《肉牛屠宰工序与低温贮藏时间对牛肉表面微生物多样性影响的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肉牛屠宰工序与低温贮藏时间对牛肉表面微生物多样性影响的研究（56页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
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2、 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导师签名： 日 kL一，II 符号说明 P C R ：P o l y m e r a s eC h a i nR e a c t i o n ，聚合酶链式反应 R F L P ：R e s t r i c t i o nF r a g m e n tL e n g t hP o l y m o r p h i s m ，限制性内切酶片段长 度多态性 R A P D ：r a n d o ma m p l i f i e dp o l y m o r p h i cD N A ，随机扩增多态性D N A 标记 D G G E - d e n a
3、t u r i n gg r a d i e n tg e le l e c t r o p h o r e s i s ，变性梯度凝胶电泳 T G G E ：t e m p e r a t u r eg r a d i e n tg e l e l e c t r o p h o r e s i s ，温度梯度凝胶电泳 S S C P ：S i n g l e S t r a n dC o n f o r m a t i o nP o l y m o r p h i s m ，单链构象多态性 S S R ： S i m p l eS e q u e n c eR e p e a t ，简单重
4、复序列 D N A - D e o x y r i b o n u c l e i ca c i d ，脱氧核糖核酸 R N A ：R i b o N u c l e i cA c i d ，核糖核酸 E B ：E t h i d i u mb r o m i d e ，溴化乙锭 A R D R A ：a m p l i f i e dr i b o s o m a lD N Ar e s t r i c t i o na n a l y s i ，扩增核糖体D N A 限制性分析 R D P ：R e l i a b l eD a t aP r o t o c o l ，可靠数据协议 S S
5、 U ：s m a l l - s u b u n i t ，原核生物核糖体小亚基 O U T o p e r a t i o n a lt a xo n o m i ct m i t ，操纵分类单元 T A P ：T e s tA c c e s sP o i n t ，T - R F L P 分析程序 d N T P ：d e o x y r i b o n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t e ，三磷酸脱氧核糖核苷 D E P C d i e t h y p y r o c a r b o n a t e ，焦碳酸二乙酯 ， _ 一 雏 必 一
6、 目录 中文摘要1 A B S T R A C T ：； 1 引言5 1 1 肉类微生物的分布和多样性；。5 1 1 1 肉类微生物的污染种类6 1 1 2 外在因素对微生物分布和多样性的影响6 1 2 微生物对肉品的安全危害和致腐作用8 1 2 1 微生物对肉品的安全危害8 1 2 2 微生物对肉品的致腐作用8 1 3 微生物多样性的研究方法和发展趋势9 1 3 1 分子生物学技术在微生物学研究中的应用1 0 1 3 2D G G E 的发展和技术原理以及在食品微生物学研究中的应用1 l 1 3 2 1D G G E 的发展和技术原理1 1 1 3 2 2D G G E 技术在食品微生物研究
7、中的应用。1 3 1 3 3T - R F L P 技术的发展和原理以及在食品微生物学研究中的应用1 4 1 3 3 1T - R F L P 技术的发展和技术原理1 4 1 3 3 2T - R F L P 技术的研究应用1 7 1 。4 冷却牛肉研究中存在的问题和本研究的意义1 9 2 材料与方法19 2 1 样品采集及处理1 9 2 1 1 仪器及设备1 9 2 1 2 肉牛屠宰过程样品的采集2 0 2 1 3 冷却牛肉贮藏期间样品的采集及处理2 0 2 2 应用T - R F L P 技术分析牛肉屠宰及不同贮藏时间冷却牛肉微生物菌 群变化的方法2 0 2 2 1 样品细菌总D N A
8、的提取2 0 2 2 2P C R 扩增2 1 2 2 3P C R 产物消化：2 1 2 2 4 微生物群落结构多样性及相似性分析2 l 2 2 5 主要细菌菌属的推测2 2 2 3 应用D G G E 技术分析不同贮藏时间冷却牛肉微生物菌群变化的方法 ：! ：1 2 3 1 样品细菌总D N A 的提取2 2 2 3 2P C R 扩增2 2 2 3 3P C R 产物变性梯度凝胶电泳分析2 3 2 3 4D N A 回收与测序2 3 3 结果与分析2 4 3 1 应用T - R F L P 分析肉牛屠宰及冷却牛肉不同贮藏时间微生物群落多 样性结果分析2 4 3 1 1 根据T - R F
9、 L P 图谱分析细菌菌群结构2 4 3 1 - 2 微生物菌群多样性分析2 7 3 1 3 肉牛屠宰及冷却牛肉贮藏期间微生物菌群结构相似性2 8 3 1 4 根据T - R F L P 图谱预测冷却牛肉贮藏期间的优势菌2 9 3 2 应用D G G E 技术分析不同贮藏时间冷却牛肉微生物菌群变化的结果 乡子析2 9 3 2 1 细菌1 6 S r D N A V 6 V 8 可变区的P C R 扩增结果2 9 3 2 2 冷却牛肉贮藏不同时间样品细菌D G G E 图谱分析3 0 3 2 2 1 冷却牛肉贮藏不同时间样品细菌菌群相似性分析3 1 3 2 2 2 冷却牛肉贮藏不同时间样品聚类分
10、析3 1 3 2 3D G G E 图谱主要条带D N A 序列分析3 2 4 讨论3 3 5 结论3 7 参考文献3 9 致谢4 9 攻读学位期间发表论文的目录及对应章节5 0 2 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 冷却牛肉作为牛肉的主要消费形态，代表生鲜牛肉生产和消费的发 展方向，但是在肉牛屠宰及冷却牛肉生产、运输和贮藏过程中因为污染 微生物的生长繁殖导致产品的腐败，一直是困扰生产者的一个重要问 题，同时引发的肉品安全问题也是消费者最为关注的核心。为研究肉牛 屠宰工序与低温贮藏时间对牛肉表面微生物多样性的影响，本研究采用 T - R F L P 技术与D G G E 技术相结合的方法，分
11、析肉牛屠宰过程中各个关 键点及牛肉低温贮藏不同时间微生物的群落结构及种群变化，分析在肉 牛屠宰过程污染的微生物与冷却牛肉贮藏期间微生物种群相似性，并确 定导致冷却牛肉腐败变质的主要微生物种群。为肉牛屠宰关键点的控制 及冷却牛肉生产、流通和销售过程中的品质和安全监控提供理论依据和 技术支持。结果显示： 1 ) T - R F L P 图谱细菌菌群多样性分析结果显示：屠宰期间去内脏后 腹腔内微生物与胴体劈半后微生物多样性最高；胴体喷淋后样品微生物 多样性显著降低；贮藏期间微生物多样性呈先上升后下降的趋势，由高 到低依次为：冷却牛肉贮藏4 天，贮藏6 天，贮藏2 天，贮藏9 天，贮 藏1 2 天微生
12、物多样性。 2 ) N 牛屠宰过程微生物的多样性明显高于冷却牛肉贮藏期间的微生 物多样性( 去内脏后体表微生物多样性除外) ，在肉牛屠宰过程中检出 而在冷却牛肉贮藏期间未检出限制性片段长度为9 9 b p 类杆菌属 ( B a c t e r o i d e ss p l a n c h n i c u s ) 、1 9 9 b p 梭菌属、球菌属( F u s o b a c t e r i u m 、s 纽1 、 2 0 9 b p 明串珠菌属( L e u c o n o s t o cm e s e n t e r o i d e ss u b s p ) 、4 5 3 b p 艾莫氏
13、菌属 ( A e r o m o n a ss a l m o n w i d as u b s p ) 、4 7 6 b p 棒状杆菌属( M i c r o b a c t e r i u m a u r u m ) 、5 8 3 b p 真细菌( E u b a c t e r i u mt i m i d u m ) 、5 8 6 b p 肉食杆菌属 和真细菌 的细( C a r n o b a c t e r i u m d i v e r g e n s )6 7 5 b p ( E u b a c t e r i u mc o m b e s i i ) 菌。 3 ) 结合T - R F L P 图谱及D G G E 图谱分析细菌菌群多样性发现冷却牛 肉贮藏第2 天与第4 天
