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1、电子显微学报J C h i n E | e c t r M i c r o s eS o c 2 0 ( 4 1 ：5 3 7 ，5 3 82 0 0 1 矩5 3 7 游离细胞超快扫描电镜样品制备法 李向党 ( 西安第四军医大学电镜中m ，西安7 1 0 0 3 2 ) 在游离细胞的扫描电镜样品制备方法中，需要解决的关键问题是如何使细胞均匀而又不重 叠地分布于盖玻片上，同时在系列处理过程中细胞不易脱落。用常规的方法进行处理，步骤 繁琐，所用时间又长且在样品处理过程中细胞有丢失现象。我们用细胞沉淀器加微波辐射技术 进行游离细胞快速扫描电镜样品制备，获得满意的结果，现介绍如下。 材料和方法 1
2、主要仪器：本实验所用微渡炉的型号为W B L - 5 3 0 - 0 1 型( 国营陕西商洛通达电器厂生产) ，工作 频率2 4 5 0 M H z ，最大输出功率为5 3 0 W ，微波辐射时在微波炉底盘一边放一个5 0 0 m l 烧杯，内盛 5 0 0 m l 水以吸收微波辐射时发出的电磁波，使温度均匀升高。本实验所用细胞玻片离心沉淀器 的型号为F M U 5 型( 西安第四军医大学修配所生产) 。 2 方法：将8 0 0 型电动离心机轴心螺帽取下，接上细胞玻片离心沉淀器的沉淀管架。取已准备好 的盖玻片放在载玻片中央，其上放一张有孔滤纸，一同夹在沉淀管中间，拧紧沉淀管的螺丝。 取病人血液
3、、胸水等游离细胞放人3 戊二醛固定液中，如是血液细胞应在固定液中加 1 肝素抗凝。之后取悬液0 1 m l 加入沉淀管内，2 0 0 0 r r a i n 离心5 m i n 。取下有细胞沉淀的盖玻 片置于装有3 戊二醛的小瓶中，用通力牌微波炉进行微波辐射固定5 s ，功率为5 3 0 W ，温度为 3 0 ；用0 1 m o l L 的磷酸缓冲渡微波辐射清洗3 次，每次1 0 s ，功率1 0 6 W ，温度2 6 。C ；用1 锇 酸微波辐射固定5 s ，功率5 3 0 W ，温度3 2 ；再用0 1 m o l L 的磷酸缓冲液微波辐射清洗3 次，每 次1 0 s ，功率1 0 6 W
4、 ，温度2 6 ；用、5 0 、8 0 、9 0 、9 5 、1 0 0 乙腈的水溶液梯度脱水置 换，每次2 0 s ，功率1 0 6 W ，温度2 9 。乙腈真空干燥1 5 r a i n 。用J F C 1 1 0 0 型( 日本电子公司生产) 离子溅射仪喷镀6 m i n 。用S - 5 2 0 型扫描电镜观察。 结果和讨论 用上述方法处理的扫描电镜样品，细胞丢失很少，分散均匀。细胞表面结构丰满，层次清晰， 表面没有污染。 此方法因细胞是直接离心沉淀在盖玻片上，故它与盖玻片粘附比较牢固，在阱后的固定、清 洗、脱水等一系列处理过程中细胞不易脱落。 此方法样品制备全过程仅需2 h ，而常规方
5、法需要1 2d 。因此，本法非常适用于生物医学 特别是临床快速诊断。使用本法需注意微波辐射后的溶液温度不要超过5 0 ，否则会造成细胞 超微结构的损伤。 电子显微学报J c h i E l tM i c s o c 5 3 8 2 0 ( 4 ) ：5 3 7 5 3 82 0 0 1 年 图1 用快速扫描电镜样品制备法处理的病人血液细胞表面图像( B a r = 1 2 邮a ) 。 图2 用常规方法处理的病人血掖细胞表面图像( B a r = 1 2 t t m ) ， 参考文献 1 W i l dP Ha 1 E U R E M 8 81 9 8 8 3 ：3 3 9 【2J H o t
6、 i aY ，W a t a i rN R a p i dp r e p a r a t i o n 。ft i s s u eb l o c k sf o rt r a n s m i s s o ne l e c t r o nm i c r o s c o p yu s i n gm i c r o w a v e 胁d 】蛐o n J C h i nM i c r o s c o p y ，1 9 8 9 ，2 2 ( 5 - 6 ) ：9 3 6 【3 李向党，刘健第四军医大学学报，1 9 9 2 ，1 3 ( 5 ) ：3 5 2 4 李向党中华物理医学杂志，1 9 9 3 ，1 5 ( 2 ) ：9 5
