍插管前进螺旋瓣会阻碍插管前进 并将套管尾端稍向 并将套管尾端稍向 右主动脉方向及腹侧面右主动脉方向及腹侧面 倾斜 使插管尖端倾斜 使插管尖端向动向动 脉圆锥的背部后下方及脉圆锥的背部后下方及 心尖方向推进心尖方向推进
9、在 在心室心室 收缩时收缩时经主动脉瓣进入经主动脉瓣进入 心室 心室 1111 注意插管不可插得过深 注意插管不可插得过深 插管的斜面应插管的斜面应 朝向心室腔朝向心室腔 以免插管下口被心室壁堵 以免插管下口被心室壁堵 住 此时可见血液冲入套管 并使住 此时可见血液冲入套管 并使液面液面 随心脏搏动而上下移动随心脏搏动而上下移动 表明操作成功 表明操作成功 否则需退回并重新插入 否则需退回并重新插入 用滴管吸去套管中的血液 换新鲜任氏用滴管吸去套管中的血液 换新鲜任氏 液 液 1212 稳定住套管后 轻轻提起备用线 将左 稳定住套管后 轻轻提起备用线 将左 右主动脉连同插入的套管用右主动脉连同
10、插入的套管用双结双结扎紧 不扎紧 不 得翻液 再将结线得翻液 再将结线固定固定在套管的小玻璃在套管的小玻璃 钩上 然后钩上 然后剪断剪断结扎线上方的血管 结扎线上方的血管 看清静脉窦的位置 看清静脉窦的位置 在心脏的下方绕一线在心脏的下方绕一线 将左右肺静脉及前后腔静脉一起 将左右肺静脉及前后腔静脉一起结扎结扎 注意切勿损坏静脉窦 注意切勿损坏静脉窦 轻轻提起套管和轻轻提起套管和 心脏 于静脉窦下方心脏 于静脉窦下方剪断有牵连的组织剪断有牵连的组织 仅保留静脉窦与心脏的联系 使心脏离体仅保留静脉窦与心脏的联系 使心脏离体 1313 用任氏液用任氏液反复冲洗心室内余血反复冲洗心室内余血 使套管内
11、 使套管内 灌流液不再有残留血液 保持套管内液面灌流液不再有残留血液 保持套管内液面 高度一致 高度一致 1 51 5 2cm2cm 或在套管的下 或在套管的下1 31 3处处 结一线作为标志 每次换任氏液时使液面结一线作为标志 每次换任氏液时使液面 与此线相平 即可进行实验 与此线相平 即可进行实验 1414 其他方法技巧其他方法技巧 用用蛙心夹提起心尖蛙心夹提起心尖 使心室与动脉圆锥约 使心室与动脉圆锥约 呈呈100 200 100 200 的钝角 然后当心室缩紧时把的钝角 然后当心室缩紧时把 套管平直往心室方向推进 当感觉套管进套管平直往心室方向推进 当感觉套管进 入心室后再把心尖放平
12、随即将套管稍向入心室后再把心尖放平 随即将套管稍向 心室推进 调整合适位置 可见套管内液心室推进 调整合适位置 可见套管内液 面随心跳而升降 面随心跳而升降 1515 3 3 连接实验装置 连接实验装置 将套管固定在支架上将套管固定在支架上 用蛙心夹在 用蛙心夹在心舒期心舒期 夹住少许心尖部肌肉夹住少许心尖部肌肉 不要夹多 以免夹 不要夹多 以免夹 破心室而漏液 破心室而漏液 将蛙心夹上的系线绕将蛙心夹上的系线绕 过一个滑轮与张力传过一个滑轮与张力传 感器相连 感器相连 勿使灌流勿使灌流 液滴到传感器上液滴到传感器上 调节记录仪器上的收缩曲线的幅度适中 调节记录仪器上的收缩曲线的幅度适中 16
13、16 4 4 实验观察 实验观察 1 1 记录记录正常心搏曲线正常心搏曲线 2 2 改用改用0 65 NaCl0 65 NaCl溶液灌流 并作好溶液灌流 并作好加加 药标记药标记 观察心搏变化 待曲线出现明显 观察心搏变化 待曲线出现明显 变化时 立即吸去套管中的灌流液 同时变化时 立即吸去套管中的灌流液 同时 做好做好冲洗标记冲洗标记 并用新鲜任氏液清洗 并用新鲜任氏液清洗2 2 3 3次 待心搏恢复正常 次 待心搏恢复正常 注意 换液时切勿碰套管 以免影响描记注意 换液时切勿碰套管 以免影响描记 曲线的基线 同时保持灌流液面一致 下曲线的基线 同时保持灌流液面一致 下 同 同 1717 3
14、 3 向套管内加向套管内加2 2 6 6滴滴5 NaCl5 NaCl溶液 作好溶液 作好 加药加药标记标记 观察心搏曲线的 观察心搏曲线的频率及振幅频率及振幅变变 化 当曲线出现明显变化时 应立即吸去化 当曲线出现明显变化时 应立即吸去 套管中的灌流液 并做好冲洗套管中的灌流液 并做好冲洗标记标记 迅速 迅速 用新鲜任氏液清洗用新鲜任氏液清洗2 2 3 3次 待心搏恢复正次 待心搏恢复正 常 常 4 4 向套管内加向套管内加1 1 2 2滴滴2 CaCl2 CaCl 2 2 溶液 作好溶液 作好 加药记号 观察心搏曲线的频率及振幅变加药记号 观察心搏曲线的频率及振幅变 化 标记 冲洗至心搏恢复
15、正常化 标记 冲洗至心搏恢复正常 5 5 向套管内加入向套管内加入1 1 2 2滴滴1 KCl1 KCl溶液 记录溶液 记录 心搏曲线的变化 当心搏曲线变化时 同心搏曲线的变化 当心搏曲线变化时 同 法更换灌流液 待心搏恢复正常 法更换灌流液 待心搏恢复正常 1818 6 6 同法记录套管中加入同法记录套管中加入1 1 2 2滴肾上腺素滴肾上腺素溶溶 液液 1 10000 1 10000 后心搏曲线的变化 后心搏曲线的变化 7 7 同法记录套管中加入同法记录套管中加入1 1 2 2滴乙酰胆碱滴乙酰胆碱溶溶 液液 1 10000 1 10000 后心搏曲线的变化 后心搏曲线的变化 8 8 同法记
16、录套管中同法记录套管中先加入阿托品后再加先加入阿托品后再加1 1 2 2滴乙酰胆碱溶液滴乙酰胆碱溶液 1 10000 1 10000 后心搏曲线的变后心搏曲线的变 化 化 1919 注意事项注意事项 1 1 制备离体心脏标本时 勿伤及静脉窦 制备离体心脏标本时 勿伤及静脉窦 2 2 蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖 避 蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖 避 免因夹伤心脏而导致漏液 免因夹伤心脏而导致漏液 3 3 每一观察项目都应先描记一段正常曲线 然 每一观察项目都应先描记一段正常曲线 然 后再加药并记录其效应 加药时应在心跳曲线后再加药并记录其效应 加药时应在心跳曲线 上予以标记 以便观察分析 上予以标记 以便观察分析 4 4 各种滴管应分开 不可混用 各种滴管应分开 不可混用 5 5 在实验过程中 插管内灌流液面高度应保持 在实验过程中 插管内灌流液面高度应保持 恒定 仪器的各种参数一经调好 应不再变动恒定 仪器的各种参数一经调好 应不再变动 2020 6 6 标本制备好后 若心脏功能状态不好 不搏动 标本制备好后 若心脏功能状态不好 不搏动 可向插管内滴加 可向插管内滴加1
