鹅肝脏差异表达基因的分离和鉴定暨茶多酚对朗德鹅肥肝抗氧化性能影响的研究(1)

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1、分类号 华中农业大学博士学位论文 鹅肝脏差异表达基因的分离和鉴定 密级 暨茶多酚对朗德鹅肥肝抗氧化性能影响的研究 l 3S31 7 I s o l a t i o na n dI d e n t i f i c a t i o no f D i f f e r e n t i a l l yE x p r e s s e dG e n ei n L i v e ro fG o o s e & S t u d yo nt h eE f f e c t so fT e a P o l y p h e n o l so n A n t i - o x i d a t i o nC a p a b i

2、 l i t yo f O v e r f e e d i n gL a n d e s 博士研究生:赵阿勇 指导教师:何瑞国教授 指导小组:熊远著院士 专业:动物遗传育种与繁殖 获得学位名称:农学博士 龙良启教授 刘永定研究员 杨利国教授 齐德生教授 伍晓雄副教授 研究方向:动物分子营养学 获得学位时间: 华中农业大学动物科技学院 二oo 七年六月 湖北省科技攻关项目 良种鹅规模化繁育、饲养及产品加工关键技术研究与开发 ( 2 0 0 5 心0 5 A 0 8 ) 湖北省十一五科技攻关项目 鹅新品种( 系) 选育及高效健康养殖技术研究与开发 ( 2 0 0 6 A A 2 0 2 A 0 3

3、 ) 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 馐翰 如需保密,解密时间 埘年毛只i 灿 是否保密 f 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他入已经发 表或撰写过的研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料,指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意 研究生摊乒7 霉隽时间:钟矿产莎月,尹日 学位论文使用授权书 学生必须按 印刷版和电 及保存、汇 肖播学位论 学位论文作者签名:

4、赵7互绍导师签名:一签名魄硎7 年肌尹日签名吼7 钐月尸日v | 目录 第一部分鹅肝脏差异表达基因的分离和鉴定。1 摘要2 A b s t r a c t 缩l 咯词表。6 1 文献综述7 1 1 动物数量性状的分子基础8 1 2 基因差异表达的研究方法。9 1 3m I A 差异显示技术及差异表达基因验证的方法1 2 1 4 获取全长c D N A 的方法1 4 1 5 反转录实时定量P C R ( r e a l - t i m eq u a n t i t a t i v eR T - P C R ) 技术l5 1 6 生物信息学的发展和应用l6 1 7 鹅肥肝形成机制的研究进展1 7

5、2 研究的目的和意义1 9 3 材料与方法2 0 3 1实验材料2 0 3 1 1 试验鹅的饲养和组织样品的收集2 0 3 1 2 主要试剂来源与配制2 0 3 1 3 菌株2l 3 1 4 主要仪器和设备2l 3 2 实验方法2 2 3 2 1 总R N A 的提取、D n a s e i 处理和R N A 质量检测2 2 3 2 2 反转录和m R N A 差异显示2 3 3 2 - 3 聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染2 4 3 2 4P C R 产物的重扩增、纯化、克隆和测序2 5 3 2 5R A C E P C R 克隆基因全长c D N A 2 6 3 2 6 差异表达基因的反转录实时定

6、量P C R 鉴定2 7 3 2 7 差异显示E S T 的相对定量R T - P C R 组织表达分析2 8 3 2 8 核酸序列和氨基酸序列分析2 8 4 结果与分析2 9 4 1 总R N A 及反转录c D N A 模板的检测2 9 4 1 1 总R N A 的甲醛变性胶电泳检测结果2 9 4 1 2e D N A 模板质量及引物扩增效果的检测2 9 4 2 鹅肝脏差异表达基因的分离3 0 4 3 基因8 2 1 6 的克隆、鉴定、序列分析和组织表达特征分析3 1 4 3 1 基因8 2 1 6 全长c D N A 的获得3 l 4 3 2 实时定量P C R ( r e a l t

7、i m eP C R ) 的鉴定3 2 4 3 3 核苷酸序列分析3 3 4 3 4 基因8 2 1 6 在其它组织中的表达特征3 4 4 3 5 关于s e l e n b p 基因3 4 4 4 基因8 4 0 7 的克隆、鉴定、序列分析和组织表达特征分析。3 5 4 4 1 基因8 4 0 7 全长C D S 的获得3 5 4 4 2 实时定量P C R ( r e a l t i m eP C R ) 的鉴定3 6 4 4 3 核苷酸和氨基酸序列分析3 6 4 4 4 基因8 4 0 7 在其它组织中的表达特征3 8 4 4 5 关于i d h l 基因一3 9 4 5 基因9 1 0

8、 5 的克隆、鉴定、序列分析和组织表达特征分析4 0 4 5 1 基因910 5 全长C D S 的获得4 0 4 5 2 实时定量P C R ( r e a l t i m eP C R ) 的鉴定4 0 4 5 3 核苷酸序列分析4 l 4 5 4 基因9 1 0 5 在其它组织中的表达特征4 3 4 5 5 关于孔活嚣2 基因4 4 4 6 基因9 3 0 2 的克隆、鉴定、序列分析和组织表达特征分析4 5 4 6 1 基因9 3 0 2 的c D N A 克隆4 5 4 6 2 实时定量P C R ( r e a l t i m eP C R ) 的鉴定4 6 4 6 3 基因9 3

9、0 2 在其它组织中的表达特征4 6 4 6 4 关于C Y P 7 A J 基因4 7 4 7 基因7 5 0 1 的克隆、鉴定、序列分析和组织表达特征分析4 9 4 7 1 基因7 5 01 的c D N A 克隆4 9 4 7 2 实时定量P C R ( r e a l t i m eP C R ) 的鉴定4 9 4 7 3 基因7 5 0 1 在其它组织中的表达特征5 0 4 7 4 关于M E J 基因5 l 4 8 基因7 1 0 2 的克隆、鉴定、序列分析和组织表达特征分析5 1 4 8 1 基因71 0 2 的c D N A 克隆5l 4 8 2 实时定量P C R ( r e

10、 a l t i m eP C R ) 的鉴定5 2 4 8 3 基因7 1 0 2 在其它组织中的表达特征5 3 4 8 4 关于M D H l 基因5 3 。5 5 5 5 。5 5 。5 6 6 0 6 6 6 l ; 6 8 6 8 6 8 6 8 第二部分茶多酚对超饲养朗德鹅脂肪代谢及肝脏抗氧化性能影响的研究7 0 摘要7 0 A b s t r a c t 7 2 1 文献综述7 4 1 1 茶多酚生物抗氧化作用的研究进展7 4 1 2 茶多酚对动物脂肪代谢影响的研究进展7 7 1 3 超饲养鹅脂肪代谢特点7 7 2 本研究的目的和意义8 0 3 材料与方法8 l 3 1 试验动物的饲养和日粮的准备8 l 3 2 样品的准备81 3 3 其它指标的测定8 2 3 4 血清样品中生化指标的分析8 2 3 5 肝脏样品中酶和丙二醛的测定8 2 3 6 实验数据统计分析8 3 4 结果与分析8 4 4 1 产肝性能和屠宰性能8 4 4 2 血清生化指标8 6 4 3 肝脏抗氧化指标8 8 4 4 相关性分析

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