《小干扰rna抑制hcv感染细胞中病毒复制的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小干扰rna抑制hcv感染细胞中病毒复制的研究（56页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、尘王拉趔控剑旦g Y 盛鎏麴胞主痘盎筮剑盟丑窒 论文作者签名： 指导教师签名： 论文评阅人1 ： 评阅人2 ： 评阅人3 ： 评阅人4 ： 评阅人5 ： 答辩委员会主席： 委员l ： 委员2 ： 委员3 ： 委员4 委员5 ： 答辩日期： 、 出I 乞叫 J 】 j l 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的 研究成果，也不包含为获得逝堑太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并
2、表示谢 意。 学雠文储签名却伊终签字吼如，1 ，年3 月，卜 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解浙江太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本 论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以将学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手 段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名：埘由建 l 导师签名： 硝、胄 签字日期：小f 1 ，年主月7 日 签字日期：劬，耖年3 月2 ，日 浙江大学硕士学位论文致谢 致谢 荏苒时光，如梭岁月。转瞬之间，硕士学业即将结束。其间辛苦，其中收获， 此跋
3、千言，不能尽述。值此撰文之际，对所有良师益友，表以敬谢。 衷心感谢李兰娟院士以及传染病诊治国家重点实验室的各位老师给我提供这 个学习的平台，以及在过去两年多时间里对我的帮助。 衷心感谢我的导师陈智老师，是他引领我踏入科研的大门，训练我的科研思 维，传授我丰富的专业知识和人生智慧，在此表示我崇高的敬意。 衷心感谢本课题组的楼国华、刘艳宁、陈峰、李淑萍、郑敏、羊正纲等几位 老师在实验上给予的指导和帮助。 衷心感谢我的师兄师姐们给予的关心和帮助，他们有阳乔、徐航娣、卓婷婷、 宋广忠、刘伟侠、杨帆、施毓、曹清毅、李婕、白明辉、谈旭斐等。 衷心感谢本课题组的刘东成、尹春本、王静，万天红、吴珊珊等工作人员
4、提 供的帮助。 衷心感谢何继亮老师在论文写作上给予的专业指导。 衷心感谢周林福老师以及他的学生们。 衷心感谢其他所有未提及姓名的老师、同学和朋友们的支持和协助。 衷心感谢各位专家在百忙之中抽出宝贵的时间评阅我的论文和参加我的论文 答辩。 最后，还要特别感谢我的父母，谢谢你们一直给予我的关爱和鼓励。 浙江大学硕士学位论文中文摘要 小干扰R N A 抑制H c v 感染细胞中病毒复制的研究 浙江大学医学院 2 0 0 9 级硕士研究生 导师 。旷V H 内科学( 传染病学) 邢小康 陈智教授 摘要 研究目的：观察s i R N A 对H C V 感染细胞中病毒复制的抑制作用以及靶向H C V 基
5、因组不同区段的s i R N A 抗H C V 的联合效应。 研究方法：利用H C V 全基因组质粒体外转录成I 矾A ，脂质体转染H u l l 7 5 1 细胞。 收集转染细胞含病毒颗粒的上清培养液，感染正常H u l l 7 5 1 细胞以构建H C V 感 染细胞模型，通过P C R - 琼脂糖凝胶电泳和W r e S t e mb l o t 检测感染细胞内H C VI 矾A 和H C V 核心蛋白的表达。再用不同浓度的I F N 0 c 2 b 处理感染细胞，荧光定量P C R 检测处理后细胞内H C VI 矾A 相对量。设计针对H C V 四个基因区段( C o r e 、N S
6、 3 、 N S 4 B 、N S 5 B ) 的s i R N A 序列，化学合成后分别以单用和两两组合的方式并以不 同浓度( 0 1I l M ，1 01 1 M ，1 0 01 1 M ) 转染H C V 感染细胞，用P C R - 琼脂糖凝胶电泳 和荧光定量P C R 技术检测各组细胞内H C V 相对量。通过荧光定量P C R 检测s i R N A 转染细胞内P K Rm R N A 水平和C C K 8 试验检测转染细胞活性，进而分析所用 s i R N A 的非特异性作用。： 研究结果：H C V 感染细胞内检测到H C VR N A 和H C v 核心蛋白的表达，H C V
7、可 以被I F N 0 【2 b 有效抑制，抑制作用呈剂量依赖性。4 种s i I 斟A ( s i C o r e 、s i N S 3 、s i N S 4 B 、 s i N S 5 B ) 以1 01 1 M 和1 0 01 1 M 浓度单个转染时，感染细胞内H C V 量与对照组相比 均显著下降( 氏0 0 1 ) 。在O 1n M 和1 0I 州浓度时，s i c o r e 、s i N S 3 、s i N s 5 B 两两 组合转染组细胞内H C V 量相对任一单用组均明显下降( p o 0 1 ) 。分别转染4 种 s i R N A 的细胞内P K R m R N A 水
8、平无明显变化，并对细胞活性无明显影响。 I I I 中文摘要 s i I 斟A 能够有效抑制H c V 感染细胞中病毒的复制。 s i N S 5 B 两两组合应用具有明显的联合抗病毒效应。 u 1 1 7 5 1 细胞；丙型肝炎；H C V 感染细胞 浙江大学硕士学位论文英文摘要 I n h i b i t i o no fh e p a t i t i sCV i r u sr e p l i c a t i o nb ys m a l l i n t e r f e r i n gR N A i nc e l l si n f e c t e db yH C V P o s t g r
9、a d u a t es t u d e n ta o I 诳n gX i n g S u p e I V i s o r P r o f Z h iC h e n I n s t i t u t eo fI n f e c t i o u sD i s e a s e s ，M e d i c a lS c h o o lo fz h e ji a n gu n i V e r 爷哆y A b s t r a c t O b j e c t i V e ：T bo b s e et h ei 1 1 l l i b i t i o ne 任e c t o fs i R N Ao nV i m
10、 sr e p l i c a t i o ni I lH e V i n f e c t e dc e l l s 嬲w e l la L sj o i n te 妇F e c t so ft 1 1 es i I 己N Ai nd i f r e r e ms e c t i o n so ft a 玛e t i n gH C V g e n o m eo nH C V M e m o d s ：H C Vg e n o m ep l a S m i dw a S 仃a n s c r i b e di n t oI 矾Ai nV i 仃o ，a 1 1 dH u h - 7 5 1c e
11、 l l s w e r et 眦s f e c t e db yl i p o f e c t i l l T h ec u l t u r es u p e m a ：t a n tc o n t 枷n gV i m sp a n i c l e s o f 仃a 1 1 s f e c t e dc e l l sw a sc o l l e c t e dt oi I l ：f e C tr l o m a lH u h 7 5 1c e U st 0c o n s t l l K tH C V i 1 1 f e c t i o nc e l lm o d e l ，锄dt h ee
12、 x p r e s s i o no fH C VR N A 锄dH C Vc o r ep r o t e mi nt h e i 疵c t I 甜c e l l sw e r ed e t e 曲e du s i n gP C Ra g a r o s eg e le l e c 订o p h o r e s i sa n dW b S t e mb l o t r e s p e c t i V e l y T h e ni 疵c t e dc e l l sw e r e 仃e a t e d 、析md i 虢r e n tc o n c e n t I a ：t i o n so
13、fI F N a 一2 b ， a r l dt h er e l a t i V e 锄o u mo fi I l 仃a c e l l u l a rH C VI 斟Aw 2 u sd e t e c t e db yn u o r e s c e n c e q u 锄t i t a t i V eP C R s i I 矾As e q u e n c e ss p e c i f i ct of o u rg e n es e g m e n t So fH C V ( C o r e ，N S 3 ， N S 4 B ，N S 5 B ) w e r ed e s i g n e d
14、a n dc h e m i c a l l ys y n t h e s i z e d ，a 1 1 dt l l e nw e r eu s e ds i n 9 1 y a I l di 1 1p a i rr e s p e c t i V e l yt ot r a n s f e c tH C Vi n f e c t e dc e l l s 、访t l ld i 船r e n tc o n c e n t r a t i o n ( 0 1n M ，1 0n M ，1 0 0n M ) R e l a t i V e 锄o u n t so fi 1 1 t r a c e
15、l l u l a rH C Vi ne a c hg r o u pw e r e d e t e c t e dw i t l lP C Ra g a r o s eg e le l e c 仃o p h o r e s i sa n dn u o r e s c e n c eq u a n t i t a t i v eP C R P K R m I 矾Ao fs i I 矾A 仃a 1 1 s f e c t e dc e l l s 、 ，a Sd e t e c t e db yn u o r e s c e n c eq u a n t i t a t i V eP C R a
16、 I l d m ea c t i v i t ) ，o f 托叽s f e c t e dc e l l sw a u sm e a S u r e d 研t hC C K 一8t e S tt 0 姚e ra I l a l y z e V 浙江大学硕士学位论文 英文摘要 n o n s p e c i f i ce 疵C t so fs i R N A R e s u l t s ：T h e r ew e r ee x p r e s s i o n so fH C VR N Aa n dH C Vc o r ep r o t e i nd e t e c t e di nH C V i n f e c t e dc e l l s ，a n dH C Vc o u l db ee 船c t i v e l yi r l l l i b i t e db yI F N 0 【- 2 bi nd o s ed 印e n d
