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1、 1 第三章第三章 细菌感染的病原学诊断细菌感染的病原学诊断 褚云卓褚云卓 2 本章内容本章内容 第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 第四节第四节 细菌的非培养检测方法细菌的非培养检测方法 3 第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则 一 标本采集的一般原则一 标本采集的一般原则 1 1 早期采集 早期采集 2 2 无菌采集 无菌采集 3 3 根据目的菌的特性用不同的方法采集 根据目的菌的特性用不同的方法采集 4 4 采集适量标本 采集适量标本 5 5 安全
2、采集 安全采集 4 第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则 二 标本的处理二 标本的处理 1 1 对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 2 2 其他所有的标本采集后最好在其他所有的标本采集后最好在2h2h之内送到实验室之内送到实验室 3 3 若不能及时送检 标本应置于一定环境中保存若不能及时送检 标本应置于一定环境中保存 4 4 一般情况下 用于细菌培养的标本保存时间不应一般情况下 用于细菌培养的标本保存时间不应 超过超过24h24h 5 病人标本中可能含有大量致病
3、菌 必须注意安全病人标本中可能含有大量致病菌 必须注意安全 防护防护 标本切勿污染容器的瓶口和外壁 容器必须包装标本切勿污染容器的瓶口和外壁 容器必须包装 好 防止送检过程中倒翻或碰破流出好 防止送检过程中倒翻或碰破流出 对于烈性传染病标本运送时更要特别严格 必须对于烈性传染病标本运送时更要特别严格 必须 按规定包装 由专人运送按规定包装 由专人运送 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送 有时可直接用抽取标本的注射器运送有时可直接用抽取标本的注射器运送 6 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 1 1 包括不染色标本检查法和染色标本检查法
4、包括不染色标本检查法和染色标本检查法 2 2 镜检可以了解有无细菌及大致的菌量镜检可以了解有无细菌及大致的菌量 3 3 根据细菌形态 结构和染色性有助于对病原菌的根据细菌形态 结构和染色性有助于对病原菌的 初步识别和分类初步识别和分类 4 4 通过形态学检查可得到初步诊断 对临床早期诊通过形态学检查可得到初步诊断 对临床早期诊 断和治疗疾病有一定的参考意义断和治疗疾病有一定的参考意义 7 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 一 不染色标本一 不染色标本 1 1 细菌不经染色直接镜检 主要用于检查生活状态细菌不经染色直接镜检 主要用于检查生活状态 下细菌的动力及运动状况下细菌的动力及
5、运动状况 2 2 常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法 有动力 可看到细菌自一处移至另一处 有明显有动力 可看到细菌自一处移至另一处 有明显 的方向性位移的方向性位移 无动力 细菌呈现布朗运动 只在原地颤动而无无动力 细菌呈现布朗运动 只在原地颤动而无 位置的改变位置的改变 8 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 3 3 有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作 出初步鉴定出初步鉴定 如疑似霍乱患者 镜下观察到来回穿梭似如疑似霍乱患者 镜下观察到来回穿梭似 流星状运动的细菌 流星状运动的细菌 制动试验阳性 可初步制动试验阳性 可初
6、步 推断为推断为 疑似疑似O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌 9 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 二 染色标本二 染色标本 一 常用染料 一 常用染料 1 1 碱性染料 碱性复红 结晶紫 美蓝等 碱性染料 碱性复红 结晶紫 美蓝等 2 2 酸性染料 有伊红 刚果红等 酸性染料 有伊红 刚果红等 3 3 复合染料 中性染料 及荧光染料 复合染料有 复合染料 中性染料 及荧光染料 复合染料有 瑞氏染料 伊红美蓝 姬姆萨染料 伊红天青瑞氏染料 伊红美蓝 姬姆萨染料 伊红天青 等 荧光染料有荧光标记的抗体 等 荧光染料有荧光标记的抗体 10 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 二
7、 常用的染色方法 二 常用的染色方法 1 1 革兰染色 革兰染色 gram staingram stain 革兰阳性球菌革兰阳性球菌 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 11 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 2 2 抗酸染色 抗酸染色 acid fast stainacid fast stain 可将细菌分为两大类可将细菌分为两大类 即即 抗酸性细菌抗酸性细菌 非抗酸性细菌非抗酸性细菌 12 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 3 3 荧光染色 荧光染色 1 1 荧光染色法敏感性强 效率高而且容易观察 荧光染色法敏感性强 效率高而且容易观察 结果 在临床细菌鉴定中有很大的实用
8、价值 结果 在临床细菌鉴定中有很大的实用价值 2 2 主要用于结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌 白 主要用于结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌 白 喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测 喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测 13 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 4 4 鞭毛染色鞭毛染色 可观察到菌体上有无鞭毛 鞭毛的位置及数可观察到菌体上有无鞭毛 鞭毛的位置及数 量 在细菌鉴定中 特别是非发酵菌的鉴定中量 在细菌鉴定中 特别是非发酵菌的鉴定中 很重要 很重要 5 5 异染颗粒染色异染颗粒染色 用于白喉棒状杆菌染色 用于白喉棒状杆菌染色 14 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 6 芽胞染色
9、绿色部分 为芽胞 15 第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查 7 7 墨汁染色墨汁染色 一般用于新型隐球菌一般用于新型隐球菌 检查检查 16 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 一 一 培养基的种类和选择培养基的种类和选择 培养基的组成成分 培养基种类 培养基的选择培养基的组成成分 培养基种类 培养基的选择 二 分离及培养二 分离及培养 细菌的分离 细菌培养方法细菌的分离 细菌培养方法 三 生化反应和鉴定三 生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢试验碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验 17 第三节
10、第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 一 培养基的种类和选择一 培养基的种类和选择 培养基 培养基 culture mediumculture medium 是由人工方法配制而成的是由人工方法配制而成的 专供微生物生长繁殖使 专供微生物生长繁殖使 用的混合营养物制品 用的混合营养物制品 18 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 一一 培养基的组成成分培养基的组成成分 1 1 营养物质 营养物质 蛋白胨 肉浸液 牛肉膏 糖类 醇类 血液 蛋白胨 肉浸液 牛肉膏 糖类 醇类 血液 无机盐类 鸡蛋和动物血清生长因子无机盐类 鸡蛋和动物血清生长因子 2 2 凝固物质 凝
11、固物质 琼脂 明胶 卵白琼脂 明胶 卵白 3 3 抑制剂和指示剂 抑制剂和指示剂 19 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 二 培养基种类 二 培养基种类 1 1 基础培养基 基础培养基 based mediumbased medium 2 2 营养培养基 营养培养基 nutrient mediumnutrient medium 3 3 鉴别培养基 鉴别培养基 diferential mediumdiferential medium 4 4 选择培养基 选择培养基 selective mediumselective medium 5 5 特殊培养基 特殊培养基 specia
12、l mediumspecial medium 20 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 1 1 基础培养基 基础培养基 含有基础生长所需的基本含有基础生长所需的基本 营养成分 最常用的是肉浸营养成分 最常用的是肉浸 液 俗称肉汤 液 俗称肉汤 brothbroth 主 主 要成分含牛肉浸液和蛋白胨要成分含牛肉浸液和蛋白胨 21 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 2 2 营养培养基 营养培养基 nutrient mediumnutrient medium 最常用的是血琼脂平板 巧克力血最常用的是血琼脂平板 巧克力血 平板等平板等 22 第三节第三节 细菌
13、的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 3 3 鉴别培养基 鉴别培养基 diferential diferential mediummedium 糖发酵管 克氏双糖铁糖发酵管 克氏双糖铁 琼脂 琼脂 KIAKIA 伊红 伊红 镁镁 蓝琼脂和动力蓝琼脂和动力 吲哚吲哚 尿素尿素 MIUMIU 培养基等 培养基等 23 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 4 4 选择培 选择培 selective mediumselective medium SSSS琼脂使致病的沙门菌琼脂使致病的沙门菌 志贺菌容易分离到 志贺菌容易分离到 24 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和
14、鉴定 5 5 特殊培养基 特殊培养基 special mediumspecial medium 疱肉培养基 疱肉培养基 巯基乙醇酸纳培养基巯基乙醇酸纳培养基 25 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 三 培养基的选择 三 培养基的选择 根据标本来源和可能存在的根据标本来源和可能存在的 病原菌 确定选用各种分离培养病原菌 确定选用各种分离培养 基 伊红美蓝基 伊红美蓝 麦康凯用于筛选麦康凯用于筛选 革兰阴性杆菌 革兰阴性杆菌 26 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 三 培养基的选择 三 培养基的选择 从血液 骨髓中从血液 骨髓中 分离病原菌用血液增分离病
15、原菌用血液增 菌培养基菌培养基 27 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 1 1 平板划线分离法 平板划线分离法 2 2 斜面接种法 斜面接种法 3 3 液体接种法 液体接种法 二 分离及培养 一 细菌的分离 4 穿刺接种法 5 倾注平板法 6 涂布接种法 28 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 二 细菌培养方法 二 细菌培养方法 1 1 需氧培养法 需氧培养法 2 2 二氧化碳培养法 二氧化碳培养法 3 3 厌氧培养法 厌氧培养法 29 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 三 生化反应和鉴定三 生化反应和鉴定 一 碳水化合物的代谢
16、试验 一 碳水化合物的代谢试验 1 1 糖 醇 苷 类发酵试验糖 醇 苷 类发酵试验 是鉴定细菌最主要和最基是鉴定细菌最主要和最基 本的试验 特别对肠杆菌科本的试验 特别对肠杆菌科 细菌的鉴定尤为重要细菌的鉴定尤为重要 30 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 2 2 氧化 氧化 发酵试验 发酵试验 O FO F试验 试验 主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴 别 前者均为发酵型 而后者通常为氧化型别 前者均为发酵型 而后者通常为氧化型 或产碱型 也可用于葡萄球菌与微球菌间的或产碱型 也可用于葡萄球菌与微球菌间的 鉴别 鉴别 31 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定 3 3 半乳糖苷酶试验 半乳糖苷酶试验 ONPGONPG试验 试验 迅速及迟缓分解乳糖的细菌迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPGONPG试验为试验为 阳性 而不发酵乳糖的细菌为阴性 本试验阳性 而不发酵乳糖的细菌为阴性 本试验 主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定 主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定 32 第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴
