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1、1核心家系多巴胺受体 D3 基因 Ser9Gly 多态性与精神分裂症关联研究作者：吕路线，张红星，郭素芹，石玉中【关键词】 精神分裂症Association between DRD3 gene Ser9Gly polymorphism and schizophrenia in center families【Abstract】 AIM: To investigate the association between the dopamine receptor D3(DRD3) gene Ser9Gly polymorphism located in the first exon and the
2、susceptibility of schizophrenia. METHODS: The genotypes were determined by restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis for the above polymorphism in 124 schizophrenic hospitalized patients from October 2001 to December 2003 in our hospital and their parents. The correlation between the
3、polymorphism of the gene and schizophrenia was investigated by transmission disequilibrium test (TDT) and haplotype relative risk test (HRR). The data were analyzed with software SPSS 11.5. RESULTS: One hundred and one out 2of the 124 families were examined with TDT and HRR. Disequilibrium existed i
4、n the whole samples and the male families, but did not exist in the female families. Between the 2 groups with or without the family history, no significant difference in disequilibrium was found by TDT. But with HRR, significant disequilibrium existed in the group with positive family history, whil
5、e no disequilibrium was found in the other group. CONCLUSION: There is a correlation between the DRD3 gene Ser9Gly polymorphism and schizophrenia, especially for male schizophrenia. No obvious evidence shows the different disequilibrium in the groups classified by different family history.【Keywords】
6、 schizophrenia; receptors, dopamine; polymorphism (genetics); transmission disequilibrium test; haplotype relative risk test【摘要】 目的： 探讨多巴胺 D3 受体（DRD3）基因第一外显子 Ser9Gly 多态性与精神分裂症易感性的关联. 方法： 对河南省精神病院 200110/200312 住院的 124 个本地汉族核心家系（精神分裂症患者及父母）采用限制性片段长度多态性技术测定基因型. 应用传递不平衡检测、单体相对危险度检测判断基因多态性与精神3分裂症的关联. 结果
7、： 在所收集的 124 个家系中有 101 可用于TDT, HRR 检测，Ser9Gly 多态性存在传递不平衡，Gly 等位基因较多地传给下一代，这种传递不平衡存在按性别分组的男性患者家族中，而不存在女性患者家族中；按有无家族史分组，两组患者中TDT 均无传递差异，HRR 检测有家族史的家系有统计学差异，无家族史的家系无传递差异. 结论： DRD3 受体基因第一外显子Ser9Gly 多态性可能与精神分裂症易感性存在关联，且可能与男性精神分裂症关系更密切，无明显的证据说明和家族史不同存在不同的传递差异.【关键词】 精神分裂症；受体，多巴胺；多态现象（遗传学）；传递不平衡检测；单体相对危险度检测0
8、 引言多巴胺受体是多巴胺系统行使功能的重要环节，而多巴胺受体基因多态性的研究成为揭示精神分裂症病因及其它相关问题的切入口之一. 在多巴胺受体亚型内，多巴胺递质与 D3 受体的亲合力最高. 且随着核素医学的发展，已经能直观地看到 DRD3 受体主要分布在端脑、伏隔核、Collegia 氏岛以及其它边缘系统，与特异性表达、思维、情感、情绪及认知等功能相关，可能参与调节多巴胺能系统对思维和情绪的控制. 本研究旨在通过研究样本总体上和不同4分层间的传递不平衡检测（transmission disequilibrium test, TDT）及单体相对危险度检测（haplotype relative ri
9、sk test, HRR）寻找 DRD3 受体的基因第一外显子 Ser9Gly 多态性与精神分裂症易感性之间的关联.1 对象和方法1.1 对象受试对象为河南省精神病院 200110/200312 住院的本地汉族患者及父母，共 124 个核心家系，男性家系 58 个，女性家系 66个. 患者均符合 CCMD3 精神分裂症诊断标准，由两名主治医师或者主治以上医师确诊；家属患者知情同意. 排除非汉族患者.1.2 方法入选患者填写一般资料，包括年龄、性别、家族史、发病年龄等. 对符合入选标准的病例，争得同意后，抽取肘静脉血 5 mL, ACD 抗凝，于 -70 低温冰箱保存,500 L 用于提取 DN
10、A，DNA提取采用 UNIQ10 柱式人类基因组抽提试剂盒（Cat# SK1342，购自上海生工生物工程技术服务有限公司）提取. 引物序列为： 引物1 5GCTCTATCTCCAACTCTCACA3，引物 2 55AAGTCTACTCACCTCCAGGTA31 （由上海生工生物工程技术服务有限公司用美国 PE 公司 391 型 DNA 自动合成仪合成）. 目的片段扩增及基因型判定具体方法见文献2.统计学处理： 双亲至少一方为杂合子的家系进入统计分析. 实验数据采用 SPSS11.5 进行 2 检验分析 . 分析 DRD3 受体基因第一外显子 Ser9Gly 多态性等位基因频度和基因型频度，采用
11、传递不平衡检测、单体相对危险度检测等方法，分析其多态性与精神分裂症的关联.2 结果2.1 限制性内切酶消化片断电泳各基因型有一定差异（Fig 1）.2.2HardyWeinberg（HW）平衡分析 DRD3 基因型在整体样本中、父母组及患者组均符合 HW 平衡.2.3 传递不平衡与单体型相对风险分析收集的 124 个家系中，有 101 个家系可用 TDT 和 HRR 检测（Tab 1, 2）.表 1 精神分裂症患者 101 个家系 TDT 检测（略）表 2 精神分裂症患者 101 个家系HRR 检测（略）6进入统计方程的家系按性别分层有男性家系 48 个，女性家系 53 个，分别进行 TDT
12、检测和 HRR 检测. 男性家系 TDT 存在传递不平衡（McNemar 检测，P0.05） ；而女性家系 TDT 未发现不平衡传递（McNemar 检测，P0.05，Tab 3） ；HRR 检测，男性家系存在等位基因优先传递2=7.54, P=0.006, OR=2.24, 95%CI 为(1.25,3.99) ；而女性家族 2=3.20, P=0.074, OR=1.64, 95%CI 为(0.95, 2.83)，95%可信区间基本包含了无联系区段，不支持二者存在联系(Tab 4).表 3 不同性别的精神分裂症患者家系 TDT检测（略）表 4 不同性别的精神分裂症患者家系 HRR 检测（略
13、）33 不同家族史家系分析按有无家族史分层，进入统计方程的有家族史的家系 38 个，无家族史的家系 63 个，分别进行 TDT检测和 HRR 检测. TDT 检测，有无家族史的家系中 P 均0.05（McNemar 检测） ，均未发现传递不平衡（Tab 5）. HRR检测前者 2=5.19, P=0.023, OR=2.12，95%CI 为(1.11,4.05)，Gly 存在优先传递现象；后者 2=2.29, P=0.13, OR=1.47, 95%CI为(0.89, 2.41，Tab 6).表 5 不同家族史的精神分裂症患者家系 TDT检测（略）表 6 不同家族史的精神分裂症患者家系 HRR
14、 检测（略）3 讨论7我们研究表明,DRD3 受体基因第一外显子 Ser9Gly 多态性可能与精神分裂症易感性存在关联，且可能与男性精神分裂症关系更密切，无明显的证据说明和家族史不同存在不同的传递差异.31DRD3 基因多态性与精神分裂症易感性关联分析早在1996 年，Crocq 等3 在英国和法国两个独立的人群中对 DRD3基因第一外显子的 Ser9Gly 多态性与精神分裂症的相关性进行了两个独立研究，首次发现了 DRD3 基因 Ser9Gly 多态性与精神分裂症易感性相关，且在患者组 Gly 分布较多. 我们对所入组的核心家系首先进行 HardyWeinberg 分析，样本基因型分布符合这
15、一平衡. 关联分析发现 DRD3 基因多态位点 Ser9Gly 存在传递不平衡 Gly 较多的传给下一代，与 Crocq 等3 , James L 等4及国内学者周儒伦等5的结果类似 . 支持 DRD3 基因多态性 Ser9Gly 与精神分裂症易感性存在关联. Jonsson E 等6 在瑞士人群病例对照研究及 Meta 分析，发现纯合子（包括： Ser/Ser, Gly/Gly）在患者组分布较多，提出纯合子组合可能增加精神分裂症的易感性. Spurlock 等7却发现 Ser/Ser 基因型在精神分裂症患者组分布较多，有统计学差异. 最近 Ambrosio 等8在核心家系对 DRD3多态位点
16、 Ser9Gly 与精神分裂症相关性进行 TDT, HRR 检测均无显著性差异.结果的不同可能与样本量大小、多项研究病例与对照的选择8偏倚、人群来源的不同有关. 在大量分子生物学研究中，当最低的基因频率0.01，即视为多态. 在生物进化过程中，突变的发生率本身是受周围环境因素多方面影响的，等位基因 Ser9 是野生型，Gly是突变型，在某一范围内 Ser9Ser 就有可能或保持相对高度保守，占有相当大的比率. 而精神分裂症本身的高度异质性，又受多因素的影响，增加了假阳性和假阴性关联的机率. 有研究表明不同区域内的人群存在基因构成的不同，或者也可能成为研究结果差异的原因之一. 我们选择了内对照，应用传递不平衡和单体相对危险度分析，避免了关联研究中存在的不恰当的对照问题，人群构成相对单一. 样本量虽不算大，但可以为以后的研究及已存在的不一致的研究结果提供新的证据积累.我们在对患者按性别进行分层时，TDT 与 HRR
