（精品教育）课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

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1、课题课题2 2 土壤中分解尿素的细菌土壤中分解尿素的细菌 的分离与计数的分离与计数 【课题目标课题目标】 1、通过对比牛肉膏蛋白胨培养基与本课题所 用培养基，引出选择培养基，进而从土壤中分 离能够分解尿素的细菌； 2、通过对稀释涂布平板法引申，进而统计每 克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌； 3、通过举例，明确对照原则的含义及种类。 【教学重难点教学重难点 】 1、目的菌株的分离、计数； 2、对照原则的含义及种类 一、复习就知一、复习就知 1 1、稀释涂布平板法的原理、应用是什么？、稀释涂布平板法的原理、应用是什么？ 2 2、制备培养基分为哪些步骤？上节课我们学习、制备培养基分为哪些步骤？上节

2、课我们学习 了哪个培养基？了哪个培养基？ （1）稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养 。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个 细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 (2)观察菌落特征，计数。 （1）计算、称量、融化、灭菌、倒平板； （2）牛肉膏蛋白胨培养基。（培养细菌） 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5 .0g 琼脂 20 .0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1 000 mL 。本课题使用的培养基配方 KH2PO4 1 .4g Na2HPO4 2

3、.1g MgSO47H2O 0 .2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0 g 琼脂 15.0 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。 2 2、牛肉膏蛋白胨培养基适合培养什么样的微、牛肉膏蛋白胨培养基适合培养什么样的微 生物？本课题使用的培养基适合培养什么样的生物？本课题使用的培养基适合培养什么样的 微生物？微生物？ 1 1、牛肉膏蛋白胨培养基的碳源、氮源是什么？、牛肉膏蛋白胨培养基的碳源、氮源是什么？ 本课题使用的培养基的碳源、氮源是什么？本课题使用的培养基的碳源、氮源是什么？ 3 3、本课题选用的培养基有选择作用吗？如何、本课题选用的培养基有选择作用吗？如何 选择？选择？ 牛

4、肉膏、蛋白胨；葡萄糖、尿素 大多数细菌；分解尿素的细菌 有选择作用；只有分解尿素的细菌才能生存。 2 2、分离培养微生物的一般方法？、分离培养微生物的一般方法？ 1 1、选择培养基：在微生物学中，将允许特定、选择培养基：在微生物学中，将允许特定 种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种 类微生物生长的培养基，称做选择培养基（类微生物生长的培养基，称做选择培养基（ selective mediaselective media）。）。 稀释涂布平板法；当样品的稀释度足够高时，培稀释涂布平板法；当样品的稀释度足够高时，培 养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中

5、养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中 的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推 测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准 确，一般选择菌落数在确，一般选择菌落数在3030030300的平板进行计数的平板进行计数 。 平板划线法和稀释涂布平板法哪种可以计数？平板划线法和稀释涂布平板法哪种可以计数？ 计数的原理是什么？计数的原理是什么？ 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中 的细菌数。在对应稀释倍数为的细菌数。在对应稀释倍数为1010的的6 6次方倍的培次方

6、倍的培 养基中，得到以下两种统计结果。养基中，得到以下两种统计结果。 1.1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计 的菌落数为的菌落数为230230。 2.2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计 的菌落数分别为的菌落数分别为2121、 212212和和256256，该同学以这三，该同学以这三 个平板上菌落数的平均值个平板上菌落数的平均值163163作为统计结果。作为统计结果。 你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这 两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改两

7、位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改 进？进？ 第一位同学只涂布了第一位同学只涂布了1 1个平板，没有设置重复个平板，没有设置重复 组，因此结果不具有说服力；第二位同学涂组，因此结果不具有说服力；第二位同学涂 布的平板中其中一个的结果与另两个相差太布的平板中其中一个的结果与另两个相差太 远，说明在操作中可能出现了错误，因此不远，说明在操作中可能出现了错误，因此不 能简单地求平均值。这两位同学的实验都需能简单地求平均值。这两位同学的实验都需 要改进。改进：至少涂布两个平板并且菌落要改进。改进：至少涂布两个平板并且菌落 数相接近，才有说服力与准确性。数相接近，才有说服力与准确性。 1 1、稀释

8、涂布平板法的优缺点？、稀释涂布平板法的优缺点？ 2 2、还有什么计数法？、还有什么计数法？ 优点：统计活菌数；缺点：统计的菌落数往往比活菌的 实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时， 平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用 菌落数而不是用活菌数来表示。 显微镜直接计数法。缺点：不能区分死菌和活菌。 对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条 件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除 任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试 的条件引起相应的结果。 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实 验结果的影响，提高实验结果的可信度。（单一变量 ） 1 1空白对照：空白对照： 指不

9、做任何实验处理的对象组。例如，在指不做任何实验处理的对象组。例如，在DNADNA的的 鉴定实验中，两支试管均加入等量（鉴定实验中，两支试管均加入等量（5ml5ml）的）的 2mol/L2mol/L的的NaClNaCl和和4ml4ml的二苯胺试剂，一支试管加的二苯胺试剂，一支试管加 入入DNADNA提取物，另一支试管则什么都不加，一起提取物，另一支试管则什么都不加，一起 进行沸水浴，比较它们的变化。那么，前者为实进行沸水浴，比较它们的变化。那么，前者为实 验组，后者为典型的空白对照组。验组，后者为典型的空白对照组。 2 2相互对照：相互对照： 指不另设空白对照，而是设有几个指不另设空白对照，而是

10、设有几个 实验组相互对比来进行研究，如不同温度对果胶实验组相互对比来进行研究，如不同温度对果胶 酶活性的影响，选取了多个系列梯度温度进行处酶活性的影响，选取了多个系列梯度温度进行处 理，它们之间成为相互对比对照关系。理，它们之间成为相互对比对照关系。 3条件对照：指给实验对象施以某些额外的实验处理 。如高中必修二教材中的艾弗里在探究什么是遗传物 质的实验中，用了“S型菌的DNA、S型菌的蛋白质或 荚膜多糖、S型菌的DNA加DNA酶”分别加入到培养 了R型细菌的培养基中，其中的最后一组处理就是条件 对照。 4自身对照： 指实验与对照在同一对象上进行，不另 设对照组。如“植物细胞质壁分离和复原”实

11、验，就 是自身对照。自身对照关键是要看清楚实验处理前后 现象变化的差异，实验处理前的对象状况为对照组， 实验处理后的对象变化则为实验组。 在做本课题的实验时，A同学从对应106倍稀释的培 养基中筛选出大约150个菌落。但是，其他同学在 同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。其他同学 认为A同学的结果有问题。他们分析可能是A同学 的培养基被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他 含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该 培养基上生长。但是，A同学确信自己的实验操作 准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是 因为自己所选用的土壤样品不同。但是，A同学在 设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿

12、不 出令同学们信服的证据。你能通过设置对照，帮助 A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？ 其他同学用与其他同学用与A A同学一样的土样进行实验。同学一样的土样进行实验。 1 1、所取土样不同或操作失误、所取土样不同或操作失误 将将A A同学配置的培养基在不加土样的情况下进行培同学配置的培养基在不加土样的情况下进行培 养，作空白对照。养，作空白对照。 2 2、培养基污染、培养基污染 例子：运用对照原则，怎么证明本课题所用的选择培养例子：运用对照原则，怎么证明本课题所用的选择培养 基有筛选出一些菌落的选择作用？基有筛选出一些菌落的选择作用？ 与牛肉膏蛋白胨培养基比较，选择培养基菌落数如果比

13、牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数少，则证明有选择作用。 五五. .课外延伸课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 酚红指示剂。培养某种细菌后，如果酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PHPH 升高，指示剂将变红，说明该细菌能够升高，指示剂将变红，说明该细菌能够 分解尿素分解尿素。 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水 用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝伊红美蓝 培养培养 基上培养，大肠杆菌基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色菌落呈现黑色，通过记述得出，通过记述得出 水样中大肠杆菌的数量。

14、水样中大肠杆菌的数量。 大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心 , ,有或无金属光泽有或无金属光泽 大肠杆菌在大肠杆菌在伊红美蓝琼脂伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 1.使用选择培养基的目的是（ ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素 实践训练实践训练 C D 3.下列说法不正确的是（ ） A.科学家从7080度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶 B.统计某一稀释度的5个平板

15、的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。 4.下列关于土壤取样的叙述错误的是（ ） A.土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤 B.先铲去表层土3cm左右，再取样 C.取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌 D.应在火焰旁称取土壤 B C 5某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上 的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数 是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）( ) A.2.34108 B.2.34109 C.234 D.23.4 B