超敏pcr宣讲张忠新

《超敏pcr宣讲张忠新》由会员分享，可在线阅读，更多相关《超敏pcr宣讲张忠新（25页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、? 高灵敏度病毒载载量检测检测 在肝炎 诊疗诊疗 中的意义义 HBV 感染是全球性卫生问题 ? 33% 的人在一生中会感染HBV; ? 成年感染者中5%-10%会转为慢性乙肝, 全球约有 3.5亿慢性HBV感染者; ? 每年,有100万人死于与乙型肝炎相关的肝硬化或 者肝癌; ? = 每30s 夺走一个生命 ? 感染率最高的区域在亚洲,非洲. Lavanchy. J Viral Hepat 2004; World Health Organization, 2008; Elgouhari, Cleve Clin J Med 2008 不同的标志物提供不同的诊断以及治疗监控的信息 诊断启动治疗鉴别

2、 初始应答 预测 治疗应答 监测耐药证明 持续应答 HBsAg HBsAg定量 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc HBV DNA ALT Modified from Pawlotsky et al. Gastroenterol 2008 慢性乙型肝炎 干扰扰素或 口服核苷（酸） 类类似物 口服核苷（酸） 类类似物或 干扰扰素 观观察，如ALT升高， 或肝组织组织炎症坏死 G2,或纤维纤维化S2 无肝硬化有肝硬化 HBeAg+ HBV DNA20000 IU/mL HBeAg- HBV DNA2000 IU/mL ALT2ULNALT4 log 203146576383791071

3、65 68 60 25 5 88 78 63 20 0 20 40 60 80 100 1781571820162410 20 2 年 时 PCR 阴 性 （% ） 高精准HBV DNA检测能更准确预测远期疗效 高灵敏度HBV DNA检测比普通试剂能更准确 判定病毒学突破 HBV DNA (log10 IU/mL) 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 6.0 病毒学突破 Antiviral drug Months 60121816 普通试剂 COBAS Taqman 检测灵敏度 南方医院用67例治疗前为HBV DNA强阳性样本，治疗24周后采 用cobas TaqMan HBV检测与普通检

4、测试剂结果对比 67例患者: HBeAg(+)，ALT2ULN，HBV DNA 6.0 log10 IU/mL -治疗前用cobas检测结果为7.90±0.73 log10 IU/mL -治疗前用普通试剂检测结果为7.11±0.44 log10 IU/mL 检测试剂病例数 HBV DNA分布范围 普通HBV34例 33例 未检测到，100 IU/ml 300-105 IU/ml CAP/CTM HBV 8例 26例 33例 Target Not Detected 274.5E3 IU/ml 104106 IU/ml 普通PCR法 “假阴 性”率高达44% (26/59) c

5、obas高灵敏度HBV DNA检测能更准确判断治疗终点，有 效防漏检（实例1） COBAS HBV 430例血浆 Realtime PCR HBV20 IU/mL 208/430(48.4%) 1000 copies/mL Cobas AmpliPrep/Cobas TaqMan HBV病毒载量系统对慢性乙型肝炎抗病毒治疗监测的意义 李敏伟 沃健儿 倪淑君 王 静 李兰娟 浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室 Data on file cobas高灵敏度HBV DNA检测能更准确判断治疗终点，有 效防漏检（实例 2） 高灵敏度HBV DNA检测的意义 1. 更准确判断治疗起点 2. 更

6、准确判断应答情况 3. 更准确预测远期疗效 4. 更早发现病毒学突破 5. 更准确预测耐药发生 6. 更准确判断治疗终点 正确的临床决策 ? 全球有2亿人感染HCV ? 流行率2.23.0%13 ? 1.7亿慢性携带者2 ? HCV相关的肝脏疾病每年夺取超过25 万人的生命 1 ? 80% 的感染者没有任何的临床症状5,6 ? 4085% 的感染着未得到诊断712 HCV临床背景 1Chevaliez. Clin Microbiol Infect 2011; 2WHO 2003; 3Lavanchy. Liver Int 2009; 4Wiessing et al. Eurosurveilla

7、nce 2008; 5Hoofnagle. Hepatology 2002; 6Lemon et al. Fields Virology 2007; 7 8Schlosser et al. EASL 2009; 9Vermehren et al. DGVS 2010; 10Gane. New Zealand Doctor 2007; 11Wild. Gastroenterology and Endoscopy News 2010; 12http:/www.hepatitiscmsg.org/hep-c-facts-stats.html. 国际指南明确提出高检测灵敏度要求 HCV RNA检测应使

8、用高灵敏度的试剂（最低检出限15 IU/mL） APASL指南 “治疗HCV感染的期望临床终点是清除病毒，即采用最敏感的方法 也无法检测到血清HCV病毒RNA，因此实验室内部检测应采用real- time PCR的方法对病毒进行检测” 持续病毒学应答(SVR) 无应答 基线治疗 复发 部分应答 Undetectable HCV RNA HCV RNA 反弹HCV RNA 检测限 疗效判定时间点 高灵敏度HCV RNA检测能更有效执行RGT策略 病毒学反应定义 RVR 治疗4周时，HCV RNA 转阴 EVR / cEVR 治疗4周时，HCV RNA 阳性 但12周时转阴 DVR/pEVR 治疗

9、12周时，HCV RNA 阳性，但相对于治 疗前基线下降 2 log10，在治疗24周时转阴 NR治疗12周时，HCV RNA 下降2 log10) Peg-IFN/RBV 治疗48周 Peg-IFN/RBV 治疗48周 停止治疗 基线 Wk 4 Wk 12 Wk 24 HCV RNA 阳性 Peg-IFN/RBV 治疗72周 HCV RNA 阴性 HCV RNA 阳性 (2 log10) 此后阴性 停止治疗 基线 Wk 4 Wk 12 Peg-IFN/RBV for 48 weeks HCV RNA 阳性 (2 log10 (IU/mL) 72周 (SVR) 终止治疗 复发 由于pEVR被误

10、判为cEVR，未延长疗程，导致出现所谓的 “复发” Cobas Taqman检测下限 (15 IU/mL) 普通试剂检测下限 (1000 IU/mL) cobas 普通检测 魏来、陈新月等 ，传染病信息 2012年第25卷第3期 223例HCV 患者 非RVR 33.63% (75/223) RVR 66.37% (148/223) 4周 阳性 62.67% （47/75） 假阴性 37.33% （28/75） cobas cEVR 89.24% (199/223) 非cEVR 89.24% (24/223) 普通检测 阳性 79.17% （19/24） 假阴性 20.83% （5/24） 高

11、灵敏度HCV RNA检测指导正确的临床决策 灵敏度较差的检测可能导致不正确的治疗决策 普通检测试剂可能导致不当的缩短疗程，增加复发可能 12周 cobas高灵敏度HCV RNA检测的意义 1. 更有效执行RGT策略 2. 更准确判断应答模式 3. 有效防止pEVR与cEVR的误判，正确指导用药 正确的临床决策 罗氏cobas TaqMan病毒载量检测系统 + ü 全自动病毒载量平台, sample-in, result-out ü 专利的内部标准品定量，保障结果的准确度和精密度 ü 流程灵活方便：试剂即拿即用，实验中随时添加样本、试剂及耗材 ü 实验条码

12、自动扫描设计,方便实验记录及追踪 ü 有效避免污染 罗氏cobas TaqMan病毒载量卓越的检测性能 HBV DNAHCV RNAHCV RNA, V2 (已上市) 灵敏度 (LOD)20 IU/ml 15 IU/ml15 IU/ml 线性范围20 - 1.7E8 IU/ml43 6.9E7 IU/ml15 1.0E8 IU/ml 特异性100%100%100% 亚型 A-H; pre-core mutants Gt 1-6Gt 1-6 样本量650 µl1 ml650 uL 1.2 x 108 IU/mL HBV NC LPC HPC - + - - + - 阴性质控品

13、 低浓度阳性质控品 高浓度阳性质控品 正常人血浆 SK24 Rack 1 NC LPC HPC + - + + - + SK24 Rack 2 NC LPC HPC - + - - + - SK24 Rack 3 NC LPC HPC + - + + - + SK24 Rack 4 每批4架 重复检测5批 样本棋盘放置研究显示零交叉污染 结果: 全部阴性质控品及 正常人血浆结果报告均为 “Target Not Detected” *Roche Internal Studies Data on File 罗氏cobas TaqMan 病毒载量有效防交叉污染 WHO 标准品 0 0.5 1.0 1

14、.5 -0.5 -1.0 -1.5 602x1032x1042x105 Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver Annual Meeting. Mean log difference COBAS Taqman HBV DNA 普通试剂 1 普通试剂 2 病毒学应答 治疗起始浓度 Expected level (IU/mL) 多中心评估: WHO标准品溯源性对比 正确的临床决策需要可靠的实验室结果 只有cobas TaqMan 全部结

15、结果符合溯源性要求 Genotype C Genotype B 0 0.5 1.0 1.5 -0.5 -1.0 -1.5 602x1022x1032x1042x1052x106 Li J., et al. (2011). Poster presentation at the Asian Pacific Association for the Study of the Liver Annual Meeting. Mean log difference 602x1022x1032x1042x1052x106 COBAS Taqman HBV DNA 普通试剂1 普通试剂2 Virologic response NAs Decision to treat Virologic response NAs Decision to treat Expected level (IU/mL)Expected level (IU/mL) 只有cobas TaqMan HBV 全部结结果符合准确性要求 多中心评估: 检测灵敏度及准确性对比 谢谢谢谢 ！ 祝工作顺顺利，身体健康！