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1、 8 with idiopathic inflammatory myopathy. Clin. Exp. Immunol. 109: 32-40 (1997). 16. Zimmerman, C., Fabini, G., Hfler, E., Smolen, J.S., Steiner, G. Analysis of anti-Ro52 antibodies in sera of healthy subjects. Poster Abstract. 17. Prince, H. E., Hogrefe, W. R. Evaluation of a Line Immunoblot Assay
2、for Detection of Antibodies Recognizing Extractable Nuclear Antigens. J. Clin. Lab. Anal. 12: 320-324 (1998). 医疗器械生产企业许可证编号：浙食药监械生产许医疗器械生产企业许可证编号：浙食药监械生产许 20050005 号号 产品标准编号产品标准编号:YZB/国国 0662-2006 医疗器械注册证书编号医疗器械注册证书编号:国食药监械（准）字国食药监械（准）字 2006 第第 3400766 号号 生产地址：浙江省杭州市龙井路生产地址：浙江省杭州市龙井路 38 号号 电话：电话：057
3、1-87975512， 传真：传真：0571-87975212 ENA/ANA组合组合(IgG) 欧蒙斑点法检测试剂盒说明书欧蒙斑点法检测试剂盒说明书 ENA 组合组合 订货号订货号 靶抗原靶抗原 Ig类型类型 基质基质 规格规格 DA 1590-1001-1 G DA 1590-1003-1 G DA 1590-1005-1 G nRNP/Sm, Sm, SS- A, SS-B, Scl-70, Jo-1 IgG 抗原包被的 实验膜条 10 x01 (10) 1003（30） 1005（50） 适应症适应症：夏普综合征（混合性结缔组织病，MCTD），系统性红斑狼疮，干燥综合征（Sjoegre
4、ns syndrome），进行性系统性硬化症，皮肌炎/多肌炎。 实验原理实验原理：该欧蒙斑点法检测试剂盒可用于人抗nRNP、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70 和Jo-1等6种抗原 IgG类抗体的体外定性检测。试剂盒中载片上每个反应区内固定了2条实验膜条。膜条上平行包被了经亲 和层析纯化的上述抗原。在第一次温育时，已稀释的病人样本与膜条上的抗原反应。如果样本阳性，特 异性的IgG抗体（也包括IgA和IgM）将与相应抗原结合。为检测已结合的抗体，加入酶标抗人IgG抗体（ 酶结合物）进行第二次温育，然后加入色原底物液以产生颜色反应。 试剂盒组成试剂盒组成 成分成分 规格规格 标志标志 1. 反
5、应区中固定有实验膜条的载片，膜条上包被有：nRNP/Sm、 Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、 Jo-1。 10张 .SLIDE. 2. 阳性对照（人IgG），直接使用。 10.2ml .POS CONTROL. 3. 阴性对照（人IgG），直接使用。 10.2ml .NEG CONTROL. 4. 酶结合物：碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG抗体，10倍浓缩。 10.5ml .CONJUGATE 10x. 5. 样本缓冲液，直接使用。 1.SAMPLE BUFFER. 60ml 6. 清洗缓冲液，10倍浓缩。 2100ml .WASH BUFFER 10x. 7. 底物液，四唑硝基苯胺兰/5
6、-溴-4-氯啶-磷酸盐（NBT/ BCIP） ，直接使用。 14.0ml .SUBSTRATE. 8. 产品说明书 1份 LOT 试剂批号 储存温度 IVD 体外检测 开封前的保存期限 实验时需要加样板和欧蒙斑点法专用洗杯，试剂盒中不提供，可从欧蒙公司购买。 储存和稳定性储存和稳定性：2-8C保存，不要冰冻，未开封前，试剂盒中各成分可稳定至所标示的有效期。 试剂的准备和稳定性试剂的准备和稳定性 注意：注意：所有试剂在使用前均应在室温（18-25C）平衡30分钟左右。从第一次使用起，试剂若2-8C保存 并且保持无污染，可稳定至所标示的有效期。 - 载片载片：直接使用。为防止膜条包被有抗原的一面发
7、生冷凝，只有当载片平衡到室温后方可打开保护 袋。不要触及实验膜条。一旦打开保护袋，载片应立即温育，不要使用保护袋破损的载片。 - 加样板加样板：检查加样板是否反应区亲水而周边疏水。若不是，可用家用清洁剂清洗。再用足量的水冲 洗，并用纸巾擦干净。 2 7 ? 阳性和阴性对照阳性和阴性对照：直接使用。 ? 酶结合物酶结合物：10倍浓缩。用干净的吸管吸取需要量用样本缓冲液1:10稀释。 如，可取30ul酶结合物用 270ul样本缓冲液稀释。已稀释的酶结合物应在同一个工作日用完。 ? 样本缓冲液样本缓冲液：直接使用。 ? 清洗缓冲液清洗缓冲液：10倍浓缩。用干净的吸管吸取需要量用蒸馏水1:10稀释。如
8、，可取20ml浓缩清洗缓冲液 用180ml蒸馏水稀释。工作浓度的清洗缓冲液应在同一个工作日使用。 ? 底物溶液底物溶液：直接使用。因对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。 警示：警示：对照血清已用ELISA和间接免疫荧光法检测，HBsAg、抗HIV-1和HIV-2抗体为阴性。但试剂盒中所 有成分均应视作潜在的传染源小心处理。一些试剂（缓冲液、底物液）有毒性，应避免接触皮肤。 废物处理：废物处理：患者样本、对照血清和温育过的载片应当作传染源处理，其它试剂不必单独收集，除非有官 方的明确规定。 患者样本的准备和稳定性患者样本的准备和稳定性 样本样本：人血清，或EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆。 稳定性
9、稳定性：待检样本于2-8C可稳定14天，已稀释的样本应在同一个工作日检测。 样本稀释样本稀释：用样本缓冲液1:101稀释，如可取10ul血清用1.0ml样本缓冲液稀释并混匀。 实验操作：滴定平板技术实验操作：滴定平板技术 为了使免疫分析标准化，欧蒙欧蒙发明了滴定平板技术滴定平板技术：滴加样品至加样板加样板反应区，然后将载片载片盖在加 样板表面的凹槽里，载片上所有包被有抗原的膜条均与液滴接触，反应同时开始，系统的几何结构决定 了液滴的位置和高度。可在一致的反应条件下同时温育任何数量的样本。 加样加样： 滴加50ul已稀释血清已稀释血清至加样板反应区，避免产生气泡，在开始温育前加完所有样本。 温育
10、温育 第一次第一次： 将载片盖在加样板的凹槽里，反应即开始。确保每个样本均与载片上的膜条接触，而且样 本间没有相互接触。在300rpm旋转摇床上室温温育30分钟分钟。 清洗清洗： 将清洗缓冲液盛于烧杯中，流水冲洗载片后放入小杯中浸洗15分钟。分钟。 加样加样： 滴加50ul已稀释的酶结合物（碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体）于加样板的每个反应区。 在开始温育前加完所有反应区。 温育温育 第二次第二次： 将载片从清洗缓冲液中取出，只需擦干背部及四周后置于加样板的凹槽里。确保每个样本 均与载片上的膜条接触。在300rpm旋转摇床上室温温育30分钟分钟。 清洗清洗： 将清洗缓冲液盛于烧杯中，流水冲洗载
11、片后立即放入小杯中浸洗15分钟分钟。 加样加样： 滴加50ul底物液于加样板的每个反应区。在开始温育前加完所有反应区。 温育温育 第三次第三次： 将载片从清洗缓冲液中取出，只需擦干背部及四周后置于加样板的凹槽里。确保每个样本 均与载片上的膜条接触。在300rpm旋转摇床上室温温育10分钟分钟。 清洗清洗： 用去离子水或蒸馏水冲洗载片，风干15分钟分钟。 结果判断结果判断: 观察反应区内各抗原带着色的深浅。 参考文献参考文献 1. Fritzler, M.J.: Autoantibodies in Scleroderma. Journal of Dermatology 20: 257-268 (
12、1993). 2. Moore, T.L., Weiss, T.D., Neucks, S.H., Baldassare, A.R., Zuckner, J.: Extractable nuclear antigens. Seminars in Arthritis and Rheumatism 10: 309-318 (1981). 3. Nakamura, R.M., Tan, E.M.: Recent advances in laboratory tests and the significance of autoantibodies to nuclear antigens in syst
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