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1、仅供医疗专业人士参考 T790M血液检测 机遇与挑战 EGFR突变型肺癌生物学和靶向治疗认知时间表 Tan CS et al Lancet Oncol 2015 Sep 16 9 e447 59 基因检测改变了我们的临床实践 EGFR突变和ALK检测不被常规 推荐 除非不吸烟和小标本 观念改变 检测已经成为必须 腺癌 大细胞癌和组织学 类型不明确型NSCLC 应进行EGFR突变 ALK ROS1 广泛分子分析 BRAF V600E MET扩增和外显子14 点突变 RET重排 HER2突 变 PD L1检测 麟癌应该进行EGFR突变和ALK检测尤其在非吸烟 人群或小标本或混合病理类型的标本中 其
2、它检测 包括广泛分子分析 BRAF V600E MET扩增和外显子14 点突变 RET重排 HER2突变 和PD L1检测 分子检测技术也随之不断发展 金标准 手术标本 补充补充 细胞学标本血液标本 一 从组织检测发展到血液检测 二 从定性检测到未来定量检测 三 从单基因检测到多基因检测平台 已知位点 定性检测 已知位点 定量检测 T790M突变检测的标本类型 Pirker R et al J Thorac Oncol 2010 5 10 1706 1713 Savic S et al Br J Cancer 2008 98 1 154 60 中国非小细胞肺癌血液EGFR基因突变中国专家共识
3、中华医学杂志 2015 95 45 3721 3725 组织活检 肿瘤蜡片 细胞学标本 恶性胸水 血液标本 ctDNA 检测结果可靠 样本品质和肿瘤细胞含量 与组织样本接近 组织和胸水都取不到的患 者 推荐使用血液样本 侵入性 部分病人无法 取样 不是每个病人都有胸水无创 易采样 标本获得 分子检测金标准 检测结果可靠 无法获得组织时可作补充 DNA 片段化 假阴性较 多 需高敏感度技术 质量控制 可以使用 ARMS 方法 进行检测 可以使用ARMS 方法 进行检测 可以使用dPCR或NGS 等高灵敏度方法 技术平台 T790M突变检测的标本类型 血液检测 组织活检 肿瘤蜡片 细胞学标本 恶性
4、胸水 血液标本 ctDNA 检测结果可靠 样本品质和肿瘤细胞含量 与组织样本接近 组织和胸水都取不到的患 者 推荐使用血液样本 侵入性 部分病人无法 取样 不是每个病人都有胸水无创 易采样 标本获得 分子检测金标准 检测结果可靠 无法获得组织时可作补充 DNA 片段化 假阴性较 多 需高敏感度技术 质量控制 可以使用 ARMS 方法 进行检测 可以使用ARMS 方法 进行检测 可以使用dPCR或NGS 等高灵敏度方法 技术平台 Pirker R et al J Thorac Oncol 2010 5 10 1706 1713 Savic S et al Br J Cancer 2008 98
5、1 154 60 中国非小细胞肺癌血液EGFR基因突变中国专家共识 中华医学杂志 2015 95 45 3721 3725 液体活检 入围2015年度MIT 十大突破技术 Magic Leap Nano Architecture Car to CarProject LoonLiquid Biopsy Megascale Desalination Apple PayBrain organoidsSupercharged Photosynthesis Internet of DNA 概要 T790M血液检测 机遇 Biomarker类型 临床应用 T790M血液检测 挑战 T790M血液检测 优化
6、 血液检测Biomarker ctDNA 2 正常生长肿瘤细胞 3 循环肿瘤细胞 ctDNA功能 基于Oncogenic transformation方式在肿瘤转移方面发挥重要作用 ctDNA分布 广泛存在于血浆 脑脊液 唾液 尿液等 均已得到相关研究证实 Cheng FF et al Oncotarget 2016 7 30 Di Meo et al Molecular Cancer 2017 16 80 循环肿瘤DNA ctDNA 的特性 总量少 500 DNA拷贝数 200uL 血浆 ctDNA丰度低 0 01 1 比例较多 片段小 集中在170bp左右 Fraction of EGFR
7、 mutant in total cfDNA Number of EGFR M plasma samples 6 13 7 6 3 5 3 activating mutations T790M Newman et al Nat Med 2014 Taniguchi et al Clin Cancer Res 2011 Frank D et al Nat Med 2008 半衰期短 约为114min 2 小时 Half Life 来源于血液ctDNA的信息分类 定量分析和序列分析 Jonothan C M Wan et al Nature Review Cancer 2017 血液ctDNA检测
8、可用于肿瘤早期诊断 Phallen J et al Sci Transl Med 2017 9 本研究新建立一种超敏感 低出错的血液ctDNA检测方法 TEC Seq p 入组对象 健康人群 44例 乳腺癌 45例 结直 肠癌 42例 肺癌 65例 卵巢癌 42例 p 覆盖范围 58种常见驱动基因 7ng 29 ng 21 ng 66 ng 与传统NGS比较 TEC Seq测序出错率降低至 3 10 7 false positive mutation calls base P 0 0001 BC CC P 0 0001 血液ctDNA检测可用于临床疗效评估 Xue Y Jie W et al
9、Oncotarget 2016 7 15 ddPCR定量监测血浆中ctDNA显示 EGFR突变高丰度预示应用TKI疗效好会有较长PFS 精准定量检测 能够预测疗效 血液中的突变状态与疗效的关系 原始血液突变定量分析与疗效关系 vs P 0 167 vs P 0 020 vs P 0 454 EGFR 中位OS 月 血浆WT 23 8月 19 9 27 4 n 19 血浆MT 35 6月 26 9 44 1 N 54 EGFR 中位PFS 月 血浆WT 6 7月 5 0 8 4 n 19 血浆MT 12 5月 11 0 14 3 N 54 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 0123
10、024186 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 02472603612 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 0123024186 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 048247260361248 P 0 001 P 0 028 0 n 19 0 5 15 n 27 5 15 n 27 0 n 19 0 5 15 n 27 5 15 n 27 PFS PFS OS OS vs P 0 001 vs P 0 001 vs P 0 021 月 月 月 月 血液ctDNA检测可用于治疗动态监测 T790M 和 L858R在泰瑞沙治疗后1个月内已 无法检测到 影像
11、学证实泰瑞沙耐药时 T790M和原发 L858R重新出现 EGFR T790M 在影像学证实泰瑞沙耐 药时检测不到 但原发19del的水平升 高 进展期活检发现MET扩增 Chia PL et al Lung Cancer 2016 98 29 32 概要 T790M血液检测 机遇 Biomarker类型 临床应用 T790M血液检测 挑战 T790M血液检测 优化 挑战1 血液标本相对脆弱 非常容易受到外界干扰 造成假阴性 1 234 5 1 3号标本可用 4 5号严重溶血不可用 采血管选用不当 或温度过高或过低 或 运输过程剧烈摇晃 造成溶血或轻微溶血 重度的图示为脂血 溶血现象 患者身体
12、原因 造成脂血 影响cfDNA提取效率 挑战2 不同试剂盒对cfDNA提取效率 及cfDNA片段捕获能力不同 影响检出率 Sober L et al J Mol Diag 2016 Normanno N et al Oncotarget 2017 8 7 6种不同试剂盒对于cfDNA提取效率影响 6种不同试剂盒对于KRAS检出率的影响 6种不同试剂盒对于cfDNA片段捕获能力比较 QIAamp MinElute virus spin kits for DNA extraction 仅能捕获大片段DNA 检测敏感性仅有17 QIAamp circulating nucleic acid kits
13、 for DNA extraction 对于大 小片段DNA均有较好捕获能力 敏感性达到51 17 51 挑战3 AURA回顾性研究显示血检敏感性和特异性仅70 提示TKI耐药患者仅做血检不足以判断T790M突变状态 Plasma BEAming Tumor ARMS Exon 19 del Exon 19 del Exon 19 del 112 82 3 2 Exon 19 del 2478 97 5 L858R L858R L858R 63 86 3 5 L858R 10138 96 5 T790M T790M T790M 111 70 3 18 T790M 4740 69 0 Oxnar
14、d GR et al J Clin Oncol 2016 Oct 1 34 28 3375 82 较Cobas组织T790M检测 Cobas血液T790M检测存在一定比例假阴性 Cheng Ying et al 2017 CSCO 局部晚期或转移性NSCLC EGFR突变阳性 EGFR TKI治疗后进展 PS 0 2 EGFR T790M ve AZD9291 80mg qd 2线 PD N 2000 3000 ASTRIS研究 中国晚期NSCLC EGFR TKI耐药后T790M突变率 主要终点 OS 次要终点 PFS 安全性 T790M检测标本 组织或血液标本 PD 后获取的标本 标本获取
15、至标本检测最好 不要超过60天 T790M检测方法 中心实验室检测 cobas EGFR Mutation Test v2 393 27 5 1034 72 5 795 62 8 471 37 2 T790M血液检测突变率27 5 组织检测突变率62 8 挑战4 ctDNA检测平台难以兼顾检测敏感性和基因检测范围 Zhang et al 2017 WCLC abs JCES 01 25 ADELOS研究 对比4中血浆ctDNA检测T790M的检测平台 Osimertinib 80 mg 天 口服 第一次采血 收集 第N次血液 收集 Cobas Super ARMS Digital PCR NG
16、S T790M n 181 2次 进展 收集组织样本并进行 NGS检测 n 56 收集组织或细胞学样 本 NGS T790M n 75 收集组织样本并进行cobas检测 n 22 晚期 转移性 NSCLC 既往EGFR TKI治 疗进展 N 256 8家医院 3次4次5次6次 EGFR T790M占EGFR TKI获得性耐药的50 60 血浆ctDNA代表一种有前景的T790M供选择的检测方法 奥希替尼是一种具有CNS活性的第3代EGFR TKI 可有效地并选择性地抑制EGFR突变和EGFR T790M 耐药突变 ADELOS研究 NCT 02997501 目的是评估4种利用血浆ctDNA检测T790M的检测平台 从而验证它们 在中国人群的临床应用 挑战5 血液检测难以发现的一些耐药突变 MET amplificatio n 3 Small cell MET 1 Small cell 1 Small cell T790M 2 MET T790M 3 Unknow n 18 HER2 8 T790M 60 HER2 T790M 4 11例c Met 过表达患者接受TKI c Met 抑制
