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1、 实实 验验 5 5 细菌培养法细菌培养法 目的要求 n n 1 1、学习和掌握细菌分离与培、学习和掌握细菌分离与培 养的各种基本技术；养的各种基本技术； n n 2 2、进一步熟悉和、进一步熟悉和掌握无菌操掌握无菌操 作技术作技术。 实验材料实验材料 n n 标本和菌种：大肠杆菌培养物、葡萄球标本和菌种：大肠杆菌培养物、葡萄球 菌培养物、变形杆菌培养物、枯草杆菌菌培养物、变形杆菌培养物、枯草杆菌 培养物；培养物； n n 实验器材：接种环、接种针、酒精灯；实验器材：接种环、接种针、酒精灯； n n 培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液 体培养基、半固体培养基；
2、体培养基、半固体培养基； n n 常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄 、玻璃涂棒等（见图、玻璃涂棒等（见图6 6）。）。 图6 接种工具接种工具 细菌接种的基本程序细菌接种的基本程序 灭菌接种环灭菌接种环 沾取标本沾取标本 接种接种 灭菌接种环灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境 （一）细菌的分离方法 n n 培养基培养基：固体平板培养基：固体平板培养基 n n 分离方法：分离方法：划线分离法划线分离法 n
3、n 意义：意义：该法主要是借助划线而将混杂的该法主要是借助划线而将混杂的 细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能 固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌 落，以达到分离纯种的目的。落，以达到分离纯种的目的。 细菌的分离培养方法 微生物的分离微生物的分离平板划线法平板划线法 n n 1.1.分区划线法：分区划线法： n n 2.2.连续划线法：连续划线法： 微生物的分离平板划线法 分区划线法分区划线法 第一区划线第一区划线 灭菌接种环灭菌接种环 第二区划线第二区划线 灭菌接种环灭菌接种环 第三区划线第三区划线 灭菌接种环灭菌接种环 连续
4、划线法连续划线法 （二）细菌的接种法 n n 当细菌分离成纯种后，常需要接种到相当细菌分离成纯种后，常需要接种到相 关的培养基中，以测试其各种生物学性关的培养基中，以测试其各种生物学性 状。一般可用斜面、半固体、液体培养状。一般可用斜面、半固体、液体培养 基来检验细菌的培养特性，相应培养基基来检验细菌的培养特性，相应培养基 的接种方法有三种。的接种方法有三种。 斜面接种法 n n 培养基：培养基：斜面固斜面固 体培养基；体培养基； n n 接种方法：接种方法：斜面斜面 培养基接种法；培养基接种法； n n 用途：用途：扩增细菌扩增细菌 、保存菌种；或、保存菌种；或 用于观察其某些用于观察其某些
5、 生化特性。生化特性。 琼脂斜面培养基接种法琼脂斜面培养基接种法 穿刺接种 n n 半固体培养基：半固体培养基： n n 接种方法：穿刺接接种方法：穿刺接 种法。用种法。用接种针接种针垂垂 直地穿入培养基中直地穿入培养基中 心至底部心至底部 n n 然后沿着然后沿着原接种线原接种线 将针拔出将针拔出 n n 用途：检验细菌的用途：检验细菌的 运动性或观察细菌运动性或观察细菌 的生化反应。的生化反应。 液体培养基接种法 n n 培养基：培养基：液体培养基液体培养基 ： n n 接种方法：接种方法：液体接种液体接种 法法 n n 从斜面菌种接入液体从斜面菌种接入液体 培养液培养液 n n 从液体培
6、养液接入液从液体培养液接入液 体培养液体培养液 n n 用途：用途：扩增细菌，用扩增细菌，用 于观察细菌的生长特于观察细菌的生长特 性或测定其生化特性性或测定其生化特性 。 细菌培养法细菌培养法 n n 一般培养（需氧培养）：一般培养（需氧培养）： 培养温度：培养温度：3737（采用恒温培养箱）（采用恒温培养箱） 培养时间：培养时间：181824h24h n n 二氧化碳培养法：二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培烛缸法、二氧化碳培 养箱养箱 n n 厌氧培养法：厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌厌氧培养箱、厌氧袋、厌 氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 细菌在细菌
7、在固体固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象 n n 菌落：菌落： 定义：定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形 成单一肉眼可见的细菌集团。成单一肉眼可见的细菌集团。 菌落特征：菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透大小、形状、边缘、颜色、表面、透 明度、湿润度、黏度、溶血性明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：菌落类型：光滑型（光滑型（S S）、粗糙型（）、粗糙型（R R）、黏液型）、黏液型 （M M） n n 菌苔：菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物 。 菌 落 菌落与菌苔菌落与菌苔 细菌在细菌在液体
8、液体培养基中的生长现象培养基中的生长现象 n n 混浊：多见于兼性厌氧菌混浊：多见于兼性厌氧菌 n n 沉淀：多见于厌氧菌沉淀：多见于厌氧菌 n n 菌膜：多见于专性需氧菌菌膜：多见于专性需氧菌 细菌在液体培养基中的生长现象细菌在液体培养基中的生长现象 液体培养基的细菌生长 细菌在细菌在半固体半固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象 n n 有鞭毛细菌：有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向在培养基中沿穿刺线并向 外扩散生长，穿刺线边缘模糊。外扩散生长，穿刺线边缘模糊。 n n 无鞭毛细菌：无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线只沿穿刺线生长，穿刺线 边缘清晰。边缘清晰。 无动力 有动力 穿刺接种生长现象 结果观察时间安排 n明天观察，记录结果； n完成实验报告。
