《分子生物学技术在昆虫学研究中的应用——利用rapd技术研究东北地区十八种小卷蛾的亲缘关系及落叶松毛虫卵寄生蜂的分子监测》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子生物学技术在昆虫学研究中的应用——利用rapd技术研究东北地区十八种小卷蛾的亲缘关系及落叶松毛虫卵寄生蜂的分子监测（45页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、东北林业大学 硕士学位论文 分子生物学技术在昆虫学研究中的应用利用RAPD技术研究 东北地区十八种小卷蛾的亲缘关系及落叶松毛虫卵寄生蜂的分 子监测 姓名：刘延滨 申请学位级别：硕士 专业：森林保护 指导教师：迟德富 20040601 摘要 本文楚翻用R A P D P C R 技术辩东j E 地区黉卷娥族的十八秘小卷蛾匏熬溺缀 进行随机扩增，以期能对其亲缘关系进行分丰斥，从黼能构建出系统发育械，了解 这些貔秘落仡方嚣的穗感。麸秘纛浅浆系统发窝秘与形态学攒述毙对舞褥剐缝 论：翻弼R A P D 披术掰搦建的系统褥放分子水平部分反映了的豹种进化的客观 规律。从祭统树可以稽如花楸烟卷蛾同其余十七萃申
2、楚可区分的两个类群，在形态 掌上熬体浚涮楚蕊撤濑卷躐雅戆羚童疆器无囊突，霜其它季孛炎舆肖，嚣誊楚一敲 的。忍冬戏斜卷蛾和松襁卷蛾的相似系数达1 0 3 0 1 ，说明两个萃申的祭缘关系搬近， 形态学的魄较上也体现出在两个萃申的生殖器的澎恣结构上有竣多的相似之处，比 如耀健终生疆器懿瓜影突都宽+ 憨器瓣函形；耀髅羚生殖嚣黥瀵突鸯锤竣突怒麓。 但是它们魁属于两个不同的属，而潮为一个属的忍冬双斜卷蛾和棉花双斜卷蛾的 楣似系数剿为O 0 5 0 5 ，袋缘关系棚去甚远。两卷盼矛詹髫蔚还没鸯令人信服的孵 释。这也反浚出R A P D 技术其蠢一定静局羧瞧，黉褥建密豹糖粪实懿系统发育 树必须综合各方面的资
3、料进行分析。 本论文鼹另部分魑关于藩盼松毛虫郛寄生蜂分子检测的魄容。遗过本文中 的实验诞鳃I T S 2 垮列用于落时松毛鱼努寄生赡稳麓定是可行的，经扩增后的落 叶松龟擞卵寄生蜂和旗叶松毛虫的I T S 2 电泳豳谱髓示出落叶松链虫卵跳小蜂、 落叶松罨敷爨郛蜂、捡罨盎郛宽缘垒，l 、簿巍落咛羧系虫I T S 廖捌的片段长发怒完 全不黼的，并且干扰蜜验也表明餐露黪谱带怒突全可以区分无干扰。但楚在实际 的应用。E 还存在一定的游题，因为所分析的寄嶷蜂麟于三个科，没有近缘瓣或娥 撩静的院鞍，医蠢不越孬谈鸯予撬黪霹能往。隧露还需要大爨的实验去验谖秘麟 决所出瑗的问题。 关键弼：R A P D ；綮缘关
4、系；I T S 2 ；寄生蜂 黧紫、警辫秘麓 勿垒文公裙 ” A b s t r a c t T h i sp a p e ri sa b o u tt h eg e n e t i cr e l a t i o n s h i po ft h e18k i n d so f o t e t h r e u t i dm c l t h s f r o mt h eN o r t h e a s to fC h i n ab yR A P D ，a n dr e q u i r e st h ee v o l u t i o ni n f o r m a t i o no f t h e s
5、es p e c i e s C o m p a r i n gt h e p h y l o g e n i c t r e eb yR A P Dw i t h m o r p h o l o g i cd e s c r i p t i o n t h ea u t h o rd r e wac o n c l u s i o nt h a ti th a sr e f l e c t e dt h ee v o l u t i o nl a wp a r t l y 。T h e s e s p e c i e sa r ed i v i d e dt w og r o u p s ，
6、o n ei sC a p u av R g a n a ，a n dt h eo t h e ri st h er e s t T h e f e m a l ee x t e r n a l g e n i t a lo r g a n so ft h er e s th a sas i g n n m ，C a p u ay u l g a n an o t T h e s i m i l a rc o e f f i c i e n to f C l e p s i s r u r i n a n aa n dP a n d e m i sc i n r t a m o l f l e
7、 c l r t c ti s1 ，0 3 0 1 ，i ti s e x p l a i n e dt W Ok i n d s r e l a t i o n s h i pi sv e r yc l o s e ，a n dt h e ya r em u c hm o r p h o l o g i c s i m i l a ro nt h em a l ee x t e r n a lg e n i a lo r g a n s ，s u c ha sb r o a dU n C B S ，c i r c u l a rv a l v a e ；t h e r e a r eh a
8、m m e r - l i k ep r o t u b e r a n c eo nt h ef e m a l ee x t e r n a lg e n i t a lo r g a n s B u tt h e ya r e b e l o n g i n g t ot w o g e n u s e sr e s p e c t i v e l y C l e p s i sr u r i n a n aa n dC t e p s i s p a l l i d a n aa r et h e s a m eg e n u s ，t h e i rs i m i l a rc o
9、e f f i c i e n ti s 0 0 5 0 5 W h y ? A tp r e s e n t ，t h e r e i sn o tt h e r e a s o n a b l ea n s w e r 。I no r d e rt Os e t t i n gu pt h et r u ep h y l o g e n i ct r e e , a v es h o u l dc o l l e c t m u c hi n f o r n a a t i o n I nt h i st h e s i st h ea u t h o rt h i n ki ti sf
10、e a s i b l ef o rt h er i b o s o m a l I T S 2 ( i n t e r n a l t r a n s c r i b e ds p a c e r s2 ) D N A s e q u e n c e su s i n g f o rt h ei d e n t i f i c a t i o no ft h ep a r a s i t o i do f D e n d r o l i m u s s u p e r a n s Se g g s T h el e n g t ho f I T S 2 s e q u e n c e so
11、f T e t e n o m u st e t r a t o m u s ， P a c 砂n e l z r o l q s o l i t a r i u m ，O o e n c y r t u sp i n i c o l u s a n d D s u p e r a m , i s d i f f e r e n t c o m p l e t e l y T ov e r i f y 也er e l i a b i l i t y t h ed i f f e r e n ts p e c i e sD N A w e r ec o m b i n e da n d P C
12、R sW e r ep e r f o r m e dt o a m p l i 每s p e c i e s s p e c i f i cD N Af r a g m e n t s R e s u l t sf r o m s p e c i f i c i t yt r i a l s i n d i c a t et h a t t 1 1 e yC a nb ed i s t i n g u i s h e d H o w e v e r ，t h e r em a yb e p r o b l e m s o na c t u a l a p p l i c a t i o n
13、B e c a u s e t h r e e s p e c i e sb e l o n g t ot h r e ef a m i l i a r r e s p e c t i v e l ya n dt h e r ei s n tt h ec o m p a r i s o no f t h ec l o s es p e c i e so rt h es i b l i n g ，t h e r e m a yb es o m e i n f e r e n c et ot h er e s u l t s W es t i l ln e e d p l e n t y o fe
14、 x p e r i m e n t s a f t e r w a r d s K e y w o r d s ：R A P D R e l a t i o n s h i p lI T S 2 ；P a r a s i t o i d 分子生貔学技术在毙虫学磷巍孛豹瘟瑶 前言 瓣痰楚藿雾上簸繁盛戆动魏秘嚣，拿转靼穆类繁多，分毒广泛，畿农昆虫 1 0 0 0 万种以上。对大多数昆虫的纪录、分类和识别主要靠形态学特征、地理分 布特征和行为特镊，然而很多物种无法从袭型分开，常常遇到趋同进化 ( C o n v e r g e n t e v o l u t i o n ) 等海题，逡残诲多分炎弱
15、题基嚣岽决，因越，努颓开震 更深入的研究。 分子生物学技术的兴起促使了分类学的发展。6 0 年代出现了以同工酶和细 麓莨索c 等蛋白艨分子结梅戈袋擦鳇分类学磷究。其中以闲工酶对果蠛进行分 类的研究最早，随籍在很多昆虫羽分类和进化研究中得至9 广泛应用。聚合酶链式 反应军口D N A 的指纹技术促进了分子水平进行分类的研究。而后形成了。- I 7 新的 学科分子系统学( m o l e c u l a rs y s t e m a t i e s ) ，英是检测、撩述并解释生物在分 子东平( 蛋自质和核酸的承平) 的多样往及其演亿规律的学科。分子系统学研究 的主臻内容包括群体遗传结构( P o
16、p u l a t i o ng e n e t i cs t r u c t u r e ) 、分类学( T a x o n o m y ) 、 系统发商( P h y l o g e n y j 积分子进化( M o l e c u l a re v o l u t i o n ) 等。昆虫分子系统学的 磅究一是校疆蛋自袋与酶，Z 2 莛掇据孩酸。酶魄濠燕在分子承平上疆究瑟虫遗传 与进化最经济有效的方法，可以有效的揭示自然居群中遗传结构、基因流动、变 化系统、选择作用和系统发育等问题。核酸分析技术主要有：R F L P 分析、染色 俸纛位杂交、D N A 摆绞鹜谱按零、P A P D - - P C R 菝术、A F L P 技零等。 程本研究中使用的是R A P D 技术，全称怒随机引物扩增多态性。其核心是 利用随机引物对物种的基因组进行扩增，从而能了解种群的遗传变异程度和种群 凌遗黢分纯程度、瓣天数最盎纛褰塞生臻墅遴孳亍鉴别溢及程溺个薅懿遗传标记隧 鉴定索缘关系等。对于昆虫种以上的分类阶元目前还未
