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1、注意事项 守时间 不迟到 不旷课 迟到累积四次 旷 课2次以上不计成绩 听指挥 不让做的事情不做 不乱走动 不喧哗 不吃东西 不乱丢东西 重安全 水 电 火 关门窗 讲公德 爱护公物 损坏物品要报告 用完东 西要还原 实验一 细胞显微形态的观察 实验原理 细胞是生命活动的基本结构和功能单 位 典型的人和动物细胞直径为10 20 m 人 眼的分辨率为0 2mm 一般光学显微镜分辨率为 0 2 m 线粒体 高尔基体 中心体 核仁 染 色体等细胞器大于0 2 m 借助显微镜 可观 察到细胞及其内部结构 细胞形态多样 有球形 椭圆形 扁平 形 立方形 长梭形 星形等 其形态与其功能 相适应 目的要求
2、1 掌握光镜下细胞和细胞器的形态结构 2 初步掌握临时制片的方法 3 学习生物绘图的方法 光镜的使用 物镜转换时 由低到高 调节载物台时 由高到低 显微标本制作的一般原理与步骤 生物显微制片方法 非切片法 涂片 铺片 压片 磨片 整装片等 切片法 石蜡切片法 火棉胶切片法 冰冻切片法 等 1 非切片法 非切片法即不用切片机 不经切片手续而制成切片的 方法 操作简单快捷 铺片法 封藏法可使原有组织结构不被破坏 涂片法 压片法弥补了用包埋 切片法有时观察不清 楚的不足 显微标本制备中常用的手段 1 1 涂片法 主要用于血液 精液 尿 痰 微生物等不能切 成薄片的液态材 料 在载玻片上涂成 单层细胞
3、 再经 固定 脱水 染 色等手段制成永 久标本 1 2 铺片法 动植物组织的表 皮层观察 可活体取待观察 动植物组织 用 尖镊子撕去一层 表皮 迅速平铺 在载玻片上 如 洋葱表皮细 胞的铺片制备 1 3 压片法 一些较幼嫩 柔软的材 料 可将其置于载玻片上 用小解剖刀将其分散 加染料一滴 再盖上盖 玻片 用拇指垂直用力 挤压 使组织散成一薄 片 再进行观察 如植物根尖观察染色体 花粉粒观察发育阶段 等 1 4 离析法 利用化学试剂使组织的 细胞间质溶解 使细胞 能分散成单个个体 经 染色 脱水 透明即可 观察其个体形态 适用于平滑肌 叶片等 部位 2 石蜡切片制备程序 取材 从动物身体割取所需
4、的新鲜组织一小块 厚 度约0 5厘米 愈快愈好 以防组织死后变化 固定 把切取的小块组织 迅速投入预先配好的固 定液 如10 福尔马林 0 5 锇酸 包氏液 岑克氏 液 卡氏等固定液 中固定 使组织细胞的蛋白质 变性 组织块硬化 以保存组织细胞原有的形态 冲洗 洗涤 组织块自固定液取出后 须经流水 冲洗或乙醇洗涤 使组织中含有的固定液全部除 去 脱水 以除去组织中的水分 组织中的水分和石蜡 是不相溶的 为不使组织块在脱水时产生收缩 需 经一定浓度梯度的脱水剂脱水 透明 组织块脱水后 须经既可和乙醇相混 亦 可作石蜡溶剂的透明剂 如二甲苯 透明 使组织 中的乙醇被透明剂所替代 才能浸蜡包埋 浸蜡
5、 将包埋剂 石蜡 透入整个组织的过程 石蜡透入组织需要一定的温度 石蜡熔点 所以 浸蜡都在恒温箱中进行 包埋 制备一定形状的容器 如纸盒等 倒入熔 化的石蜡 迅速夹取浸透石蜡的组织块放入盒内 待表面石蜡凝固后立即将容器投入水中 使它凝固 成蜡块 切片 组织块经上述处理后 不仅变硬 且有石蜡 支撑 可用切片机将包埋组织的蜡块切成薄片 一 般厚度是5 8微米 贴片 把由切片机切下的蜡条 分割成小段 分 别排放于滴有蒸馏水的载玻片上 在展片台上微热 使皱褶的蜡片伸展平正 烘片 把贴有蜡片的载玻片置于45 恒温箱中 烘烤3 4小时 使切片干燥 脱蜡与复水 组织切片的脱蜡等过程是在染色缸中进行的 因此须
6、预 先准备洁净的染色缸 并分别放入二甲苯 各级浓度的乙 醇及染料溶液 按顺序贴好标签 染色前须先进行脱蜡和 复水 即用二甲苯溶去切片上的石蜡后再经各级浓度乙醇 自高浓度到低浓度 下行到水的过程 因为没有经过复 水处理的切片不能用水溶性染料染色 所以在染色前必须 再度复水 脱蜡与复水的步骤如下 切片浸入二甲苯3 10 分钟 二甲苯 纯乙醇 1 1 纯乙醇 95 乙醇 80 乙 醇 70 乙醇 50 乙醇 以上每级乙醇停留的时间约2 5 分钟 蒸馏水2分钟 染色 切片染色以后可增加组织细胞结构的对比 度 常用的生物染料是苏木素和伊红 简称H E 染色 苏木 素是一种碱性染料 经苏木素染色的结构呈蓝
7、紫色 如细 胞核 组织中可被碱性染料着色的结构称嗜碱性 伊红 是一种酸性染料 被伊红染色的结构呈红色或粉红色 如 细胞质 可被酸性染料着色的结构称嗜酸性 H E 染色 的程序如下 将已浸入水中的切片取出放入苏木素染液5 10分钟 自来水洗2分钟 0 5 盐酸水分色数秒种 在 显微镜下检查核褪至浅红色 细胞质及结缔组织近无色 蒸馏水1分钟 0 1 氨水 蓝化 1分钟 自来水冲洗5 10分钟 蒸馏水1分钟 50 乙醇 70 乙醇 80 乙醇 90 乙醇 以上每级乙醇停留的时间约2 5分钟 0 5 伊红 95 乙醇溶液 2 5分钟 95 乙醇分色 在显微镜下检查核呈蓝紫色 细胞质及结缔组织呈粉红色
8、95 乙醇轻洗 洗净玻片上剩余的伊红染液 脱水 已染色的组织切片 为了长久保存 又须再 经各级浓度的乙醇脱水 即将上述已被染色的组织切 片依次放入95 乙醇1分钟 纯乙醇 I 1分钟 纯乙 醇 2 5分钟 透明 以除去组织切片中的乙醇 因组织中的乙醇 不与树胶相溶 所以必须用透明剂除去乙醇后才能封 藏 即将上述已脱水的组织切片依次放入二甲苯 纯 乙醇 1 1 2 5分钟 二甲苯 I 2 5分钟 二甲 苯 2 5分钟 封固 在切片上滴加中性树胶 用盖玻片进行封固 保存备用 内容与方法 一 各种细胞的一般形态结构观察 蝾螈表皮细胞 低倍镜下可见排列紧密的多 边形扁平细胞 高倍镜下可见 颜色较浅的细
9、胞边界 核位于 中央 呈圆形 核内可见核仁 nucleolus 和染色质 chromatin 平滑肌纤维 吸收细胞 杯状细胞 分泌 小肠绒毛 小肠上皮组织切片 粘膜表面可见许多细小的突起 称小肠绒毛 intestinal villus 由上皮和固有层共同 向肠腔突出而形成 绒毛根部的上皮向固有层内凹陷形成小肠腺 绒毛的表层可见排 列紧密的的长柱状的吸收细胞 其细胞核为椭圆型 在吸收细胞间 有分散存在的染 色较浅的杯状细胞 其核为三角型或不可见 具有分泌粘液 杯状细胞具有保护和润 滑肠粘膜的作用 绒毛中轴为固有层 含有淋巴细胞 浆细胞 巨噬细胞 嗜酸性粒 细胞 丰富的毛细血管 毛细淋巴管 也称中
10、央乳糜管 与脂肪的吸收和运输有关 绒毛中轴还有来自粘膜肌层的散在纵行的平滑肌纤维 直达绒毛顶端 其收缩可 使绒毛产生伸缩运动 有利于吸收及淋巴 血液的运行 外表皮 平滑肌 小肠上皮组织切片 神经细胞 低倍镜下可见染成蓝色 的星形脊髓神经细胞 胞 体三角或多角形 有多个 突起 胞内细胞核 小鼠和人精子细胞 低倍镜下可见视野中有多 个染成蓝色的蝌蚪样的精 子 尾部为一条细长的鞭 毛 马蛔虫子宫石蜡切片 中心 体 低倍镜下观察马蛔虫子宫 切片 可见众多椭圆形的 受精卵 可见处于分裂 中 后期的马蛔虫受精卵 的两极各有一颗染色很深 的小黑点 即为中心粒 中心粒 星射线 受精卵 细胞外围有一层厚的受精
11、卵膜 其与受精卵细胞间 的空隙为围卵腔 极面观 侧面观 脊神经节切片 高尔基体 人染色体装片 p 短臂 q 长臂 血细胞 红细胞 白细胞 粒细胞 中性粒细胞 嗜碱 酸性 粒细胞 淋巴细胞 B T细胞 单核细胞 血小板 红细胞 RBC 白细胞 WBC 血小板 PLT platelet 血红蛋白 HGB hemoglobin 人血涂片 1 2 3单核细胞 4 5 6 淋巴细胞 7 8 9 10 11中性粒 细胞 12 13 14 嗜酸粒细 胞 15嗜碱性粒细胞 16 红细胞 17 血小板 11 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 12 13 14 15 16 17 人血涂片 红骨髓涂片 脂肪
12、细胞 粒细胞 巨噬细胞 巨核细胞 红细胞 单核细胞 血小板 有髓神经纤维切片 轴突 树突 眼虫 眼虫有叶绿体而营 光合作用 又能行 动而摄取食物 植物学 藻类中的 裸藻 无细胞壁 动物学 原生动物 中的眼虫 摇蚊唾液腺染色体 多线染色体 10 x40 x 肝癌切片 癌细胞间的大小和形态不一致 有时出现体积很大的 瘤巨细胞 细 胞间的界限不清 排列紊乱 出现巨核 双核 多核或异形核 细胞核 体积增大等 胃腺癌切片 洋葱表皮细胞临时装片 番红染色 细胞壁 细胞核和多个液泡 1 首先认真观察生物标本 弄清它的基本形态特 征和重点观察部位的毗邻关系 2 用3H或2H铅笔绘图 注意各部位结构的比例关 系
13、 图的大小 位置 布局要恰当 3 线条要粗细均匀而连续 用铅笔打出小圆点 以点的疏密程度表示表示结构和明暗立体 4 要标注图上各部分结构名称 用直尺在图的一 边或两边引出平行线 各引线末端要齐正 生物绘图的要求和方法 实验二 细胞的活体染色及观察法 动植物细胞线粒体和植物细胞液泡的观察 实验原理 活体染色 是指使已离体的或刚被杀死的生 物体内的活细胞保持生活状态 再用活体染 料进行染色的一种方法 一般染液浓度很低 对活有机体细胞或组织能着色但又无毒 害 优点 可显示细胞结构 且不影响细胞生命 活动 用来研究生活状态下的细胞结构 生 理和病理状况 Janus Green B染色线粒体原理 由于线
14、粒体 mitochondrida 内具有细胞色素氧化酶系 能使詹纳斯绿保持在氧化状态 淡蓝绿色 在胞质区詹纳斯绿则被还原成无色 故能 特异地对线粒体进行活体染色 中性红染色液泡的原理 中性红为弱碱性pH指示剂 变色范围 pH6 4 8 0 由红变黄 中性或微碱性环境中 活植物 细胞能大量吸收中性红并转运到液泡中 由于液 泡内呈酸性 中性红可解离出大量阳离子而呈现 樱桃红色 而原生质和细胞壁一般不着色 死细胞中原生质变性凝固 细胞液不能维持在液 泡内 用中性红染色后 不产生液泡着色现象 相反 中性红的阳离子可与带有一定负电荷的原 生质及细胞核结合 而使原生质与细胞核染色 液泡 yepao 细胞质
15、中的泡状结构 外有液泡膜 其结 构和特征与细胞膜相似 具选择透过性 此膜将细胞液与 细胞质分隔开 液泡是植物细胞的显著特性之一 在幼年 的植物细胞中 液泡是不明显的 体积小但数量多 随着 细胞的生长 液泡逐渐扩大 最后彼此互相联合 形成一 个大的中央液泡 而将细胞质挤到四周 沿细胞壁成一薄 层 细胞核也常贴近细胞壁的一侧 在成熟的细胞中 液 泡可占据整个细胞的90 液泡是植物细胞的储藏器和排 泄器 可贮存营养物质 如蔗糖 无机盐等 液泡与植 物细胞渗透吸水有关 高等动物细胞中无明显的液泡 某 些单细胞的原生动物中的食物泡 伸缩泡 分别具有摄取 营养和排泄废物的功能 可以说是液泡的一种形式 目的
16、要求 1 学习活体染色的方法及原理 2 观察活细胞线粒体 植物细胞液泡系的形 态 数量及分布 内容与方法 一 线粒体永久切片观察 观察肝肾细胞线粒体永久切片 肝脏切片肾脏切片 肾小管管腔 二 线粒体活体染色观察 1 小麦根尖和人口腔上 皮细胞线粒体观察 取干净载玻片 滴詹 纳斯绿B于其上 用消 毒牙签刮取口腔上皮 细胞 取初生根尖 用 薄刀片小心纵切一切 面 含分生区和伸长区 染色15min 吸去染 液 滴Ringer氏液 盖 盖玻片 显微镜观 察 三 洋葱细胞液泡系的活体染色及观察 取干净载玻片 滴1 3000 的中性红于其上 取初 生根尖 用薄刀片小心纵 切一切面 分生区 伸长 区 染色15min 吸去 中性红染液 加Ringer液 盖盖玻片 观察 可见到被染成砖红色的中 央大液泡和周围的小液 泡 作业 1 小麦根尖分生区和伸长区线粒体的形 态和数量有无差异 并解释原因 2小麦根尖分生区和伸长区液泡的形态 和数量有何差异 并解释原因 实验三 DNA显色法 孚尔根反应及细胞 有丝分裂观察 实验原理 利用适度盐酸的水解作用 可将DNA分子中嘌呤 碱基与脱氧核糖之间的糖甙键打断 释放使嘌
