《19 病毒对先天性心脏病先天感染的探证及电镜观察》由会员分享，可在线阅读，更多相关《19 病毒对先天性心脏病先天感染的探证及电镜观察（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、119 病毒对先天性心脏病先天感染的探证及电镜观察作者：王晓明张国成韩美玉 【关键词】先天性心脏病 关键词: 先天性心脏病;微小病毒 B19;显微镜检查，电子 摘要: 目的证实部分先天性心脏病（CHD）患者心肌组织中微小病毒 B19 系先天感染所致，并观察 CHD 心肌组织超微结构变化.方法采用 ELISA，PCR，原位杂交（ISH）及透射电镜等技术，对42 例 CHD 患者及对照组 22 例风湿性心瓣膜病患者的外周血、活检心肌组织分别进行 B19-VP2-IgM，B19-DNA 的检测，并用透射电镜对心肌细胞的超微结构进行观察.结果CHD 组中 B19-VP2-IgM 阳性 3 例（7%）
2、，对照组中阳性 1 例（ 5%） ，两组间无显著差异（P0.05）;CHD 组中 B19-DNA 阳性 8 例（19%） ，与对照组均阴性相比有显著性差异（P0.05）.B19-DNApositiverateswere19.1%and0%incardiactissueofCHDandcontrolrespectively.Nosignificantdifferencewasseen（P0.05）.42 例 CHD心肌组织中，B19-DNA 阳性 8 例，阳性率 19%，对照组中 B19-DNA 均阴性，两组比较有显著性差异（P0.01，Tab1）.且 8 例心肌标本中 B19-DNA 对应的血
3、清 IgM 均阴性，其中 B19-DNA 阳性中有 1 例为 23 天的新生儿. 2.2B19DNA的 ISH，心肌组织形态及超微结构变化 62.2.1CHD 心肌组织的 ISH 结果对巢式 PCR 检出心肌中B19-DNA 阳性 8 例标本进行 ISH 检测，结果发现有 5 例心肌组织中有 B19-DNA 的阳性信号，阳性信号主要集中于心肌细胞核内，呈紫蓝色颗粒状或斑块状，较多集中在核膜下.而血管内皮与间质细胞未见阳性信号（Fig1）. 表 1 两组血清、心肌中 B19-IgM，B19-DNA 阳性结果比较略 2.2.2CHD 的心肌组织形态及超微结构 CHD 心脏常规 HE 染色，光镜下未
4、见心肌细胞肿胀、萎缩，也未见淋巴细胞浸润及病毒包涵体出现等急性炎症改变.对 2 例（含 1 例新生儿）ISH 强阳性信号心肌标本，作透射电镜观察，未发现心肌细胞有明显的胞膜、细胞器的损害，胞质内及核内未见有 23mm 大小的病毒样颗粒存在（Fig2，3）.3 讨论 近年来确认遗传易感性和环境致畸原的相互作用是 CHD 患者主要发病病因，而后者主要是宫内病毒感染，目前除风疹病毒外，其他病原体与先天性心脏病的关系尚无定论.国外资料报道2-7，9 微小病毒 B19 的先天感染可导致多种先天异常，但与先天性心脏病关系的研究，目前仅有部分报道8 ，特别是对先天性心脏病心肌组织中证实有 B19 病毒感染，
5、而又缺乏先天性感染的证据 .为7进一步明确 B19 病毒感染与先天性心脏病发病的关系，为我们提出了新的课题. 由于该实验取材困难，即能反映宫内先天性感染的新生儿心脏组织及对应的外周血标本的收集不易，而特别是作为非先天性心脏畸形的新生儿及年幼儿正常对照组心脏组织标本更是无法获得，故仅能取年龄组偏大的后天获得性疾病风湿性心瓣膜病的心脏组织及对应的外周血标本作对照.结果表明，CHD 活检心肌组织中 B19 病毒感染率为 19.1%，与对照组比较有显著性差异并与既往对先心病石蜡心脏标本的检测结果相一致8;通过配对外周血 B19-IgM 检测，发现反映 B19 病毒近期感染指标的 B19-IgM 在 C
6、HD 中阳性率为4.7%，对照组中阳性率为 4.1%，两组间无差异，而 CHD 组中 8 例心肌组织 B19-DNA 阳性患者的血 B19-IgM 均阴性，反映了心肌组织中 B 19-DNA 系既往感染所致，其中 1 例 23 日龄的新生儿 CHD 中B19-DNA 阳性而 B19-IgM 为阴性，支持 B19-DNA 系先天感染所致. 该标本通过 ISH 证实了 B19-DNA 定位于心肌细胞核内，而同一标本的光镜下心肌组织的病理形态学观察，未见有心肌组织的各种急慢性炎症改变.Morey10等对胎儿组织通过免疫细胞化学及原位杂交的检测 B 19DNA 阳性标本进行电镜观察，发现有大量直径平均
7、为 23nm的病毒颗粒，从超微结构的形态水平来确定 B19 病毒.为此，我们对ISH 证实了 CHD 心肌组织 B19-DNA 阳性标本通过透射电镜进一步8超微结构的观察，未见有心肌细 胞器的损害及直径 23mm 的 B19 病毒样颗粒存在，故说明 ISH中 B19-DNA 阳性信号可能系 B19 病毒整合于心肌细胞核内，B19病毒基因是否参予致畸基因的表达，有待于进一步研究11 ，此多技术的研究提高了对 B19 病毒感染检测的敏感性及直观性，可反映病毒对组织细胞的感染状态12.总之，通过 ELISA 检测 CHD外周血中 B 19-IgM，心肌组织中 B19-DNA 的 PCR 检测及 ISH 的定位、B19-DNA 阳性心肌的组织病理学观察及透射电镜技术从组织细胞及病毒颗粒的超微结构的研究，未发现有心肌细胞的损害，未发现有 B19 大小病毒样颗粒存在，特别是对 1 例 23 日龄的新生儿的上述系列研究进一步证实了 CHD 心肌组织中 B19-DNA 可能是先天性感染所致. 图 1图 3 略 参考文献: 1HeegaardED，HornslethA.Parvovirus:Theexpandingspec-trumofdiseaseJ.ActaPaediatr，1995;84:109-117. 2WeilandHT ， Vermey-KeersC，Salima
