红细胞检验 医学技术学院

《红细胞检验 医学技术学院》由会员分享，可在线阅读，更多相关《红细胞检验 医学技术学院（93页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、1,第二章红细胞手工检验,-红细胞检验,主讲人：丁肖华 医学技术学院,红细胞检查,红细胞计数 血红蛋白测定 血细胞比容 红细胞平均指数计算 网织红细胞计数 嗜碱性点彩红细胞计数 红细胞沉降率测定,3,红细胞检查,红细胞的发育过程,造血干细胞 早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞 网织红细胞成熟红细胞,上一页,下一页,返 回,红系祖细胞原始红细胞,成熟红细胞 120天,上一页,下一页,返 回,铁 铁代谢 原卟啉 胆色素代谢 珠蛋白 蛋白质代谢,衰老红细胞,红细胞的发育过程,6,检测方法 1.手工显微镜法： 2.血液分析仪法：,一、 红细胞计数,手工显微镜法,7,定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，

2、滴入改良Neubauer计数板，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数。,8,改良牛鲍计数板,计数板,9,10,红细胞稀释液组成与作用,稀释液 组成 作用 备注,Hayem液 NaCl、Na2SO4、HgCl2 调节渗透压、增加红细 胞悬浮性和防腐作用,高球蛋白血症时，蛋白质沉淀致红细胞凝集,枸橼酸钠稀释液 NaCl、枸橼酸钠、甲醛 NaCl和枸橼酸钠调 节渗透压 ，枸橼酸钠 具抗凝，甲醛防腐,生理盐水 生理盐水 急诊时用 1%甲醛生理盐水 甲醛、生理盐水 急诊时用,11,【操作】 1.准备计数板 2.加稀释液：2ml 3.加血：10l混匀 4.充池 5.计数

3、6.计算：红细胞数=N/5*25*10*200*106/L,12,1.分析前质量控制 患者准备、标本采集、存储温度和时间 2.分析中质量控制 计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响 3.分析后质量控制 结合临床资料,质量控制,13,1.手工显微镜法 （1）血液分析仪的校正 （2）白细胞减少时的对照核实。 （3）血小板计数受小红细胞干扰时的校正 2血液分析仪法 方法精确，且操作简便、快速，已广泛应用。,方法学评价,14,成年：男性（45.5）1012/L 女性（3.55.0）1012/L 新生儿： （6.07.0）1012/L,参考值,15,1生理性变化,(1)年龄与性别的 差异 (2)精神

4、因素 (3)剧烈体力运动和劳动 (4)气压降低 (5)妊娠中、后期,临床意义,16,2病理性变化,(2)红细胞增多 1)原发性红细胞增多 2)继发性红细胞增多 3)相对性红细胞增多,(1)红细胞和血红蛋白量减少 1）红细胞生成障碍2）造血原料缺乏 3）利用障碍红细胞4）破坏过多和失血,临床意义,17,医学决定水平,高于6.8l012/L，应采取相应的治疗措施。 低于3.51012/L为诊断贫血的界限，应继续寻找原因。 低于1.5l012L应考虑输血,指该项目结果如高于或低于某一个值时就应该采取一定的措施，为患者处理起提供依据的作用。,临床意义,血红蛋白 (血色素， Hb 或 HGB) 组成,二

5、、血红蛋白测定,珠蛋白：4条，种属特异性 亚铁血红素：4个，无种属特异性,19,每个 Hb 分子由 2 条类肽链和 2 条类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有 1 个亚铁血红素。,在人体不同生长时期， Hb 种类与比例不同：,21,定义：血红蛋白测定是测定外周血液中各种血红蛋白的总浓度，用g/L表示,血红蛋白测定,22,1氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法 2其他测定法 十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法 叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法 碱羟血红蛋白法 沙利(Sahli)酸化血红蛋白法 溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（CTAB）等,检测原理,23,HiCN转化液：即文齐氏液 540 nm 处

6、有一吸收波峰，用分光光度计测定 换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或制备标准曲线供查阅。,CN-,血红蛋白,高铁血 红蛋白,氰化高铁 血红蛋白,高铁氰化钾,540nm,血红蛋 白浓度,吸光度,24,血红蛋白浓度计算公式： Hb(g/L)=A540HiCN/4464458/1000251 =A367.7 A540HiCN：测定管吸光度 44：毫摩尔消光系数 64458/1000：1mmol/L Hb溶液中所含Hb克数 251为稀释倍数,25,血红蛋白,SDS-Hb,SDS,540nm,血红蛋 白浓度,吸光度,十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法,26,27,分析前质量控制：同红细胞计数 分析中

7、质量控制 技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯光径需校正 HiCN转化液：棕色玻璃瓶 HiCN参考液：关键 质控物：室内质控 分析后质量控制：同红细胞计数,质量控制,28,成年：男性：120160gL； 女性：llO150gL。 新生儿：170200gL。 老年(70岁以上)： 男性：94122gL；女性87112gL。,参考值,29,轻度贫血，成年男性Hb120g/L， 成年女性110g/L； 中度贫血90g/L； 重度贫血60g/L； 极度贫血30g/L。,临床意义,31,血细胞比容(HCT)，以前称为红细胞压积，是指在一定条件下经离心沉淀压紧的红细胞在全血标本中所占体积的比值

8、。 测定目的：1.诊断贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多 2.测定血液稀释和血液浓缩的变化 3.计算MCV和MCHC,三、 血细胞比容测定,1.常量法(Wintrobe法)和微量法(microhematocrit) 将抗凝血液标本置于孔径统一的温氏管或毛细玻璃管中，以一定转速离心一定时间后，计算红细胞层占全血的体积比。 5层：血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。 2.血液分析仪法 由红细胞平均体积和红细胞计数两项指标后导出， Hct红细胞计数红细胞平均体积。,检测原理,34,1.操作规范化 避免操作误差，如抗凝量不准，混匀不充分，离心速度不均等。 2注意干扰因素

9、 假性增高：红细胞形态异常和红细胞增多时应注明， (细胞变形性减低和数量增多 血浆残留量增加)； 高网织红细胞或高白细胞等 假性降低：体外溶血、自身凝集等。,质量保证,参考值,男性：0.420.49； 女性：0.370.48,临床意义,HCT的临床意义与红细胞计数相似。 HCT减低是诊断贫血的指标， HCT的高低与红细胞数量及平均体积、血浆量有关 主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断、血液稀释和血液浓缩变化的测定、计算红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白浓度等。,临床意义,1临床补液量的参考 各种原因导致脱水时，HCT都会增高，补液时可监测HCT，HCT恢复正常表示血容量得到纠正。

10、2真性红细胞增多症诊断指标 当HCT大于0.7，RBC为(7-10)X1012L, Hb大于180gL，即可诊断。,临床意义,3红细胞平均指数计算的基础数据 红细胞平均值(MCV、MCHC)可用于贫血的形态学分类。 4血液流变学指标 HCT增高表明红细胞数量偏高， 全血黏度增加，严重者表现为高黏滞综合征， 微循环障碍、组织缺氧。 HCT与其他血液流变学指标联合应用，可对一些血栓前状态进行监测。,40,四、 红细胞平均值,红细胞平均体积(mean corpuscular volume，MCV)，指红细胞群体中单个红细胞体积的平均值，以飞升(f1)为单位； 平均红细胞血红蛋白含量(mean cor

11、puscular he-moglobin，MCH)，指红细胞群体中单个红细胞血红蛋白含量的平均值，以皮克(pg)为单位； 平均红细胞血红蛋白浓度(mean corpuscular Hemoglobin concentration，MCHC)，指测定红细胞比容时被压紧的红细胞血红蛋白浓度(gL)。,(1)MCV=每升血液中红细胞体积/每升血液中红细胞个数=Hct/RB(f1) (2)MCH=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞个数=Hb/RBC(pg) (3)MCHC=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞比容= Hb/ Hct,41,检测原理 1手工法 同时计数红细胞，测定血红蛋白和血细

12、胞比容，计算出红细胞3个平均指数。 例：RBC为3.50X1012L，Hct为0.36，Hb为120g/L Hct 0.36 MCV （fl） 103（fl） RBC 3.50X1012L Hb Hb MCH （pg）， MCHC（ gL ） RBC Hct,检测原理 2血液分析仪 能直接导出MCV的值，再结合仪器直接测定的RBC和Hb，计算出MCH和MCHC MCHHbRBC， MCHCHb(RBCMCV)。,44,参考值,临床意义,作为贫血的红细胞形态学分类,47,五、 网织红细胞计数,网织红细胞(reticulocyte，Ret)是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞 胞质中残存

13、嗜碱性物质核糖核酸(RNA)，经煌焦油蓝等活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，连缀成线，线连接成网。 属于尚未完全成熟的红细胞(当嗜碱性物质消耗殆尽后才被视为成熟红细胞)，一般为89.5m。,48,49,检测原理 1.普通光学显微镜法 活体染色（新亚甲蓝或煌焦油蓝)的碱性着色基团 网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷) RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩， 蓝色的点状、线状或网状结构 ， 显微镜下计数1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百分比或分数数表示。,检测原理 流式细胞仪法 2仪器法 网织红细胞计数仪 血液分析仪法。 荧光染料与网织红细胞中RNA结合， 发出特定颜色的荧光进行RNA

14、定量 精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数(Ret)。 将网织红细胞分成高、中、低荧光强度网织红细胞 比率(HFR 、MFR、 LFR) 并计算网织红细胞其他参数。,血液分析仪法 提供与网织红细胞相关的多个参数， 网织红细胞绝对值、 网织红细胞百分比、 网织红细胞平均体积、 网织红细胞血红蛋白分布宽度、 网织红细胞血红蛋白浓度、 网织红细胞平均血红蛋白浓度、 LFR、MFR、HFR、 网织红细胞成熟指数。,53,【质量保证】 以手工计数法为重点。 1染料选择,【质量保证】 2正确辨认网织红细胞 外周血中网织红细胞主要为型，凡含有2个以上 网织颗粒的红细胞均应计为网织红细胞。 3网织红细胞计数

15、方法 (1)Miller窥盘： (2)显微成像系统：计算机和细胞形态分析软件， HFR：粗颗粒堆积成网状。 MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。 LFR：细胞内含15个以下细小颗粒,网织红细胞百分数： 成人和儿童:0.0050.025 新生儿: 0.020.06 网织红细胞绝对数： 成人和儿童: (2484)X109L,参考值,临床意义,1评价骨髓增生能力，判断贫血类型。 (1)网织红细胞增多：表示骨髓造血功能旺盛， 各种增生性贫血 (2)网织红细胞减少：常见于再生障碍性贫血 (3)鉴别贫血：,临床意义,2评价疗效 (1)观察贫血疗效：贫血随访 缺铁贫或巨幼贫有效治疗后，23d后Ret开始上升，710d达到最高峰(约10)，2周后渐降至正常。 (2)骨髓移植后监测骨髓造血恢复： 骨髓移植后第21天，如Ret大于15X109L，常表示无移植并发症； 若骨髓开始恢复造血功能，首先HFR和MFR上升，其次为网